中国中药杂志
China Journal of Chinese Materia Medica 중국중약잡지
- 主管单位： 中药通报
- 主办单位： 中国科学技术协会
- 影响因子： 1.71
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 11-2272/R
- 国内刊号： 李禾
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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真武汤对NRK-52E细胞“AVP-V2R-AQP2”通路的调控作用研究
该实验探讨真武汤对体外培养NRK-52E细胞AQP2相关的“AVP-V2R-AQP2”通路的调控作用,初步揭示真武汤调节水分转运平衡的部分分子机制.取SPF级雄性SD大鼠48只,随机分成8组,每组6只.分别给予蒸馏水或真武汤22.68 g·kg-1·d-1(按生药量计)灌胃,心脏采血,3 000 r·min-1离心分离制备含药血清.然后体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E细胞,给予上述不同给药天数和日给药次数制备的真武汤含药血清和血管加压素类似物1-去氨基-8-右旋-精氨酸加压素(1-desamino-8-D-arginine vasopressin,dDAVP)进行干预,采用实时无标记动态细胞分析技术(Real time cell analysis,RTCA)检测细胞增殖情况;免疫荧光法检测细胞中V2R,AQP2蛋白的分布情况;Western blot法检测V2R,PKA,AQP2的蛋白表达量;Real-time PCR法检测AQP2mRNA水平.结果显示,与正常大鼠血清组比较,每天给药2次连续给药7d制备的真武汤含药血清作用于NRK-52E细胞约24h,可显著上调其AQP2的mRNA水平(P＜0.01);显著增加V2R,PKA,AQP2的蛋白表达量(P ＜0.05,P＜0.01,P＜0.05);该方法制备的真武汤含药血清与dDAVP合用干预NRK-52E细胞后,可显著增加V2R,p-AQP2和AQP2的蛋白表达量(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01).以上实验结果表明,真武汤含药血清能增加NRK-52E细胞“AVP-V2R-AQP2”通路中V2R,PKA及AQP2的蛋白表达量,与dDAVP合用存在协同效应,提示“AVP-V2R-AQP2”通路可能是真武汤调节水分转运平衡的分子机制之一.
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麻黄汤体外抗甲型H1N1流感病毒作用及机制研究
为探讨麻黄汤体外抗甲型H1N1流感病毒的作用及可能机制,该研究以感染甲型H1N1流感病毒的狗肾(MDCK)细胞为载体,细胞病变(CPE)法测定甲型H1N1流感病毒鼠肺适应株(A/PR8/34)对MDCK细胞的半数细胞培养物感染剂量(TCID50);采用阻断流感病毒侵入宿主细胞和抗流感病毒生物合成2种不同方式给药,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定麻黄汤体外抗甲型H1N1流感病毒的有效率(ER)、半数抑制浓度(EC50)和治疗指数(TI);并且通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测技术,分别在给药后24,48 h,考察麻黄汤对感染甲型H1N1流感病毒的MDCK细胞中病毒载量以及TLR4,TLR7,MyD88,TRAF6 mRNA表达的影响.实验结果显示,甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的TCID500为1×10-4.32/mL;2种给药方式抗流感病毒的EC50分别为4.92,1.59 g·L-1,TI分别为12.53,38.78,并且当质量浓度为5.00 g·L-1时,麻黄汤抗流感病毒的ER分别为50.21％和98.41％,说明麻黄汤可以阻断流感病毒侵入宿主细胞,并可显著抑制流感病毒在细胞内的生物合成;同时,相比于病毒组,给药后24,48 h麻黄汤各剂量组的病毒载量表达均显著降低,高、中剂量组显著下调了细胞中TLR4,TLR7,MyD88,TRAF6 mRNA的表达水平,从而表明麻黄汤发挥抗流感病毒的作用机制,可能与其抑制细胞内流感病毒的复制以及TLR4和TLR7信号通路中的相关基因有关.
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苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞IL-17-STAT3信号影响的研究
探讨苗药金乌健骨方总提物对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(RASF) IL-17-STAT3信号的影响.培养原代RASF,分为正常血清组、金乌健骨方低、中、高剂量组(0.06,0.6,6.0 g·L-1)和雷公藤多苷(0.03 g·L-1)组,分别予相应浓度的金乌健骨方和雷公藤多苷干预24h.PCR检测RORα,RORγt,STAT3 mRNA的表达,Western blot法检测IL-17R,pSTAT3的蛋白活性.结果显示,与正常血清组比较,RASF中RORα,RORγt,IL-17R和STAT3 mRNA的表达量均有所下降,具有统计学意义(P＜0.01),与雷公藤多苷组比较,金乌健骨方高、中剂量组均能下调RORα,RORγt,IL-17R和STAT3mRNA的表达,具有统计学意义(P＜0.05),金乌健骨方高剂量组作用更明显,具有统计学差异(P＜0.01).与正常组比较,各给药组IL-17R,pSTAT3的蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).与雷公藤多苷组比较,金乌健骨方高剂量组下调pSTAT3蛋白表达的作用更强,具有统计学差异(P＜0.01).由此可见,苗药金乌健骨方总提物能够下调RASF中RORα,RORγt,STAT3mRNA的表达,抑制IL-17R,pSTAT3的蛋白活性.
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柚皮苷对糖尿病大鼠心肌病氧化应激及内质网应激的影响
探讨柚皮苷(naringin,Nar)对糖尿病大鼠心肌组织的保护作用与氧化应激及内质网应激的关系.SD雄性大鼠随机分为正常对照组(Con组),模型组(T1 DR组),Nar低、中、高剂量组(Nar25,Nar50,Nar100).除Con组外,其他各组用链脲佐菌素(STZ,60 mg· kg-1)一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,模型复制成功后Nar分别按25.0,50.0,100.0 mg·kg-1剂量灌胃;Con组和T1 DR组等体积生理盐水灌胃,每天1次,连续8周.8周后处死大鼠,留取心肌组织.普通光镜观察大鼠心肌组织病理改变.试剂盒法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测各组大鼠心肌组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(caspase 12) mRNA和蛋白的表达.结果显示,与Con组比较,T1DR组心肌结构发生损伤,心肌组织MDA含量增加(P＜0.05)、SOD的活性明显降低(P＜0.05).内质网应激相关因子GRP78,CHOP和caspase 12基因和蛋白表达明显增加(P＜0.05或P＜0.01).Nar处理8周后,Nar各干预组心肌结构损伤明显改善,心肌组织MDA含量下降,SOD的活性明显升高,GRP78,CHOP和caspase 12基因和蛋白表达明显下降,其中中、高剂量组变化显著(P＜0.05,P＜0.01).该研究结果表明,Nar可能通过减轻大鼠糖尿病心肌氧化应激损伤,抑制内质网应激启动的细胞凋亡途径发挥对心肌组织细胞的保护作用.
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基于microRNA-34a/SIRT1/p53通路探讨三七皂苷R1对血管内皮细胞衰老的影响
该研究旨在探讨三七皂苷R1能否通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路发挥延缓H2O2诱导的血管内皮细胞衰老的作用.以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象,建立H2O2诱导的衰老模型,以白藜芦醇作为阳性对照药,实验分为青年组、H2O2模型组、三七皂苷R1组、白藜芦醇组.药物组提前加入三七皂苷R1(30 μmoL·L-1)或白藜芦醇(10 μmoL· L-1)干预24 h,然后用H2O2(100 μmoL·L-1)造模4h,后换成完全培养基培养24h.采用衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法鉴定细胞衰老程度,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,WST-1法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,QRT-PCR检测miRNA-34a,SIRT1和p53的核酸表达,Western-blot技术检测SIRT1,p53和衰老相关蛋白p21,p16的蛋白表达.结果发现,与模型组相比,三七皂苷R1组和白藜芦醇组可有效减低衰老内皮细胞的β-半乳糖苷酶染色阳性率,增强细胞增殖能力和SOD活力,减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,抑制了miRNA-34a和p53的核酸表达,促进了SIRT1的核酸表达,此外抑制了p53,p21和p16的蛋白表达,促进了SIRT1的蛋白表达,差异均有统计意义(P＜0.05).该研究表明,H2O2诱导的衰老的内皮细胞可以作为衰老研究的模型,三七皂苷R1延缓血管内皮细胞衰老的效果明显,其机制可能是通过调控miRNA-34a/SIRTl/p53通路延缓了血管内皮细胞衰老的进程.
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槐耳清膏通过激活自噬抑制人肝癌细胞SK-HEP-1增殖
该研究探讨槐耳清膏对人肝癌细胞SK-HEP-1自噬的影响及此影响在细胞增殖中发挥的作用.采用CCK-8法检测了槐耳清膏不同作用浓度以及不同作用时间下对人肝癌细胞SK-HEP-1增殖的影响.采用吖啶橙染色法检测了槐耳清膏给药对SK-HEP-1细胞中自噬溶酶体形成的作用.采用免疫荧光法检测了槐耳清膏给药后SK-HEP-1细胞中自噬标志物LC3的表达及分布情况.此外,还借助免疫印迹法检测了槐耳清膏给药后SK-HEP-1细胞中LC3的表达情况.后,该研究采用CCK-8法分析了槐耳清膏与自噬抑制剂bafilomycin A1联合给药以及槐耳清膏单独给药对SK-HEP-1细胞增殖的作用.结果显示,槐耳清膏能够显著抑制人肝癌细胞SK-HEP-1的增殖,并且具有明显的时间与浓度依赖性.吖啶橙染色实验结果表明槐耳清膏能够明显促进细胞中自噬溶酶体的生成.免疫荧光及免疫印迹实验结果显示,槐耳清膏给药作用后细胞内LC3绿色荧光颗粒数量和亮度明显增高,而且自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达量也明显上升,这部分结果提示槐耳清膏能够明显激活SK-HEP-1细胞自噬的发生.此外,笔者还发现自噬被抑制后SK-HEP-1细胞对槐耳清膏给药的敏感性显著下调.因此,自噬活化参与了槐耳清膏对人肝癌细胞SK-HEP-1增殖的抑制作用.
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染料木素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及CaM-CaMKIV信号通路的影响
染料木素是一种异黄酮类化合物,被称为植物雌激素,对心血管疾病、肿瘤、绝经后相关妇科疾病等都有较好的临床疗效,在阿尔茨海默病(AD)的防治上具有潜力.该实验通过观察染料木素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及CaM-CaMKIV信号通路的影响,探讨染料木素对AD的神经保护作用机制.体外培养PC12细胞,MTT法筛选染料木素安全浓度和Aβ25-35的造模浓度和佳给药时间.预先给予不同浓度染料木素(25,50,100 μmol·L-)处理PC12细胞后,以Aβ25-35建立AD细胞模型.采用MTT法检测染料木素对AD细胞模型细胞存活率的影响,倒置显微镜观察细胞形态的改变,AO/EB荧光染色观察细胞的凋亡情况,观察染料木素对AD细胞模型的神经保护作用并确定染料木素佳给药浓度,qRT-PCR和Western blot法检测细胞中CaM,CaMKK,CaMKIV,tau的mRNA和蛋白表达.结果显示,和空白组相比,AD模型组细胞存活率明显下降,细胞损伤增加,凋亡细胞增多,CaM,CaMKK,CaMKIV,tau的mRNA含量和蛋白表达明显升高,而染料木素可明显提高AD细胞模型的细胞存活率,减少AD细胞模型的细胞损伤和细胞凋亡,显著下调AD细胞模型中CaM,CaMKK,CaMKIV,tau的mRNA含量和蛋白表达.结果表明染料木素对Aβ25-35诱导的AD细胞模型具有明显的神经保护作用,其作用机制可能与下调CaM-CaMKIV信号通路及其下游tau蛋白的表达有关.
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薄荷茎、叶中黄酮类成分在不同采收期的含量差异性研究
为考察不同采收期薄荷茎、叶中有效成分的动态变化规律,探讨薄荷药材的适宜采收期,该研究以橙皮苷、香叶木苷、香蜂草苷、蒙花苷为黄酮类指标性成分,采用已建立的薄荷中黄酮类成分含量一测多评法,测定了3个产地不同采收期的薄荷中4种黄酮苷类成分分别在茎、叶样品中的含量,并运用统计图和主成分分析法对这些数据进行统计整理和综合评价.这4种成分在3个产地不同采收期的薄荷叶中的含量普遍高于茎,而同一产地不同采收期薄荷中各成分含量呈动态变化;就江苏产区而言,4月中旬、9月中旬以及10月下旬采收的薄荷中4种成分综合评价得分较高.结合药材产量与有效成分含量,江苏产区薄荷适合的采收期应为9月中旬与10月下旬,与当地传统采收期基本一致.
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平滑苍耳果实中1个新的倍半萜内酯二聚体
采用聚酰胺柱色谱,反相硅胶柱色谱,Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及制备型HPLC等色谱技术从平滑苍耳果实乙醇提取物中分离得到7个化合物,通过波谱学技术鉴定它们的结构分别为pungiolide O(1),蚱蜢酮(grasshopper ketone,2),icariside F2(3),7-[(β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl)oxymethy]-8,8-dimethyl-4,8-dihydrobenzo[1,4] thiazine-3,5-dione (4),(6R,9S)-3-oxo-α-ionolβ-D-glucopyranoside(5),4-咖啡酰奎宁酸甲酯(cryptochlorogenic acid methyl ester,6),3-咖啡酰奎宁酸甲酯(chlorogenic acid methyl ester,7).其中,化合物1为新化合物.
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气相色谱“一测多评”用于苍术多成分含量测定的可行性研究
该实验基于气相色谱内标法,通过建立β-桉叶醇与其他3种倍半萜类成分的相对校正因子(RCF),实现只用1个对照品测定苍术药材中多个倍半萜类成分的含量.结果表明,在一定的线性范围内,β-桉叶醇与苍术酮、白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅱ间的RCF分别为0.823,0.690和0.766,且在不同实验条件下重现性良好.该方法只需测定苍术中β-桉叶醇的含量,其余倍半萜含量由其RCF计算得到,实现一测多评,并与常规内标法比较,所得结果均无显著性差异,所建立的校正因子可用于苍术药材的定量分析及质量评价.
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不同加工方式及不同部位鹿茸中硫酸软骨素的含量分析
为研究不同加工方式及不同部位梅花鹿鹿茸中硫酸软骨素的含量差异及变化趋势.采用稀碱-浓盐法提取、硫酸软骨素ABC酶酶解鹿茸中的硫酸软骨素,应用高效液相色谱法对样品中的总硫酸软骨素及硫酸软骨素A～C含量进行测定.结果显示,冻干茸蜡片、粉片、纱片、骨片的硫酸软骨素分别为14.13,11.99,1.74,0.32 g·kg-1;煮炸茸蜡片、粉片、纱片、骨片的硫酸软骨素分别为10.71,8.97,2.21,1.40 g·kg-1;排血茸蜡片、粉片、纱片、骨片的硫酸软骨素分别为12.47,9.47,2.64,0.07 g·kg-1;带血茸蜡片、粉片、纱片、骨片的硫酸软骨素分别为8.22,4.39,0.87,0.28 g·kg-1.该研究发现不同加工方式鹿茸中的硫酸软骨素含量差异较大.冻干茸、排血茸相对于煮炸茸、带血茸中的硫酸软骨素含量较高;同一加工方式不同部位鹿茸蜡片中的硫酸软骨素含量高,粉片、纱片依次递减,骨片低.
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印楝种子中柠檬苦素类化合物及其细胞毒活性研究
采用硅胶、Sephadex LH-20、高效液相等色谱技术,对印楝干燥种子95％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行了系统分离,得到8个柠檬苦素类化合物.通过与文献报道的波谱数据对比,这些化合物被鉴定为salannin(1),1-detigloyl-l-isobutylsalannin(2),salannol-3-acetate(3),salannol(4),spirosendan(5),1-detigloyloxy-3-deacetylsalannin-1-en-3-one(6),nimbin(7),6-deacetylnimbin(8).化合物2和5为属内首次分离,并且化合物5为目前发现的唯一1个C环开裂、并与D环形成螺环结构的柠檬苦素.化合物6为新天然产物.在体外细胞毒活性筛选中,化合物6对人宫颈癌细胞(HeLa)和人白血病细胞(HL-60)具有一定生长抑制作用,IC50分别为(21.61±4.37)和(27.33±5.74) μmol·L-1;7和8均对HeLa细胞表现出较弱生长抑制作用,IC50分别为(33.15±5.24)和(38.56±6.41)μmol·L-1.
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环状RNA:人类疾病研究的新领域
环状RNA(circular RNA,circRNA)所具有的高稳定性、物种间的高保守性以及组织特异性等特点,已被研究者视为有望成为临床诊断、治疗及预后等新的分子生物标志物及靶向治疗靶点的潜能.对于中医证候研究,其不仅包括传统四诊所能收集到的宏观指标,同时也包含传统四诊所无法掌握的微观信息.在证候微观研究中,如何把握中医整体观与微观研究的关系,如何解决证候描述的模糊性与微观研究的精准性之间的矛盾等,是开展证候微观研究需要思考的问题.circRNA作为认识人类疾病的新领域,其具备的特性或可以为证候研究提供思路,发挥circRNA在诊断及治疗中存在的价值,重视对异病同证的分子水平探索,为揭示证候存在的内涵与本质提供科学依据.
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发酵虫草菌类产品的标准比较与评价
目前市场上已获得药品批准文号的发酵虫草菌类产品包括5种发酵虫草菌粉原料药及其相关制剂.由于原料药的起始菌株均为从天然冬虫夏草中分离而来,它们的名称和化学成分类似,临床作用也较为相近.但因其菌种和发酵工艺不同,质量具有明显的差异性,临床应用也各有侧重,故在使用中应予以明确区分.该类产品的研究开发多在20世纪80-90年代,不同产品的质量标准差异较大,部分产品质量控制水平较低.且目前发酵虫草菌类产品存在同时按化学药批准文号和中药批准文号管理的情况,其名称使用、监管和临床应用也较为混乱.该文通过对发酵虫草菌类产品的批准文号类别、质量标准及应用情况进行比较和梳理,总结了该类产品的标准情况和存在问题,提出规范产品名称、统一文号管理类别、增加专属性质量控制内容等相关建议,以期对发酵虫草菌粉及相关制剂的标准执行、质量控制以及药品监管提供参考.
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基于生物活性测定开展中药质量控制的研究进展
在化学含量测定的基础上,开展中药复方的生物活性测定,可以综合评价并控制其质量.该文对近年来发表的有关生物活性测定文献进行了综合分析,标准对照物质的选择和实验体系的建立是目前中药生物活性测定的难点.目前生物活性测定标准对照物质主要包括:成分基本相似的不同来源产品、检定用标准药材、道地药材、以临床常用且具有相同药理作用的化学药品或者是生物制品,以及通过生物制品活性换算中药效价等.文章从活血化瘀和清热解毒临床功效角度总结了常用的生物活性测定体系.逐步建立从企业内控到行业认可的中药生物活性测定平台将是中药工业化生产的重要内容之一.
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光照对药食同源植物苦荞麦种子中原花青素积累关键酶FtANR,FtLAR基因表达的影响
苦荞麦Fagopyrum tataricum作为重要的药食两用植物,由于种子中含有丰富的黄酮类成分,因而具有良好的清除自由基、抗氧化、抗衰老等作用.现有的苦荞麦黄酮类化合物研究大多集中在黄酮醇类化合物如芦丁的合成、调控以及积累上,但针对苦荞麦中原花青素类成分的代谢途径研究鲜有报道.该研究以原花青素代谢途径中关键的合成基因花青素还原酶(ANR)和原花青素还原酶(LAR)入手,通过挖掘苦荞麦转录组信息克隆了FtANR(F.tataricum ANR),FtLAR1(F.tataricum LAR1),FtLAR3(F.tataricum LAR3).由于光在植物次生代谢物质形成与积累过程中发挥着重要作用,该研究试着探索不同光质(红光、蓝光、远红光、紫外光)对原花青素代谢途径中关键的合成基因ANR,LAR的表达影响.该研究发现红光对所克隆基因表达的影响呈现出与其他光相反的作用:FtANR,FtLAR1在红光处理后基因的表达量有所下降,而其在蓝光、远红光、紫外光处理后基因的表达量是有所上调的;FtLAR3在红光处理后基因的表达量有所上调,而其在蓝光、远红光、紫外光处理后基因的表达量是有所下降的.
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内生细菌BZJN1的鉴定及对白术根腐病的生物防治研究
该研究从白术体内分离得到一株细菌BZJN1,经生理生化检测及分子鉴定证明其为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis.菌株BZJN1可以显著抑制白术角担菌菌丝生长,抑制率超过70％.显微观察对峙区域发现角担菌菌丝生长畸形、菌丝顶端或中部膨大呈球形,原生质泄露.其发酵滤液在3％,6％的浓度下对角担菌菌丝生长抑制率达到22.7％,38.7％.田间防效试验证明,药后10 d,BZJN1生防菌剂在1×109 cfu·mL-1处理防效高,达到了75.27％.药后20 d,1 ×109 cfu·mL-1的处理防效为72.37％,和化学药剂相当.所有BZJN1的处理对白术有一定促生效果,1×109 cfu·mL-1处理,增产达到14.1％.
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基于UPLC-Q-TOF-MS分析沉香化气丸在大鼠体内的代谢产物
应用UPLC-Q-TOF-MS技术分析沉香化气丸在大鼠体内的代谢产物.采用Phenomenex Kinetex C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.7 μm),以乙睛-0.1％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,采用电喷雾正离子模式下采集数据,对空白大鼠与给药大鼠血浆和尿样的总离子流图,进行提取目标离子分析.结果发现,在血浆及尿液中共检测到24个成分,其中包括5个原型成分和19个代谢产物,主要代谢途径包括水化反应、葡萄糖醛酸化、去甲基化、水解反应、羟基化、硫酸化.该实验建立的方法快速、简单、灵敏,可用于快速鉴定沉香化气丸在大鼠体内的代谢产物,为更好地了解沉香化气丸的体内吸收代谢机制提供参考.
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中药炮制用辅料姜汁的冻干工艺优化及冻干粉稳定性考察
姜汁是常用的中药炮制用辅料,用于多种中药饮片的炮制.姜汁的原料和制备工艺决定了姜汁难以长时间保存,在用于炮制时无法根据有效成分含量决定用量;不同来源姜汁用于中药饮片炮制难以实现一致的炮制效果.该文以前期姜汁干燥研究为基础,对姜汁在不同搁板温度和真空度条件下的冷冻干燥进行了研究,确定了姜汁冷冻干燥的优化条件;建立了姜汁和复溶姜汁中6-姜酚,8-姜酚,10-姜酚,6-姜烯酚含量测定方法;对姜汁在冷冻干燥前后及30 d内的保存期内6-姜酚,8-姜酚,10-姜酚,6-姜烯酚含量、挥发油含量及总酚含量的变化进行了研究.结果表明,工艺优化后姜汁冻干时间大大缩短;姜汁冻干前后成分基本一致,姜辣素、总酚含量无显著性变化,挥发油含量有显著性下降(P ＜0.05);30 d内,姜辣素、总酚、挥发油含量总体呈下降趋势.该研究初步证明了中药炮制用辅料姜汁冻干的可行性.
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不同加工方式绞股蓝皂苷类成分比较研究
为了探讨不同加工方式对绞股蓝化学成分的影响,该实验采用超高效液相与串联四极杆飞行时间质谱(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)联用技术,对阴干(未杀青)和滚筒干燥(杀青)等2种不同加工方式绞股蓝样品开展化学成分比较研究,通过对照品比对、液相色谱串联多级质谱(liquidchromatography-mass spectrometry,LC-MSn)碎片信息以及结合文献数据,共指认绞股蓝皂苷类成分46个,在各质谱峰面积统计的基础上采用主成分分析(principal component analysis,PCA),统计结果表明8批绞股蓝样品依据阴干和滚筒干燥2种不同加工方式聚为两大类,偏小二乘法-判别分析(partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA)结合质谱鉴定信息,提取并鉴定出差异性皂苷类成分10个,结果表明,滚筒干燥样品所含皂苷类成分母核多含3～4个糖,而阴干样品母核多含1～2个糖,进一步的质谱数据解析推测,绞股蓝阴干过程中皂苷类成分在葡萄糖苷酶等的作用下发生脱糖生成次生苷从而导致成分差异.以上研究结果为绞股蓝的采收加工以及质量控制提供数据支撑.
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荷叶药材中荷叶碱生物药剂学分类系统研究
荷叶碱为中药荷叶Nelumbinis Folium中的主要药效活性成分,具有降血脂、抗炎、抗氧化等生物活性.目前关于荷叶碱的药代动力学及生物利用度报道的结果存在较大差异.该实验利用多种生物药剂学评价模型,对中药材中荷叶碱进行生物药剂分类学研究(biopharmaceutical classification system,BCS).其中,荷叶碱平衡溶解度采用了理想溶液模型、Apelblat模型、多项式模型(经验模型)进行测定及关联性评价;渗透性采用油水分配系数logP,分布系数logD以及细胞和组织表观渗透系数研究.荷叶碱溶解度受环境pH影响在酸性条件下属于BCS Ⅰ类;近中性及碱性环境下,BCS分类结果出现差异.以外翻肠囊法所得肠组织表观渗透系数荷叶碱渗透性较差,为BCSⅣ类.进一步证明动物种源及环境酸碱度对中药活性成分荷叶碱口服生物利用的影响.
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缺血性中风病急性期中西药群组模块探索
该研究在“病证结合、方证相应、动态时空”理论指导下,采集11 135例来自全国多家三级甲等中医医院的医院信息系统(hospital information system,HIS)中急性缺血性中风病患者数据,以复杂网络分析患者急性期不同时间段内核心证候要素,发现患者入院1d内核心证候要素为血瘀、痰、内风、阴虚、气虚、热、阳亢和肝、肾,入院8～14 d核心证候要素为血瘀、痰、阴虚、气虚、内风、阳亢和肝、肾.选择治疗结局为“好转”和“治愈”的患者数据,采用复杂网络分析结合关联分析辨识不同病情患者在入院后不同时间内的中西药物群组模块,发现患者入院14 d内中西药物模块主要有“活血化瘀模块”,由“抗血小板药+改善循环药物(或抗凝药、降纤药等)+活血化瘀药”构成,“化瘀祛痰模块”由“抗血小板药+改善循环药(或抗凝药、降纤药等)+化痰醒脑药”构成.入院7d内病情为急和一般的患者核心中西药物模块主要使用“活血化瘀模块”和“化瘀祛痰模块”,入院病情为危的患者未发现使用率1％以上的3项或以上中西药物模块;入院病情为急、危、一般的患者入院8～14 d主要使用“活血化瘀模块”.通过研究真实世界医疗大数据发现,缺血性中风病急性期患者中西药物联合使用符合“病证结合、方证相应、动态时空”理论,发掘了多个缺血性中风病急性期“病-证-药-时-效”多维立体的中西药物群组模块,形成了基于医疗电子大数据的中西药物研究方法.
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外翻肠囊法研究羊耳菊提取物在大鼠肠内的吸收
考察羊耳菊提取物在大鼠肠内的吸收特征,应用大鼠肠外翻模型,选择羊耳菊提取物中具有代表成分的东莨菪苷等9种成分为考察对象,建立其UPLC-MS/MS测定方法并测量其累计吸收量,阐明各成分在不同肠段的吸收特征.结果表明,不同浓度的1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸等成分随活性部位提取物的给药剂量增加而增加,无明显高浓度饱和现象,提示其可能的吸收方式均为被动扩散,东莨菪苷同样在高浓度条件下存在饱和现象,提示可能的吸收方式为主动转运.绿原酸的主要吸收部位在十二指肠,1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸和隐绿原酸的佳吸收部位是空肠,东莨菪苷,新绿原酸,3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的佳吸收部位在回肠.以此推测,羊耳菊提取物中9种成分在小肠均有吸收,但各成分的吸收速率、佳吸收部位及吸收机制不尽相同,提示小肠对羊耳菊提取物中9种成分的吸收具有选择性.
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基于美国对中药组合物专利保护客体审查规则的应对
美国专利商标局于2014年12月16日发布《关于专利保护客体的临时指南》,该《临时指南》的出台对主题为中药组合物的专利申请的审查规则带来了一定影响.该文以《临时指南》为依据,采用案例分析法,对中药组合物专利在美国遇到的保护客体问题进行分析.研究显示,在美国申请中药组合物专利时对申请文件进行适当撰写,可以提高授权概率.
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基于RNA-seq数据的生姜NAC转录因子家族鉴定及分析
NAC家族是植物特有的转录因子,广泛参与植物生长发育、信号传导和逆境应答等过程.该研究基于生姜RNA-seq数据,利用生物信息学方法对生姜NAC家族成员、亚族分类、理化性质、蛋白质结构和表达模式进行预测和分析,结果显示:在271.1Mb生姜转录组数据中筛选得到72个生姜NAC转录因子,通过进化树分析将其分为13个亚族;不同亚族NAC蛋白质的理化性质,如氨基酸数目、等电点等存在差异,二级结构主要以无规则卷曲为主要构成元件,三级结构相似性较高;23个NAC转录因子在不同土壤湿度及青枯菌Ralstonia solanacearum侵染处理下呈现显著的表达差异,其主要分布在与植物衰老、激素代谢和细胞壁代谢相关的第Ⅻ,ⅩⅤ,Ⅷ亚族.该研究结果为生姜NAC基因家族的研究和利用提供了理论依据.
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丹参均一化酵母双杂交文库的构建及与SmJAZ8互作蛋白的筛选
为构建高质量的丹参cDNA文库以及通过酵母双杂交获得丹参SrnJAZ8互作蛋白基因.研究以丹参的根、茎、叶、花、毛状根为材料,利用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)方式合成全长cDNA,并结合基于双链的特异性核酸酶(duplex-specific nuclease,DSN)均一化技术,构建丹参的均一化全长cDNA文库.通过文库鉴定,检测到cDNA文库库容为1.45 × 106,重组率为100％,插入片段平均大小为500 ～2 000 bp.构建pDEST-pGADT7-SmJAZ8重组载体,将该载体转化Y2HGold菌种,通过酵母双杂交进行互作蛋白的筛选,终筛选到了丹参DnaJ蛋白和UBQ蛋白.该研究既成功构建了丹参均一化全长cDNA文库,又为后续丹参功能基因筛选和基因功能的研究奠定了基础.
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黄精本草考证与启迪
为了明晰“黄精”基原植物沿革与变迁、药用部位与传统功效、资源与分布,该文对“女萎”“葳蕤”“黄精”进行了系统的本草考证.始载于《神农本草经》的“女萎”,包含了《名医别录》记载的“葳蕤”与“黄精”两者的功效,其中“葳蕤”传承了“女萎”的主治功效,“黄精”传承了“女萎”“主补中益气,除风湿,安五脏.久服轻身、延年、不饥”等主补功效,其后本草均沿用《名医别录》记载.“黄精”基原植物的沿革与变迁进一步表明,明清以前本草中“玉竹”(女萎、葳蕤)中包含“黄精”,其中唐初以前主要根据根状茎结节状形态与个体大小区分“黄精”、“玉竹”,形态的鉴别具有科学性一直沿用至今,大小鉴别显然不科学;唐代至清初强调叶对生者为正精,将年幼的黄精与滇黄精、叶互生的多花黄精等误认为“玉竹”,追根溯源“黄精”应始载于《神农本草经》,又名“女萎”……,“黄精”的古方开发应一并注重“玉竹”方.历代本草记载“黄精”药用部位除根茎外,叶、花、果实和幼苗均可作食药用,但近代未见开发利用;“黄精”的栽培历史悠久,唐诗就有记载,《本草纲目》详细描述了种植方法;“黄精”的采收加工从“二月采根,阴干”(《名医别录》)发展至“九蒸九曝”(《食疗本草》)、“今通八月采”(《本草图经》),但“黄精”栽培品种、资源培育与精准采收等关键技术直至现代仍无重大突破.《本草图经》首次记载“黄精”道地产区“以嵩山、茅山者为佳”,但江苏茅山、河南嵩山并非现代的“黄精”主产区,“黄精”产区规划有待于进一步研究.
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雷公藤制剂安全性的循证评价研究
该研究旨在通过结合文献计量学研究和循证评价研究的方法,对雷公藤Tripterygium wilfordii (TW)制剂的安全性进行循证评价,为政府决策和临床应用提供TW制剂(肾毒性)的循证安全性信息,为今后中草药肾毒性评估提供方法和建议.通过系统搜索国内外相关数据库,全面搜索CNKI,SinoMed,VIP,万方,PubMed,Cochrane图书馆等6个中英文数据库,检索文献类型为TW制剂安全性的所有研究类型文献,并根据纳入和排除标准对文献进行筛选和提取.所有纳入研究的方法学质量均由国际公认的评估工具或标准进行评估,用R软件分析发病率,并根据干预类型,给药途径,用药时间和研究类型进行亚组分析.
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根据CONSORT HARMs声明评价雷公藤制剂相关肾毒性RCT的报告质量
根据CONSORT HARMs声明评价以雷公藤中成药为干预或对照措施的RCT关于肾毒性的报告情况.根据CONSORT HARMs声明对纳入的雷公藤制剂相关肾毒性RCT研究进行报告质量评价,计算每个研究符合CONSORT HARMs声明的条目,评价雷公藤制剂相关RCT中其肾毒性相关不良反应的报告质量,总结国内研究肾毒性相关不良反应报告的问题.共纳入16项RCT,平均每个研究符合7个条目,雷公藤制剂相关肾毒性RCT研究的报告质量较差,报告的不重复的条目为:使用已验证过的工具报告不良反应、提及不良反应的编码采用的标准、在方法中描述如何及何时收集不良反应的数据、描述不良反应是如何归因于雷公藤的、明确的提出是谁报告的不良反应、描述不良反应的分析方法、描述收集复发不良反应数据的方法、描述与危害相关的任何亚组分析和探索性分析.建议将来中药不良反应的相关研究,严格按照CONSORT HARMs建议的条目对研究进行详细报告.此外,也应考虑到中药自身的特点,详细的报告中药的组成、剂量、服用时间、联合用药及研究对象的辨证分型.
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探讨快速评价法在检索雷公藤制剂肾毒性研究中的应用
为了探讨快速评价法在中药肾毒性研究中的可行性,采用4种检索策略检索雷公藤制剂肾毒性的相关研究,一是不限定任何检索词,即采用传统的系统评价检索方法;二是将雷公藤制剂的相关检索词限定为“CFDA批准上市的所有包含雷公藤成分的中成药”;三是将肾毒性的相关检索词限定为“前期系统评价研究文献筛选过程中发现的报道多的与肾毒性相关的词汇”;四是同时限定雷公藤制剂和肾毒性相关检索词.后,将后3种检索方法的结果与第1种检索方法的检索结果对比.从检索到的总文献量上来看,不限制检索词的方法检索到的总文献量多,分别限制雷公藤制剂和肾毒性检索词检索到的文献总量相对减少,同时限定者2种检索词检索到的文献总量少.从符合纳入标准的文献量上来看,限制雷公藤制剂的方法纳入的文献数量多.从纳入的文献类型上来看,同时限定雷公藤制剂和肾毒性相关检索词与不限定检索词的检索结果相比,符合度较高.快速评价方法在中药肾毒性的研究中应用是可行的.
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中药肾毒性国内外研究现状
通过对国内外报道的所有可能导致肾毒性的中药进行系统全面的总结,为将来中药肾毒性的针对性研究提供依据.国外研究检索资源包括:PubMed和Cochrane图书馆,国内研究检索资源为国家食品药品监督管理总局药品不良反应监测中心数据库.检索的起止日期为建库到2017年1月1日,不对纳入的研究类型进行限定.共纳入28篇英文文献,报告的具有肾毒性风险的单味中药或方剂共97种,其中6种具有肾毒性风险的中药文献量较多,分别为:马兜铃酸类中药(5篇)、雷公藤(4篇)、丁公藤(2篇)、大黄(2篇)、麻黄(2篇)、苍术(2篇),其余的91种中药均仅有1篇文献报道其具有肾毒性风险.CDFA药品不良反应信息通报报告的肾毒性风险的中药有16种,包括感冒清片(胶囊)、珍菊降压片、雷公藤制剂、维C银翘片、穿琥宁注射剂、双黄连注射剂、清开灵注射剂、莲必治注射液、含青木香的中药汤剂、冠心苏合丸、舒肝理气丸、二十五味松石丸、含广防己的中药汤剂、含朱砂莲的中药颗粒剂、感冒通(片剂)、龙胆泻肝丸.目前,除了马兜铃酸类中药,报告多的具有肾毒性风险的中药是雷公藤制剂.
