中成药杂志
Chinese Traditional Patent Medicine 중성약
- 主管单位: 上海市卫生局
- 主办单位: 国家食品药品监督管理局,信息中心中成药信息站,上海中药行业协会
- 影响因子: 1.21
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1001-1528
- 国内刊号: 31-1368/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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星点设计-效应面法优化鹿角胶-脱蛋白骨制备工艺
目的 采用星点设计-效应面法优化鹿角胶-脱蛋白骨制备工艺.方法 煎煮提取鹿角胶后,H2 O2-乙醚制备脱蛋白骨.以鹿角胶质量浓度、冻干时间和交联时间为自变量,孔隙率为因变量进行多元线性回归和二项式方程拟合,描绘效应面,确定佳工艺.结果 佳条件为鹿角胶质量浓度1.20 g/mL,冻干时间64h,交联时间8h.结论 该方法简便、合理、稳定,预测性良好.
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复方扶芳藤合剂对D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用
目的 通过建立D-半乳糖致衰老小鼠模型,研究复方扶芳藤合剂(扶芳藤、黄芪、红参)的抗衰老作用.方法 将144只实验小鼠随机分为6组:正常组,模型组,维生素E (Vit E)阳性对照组(100 mg/kg),复方扶芳藤合剂高(15 g/kg)、中(7.5 g/kg)、低(3.25 g/kg)剂量组,在给药8周后,进行Morris水迷宫实验和常压耐缺氧实验,计算小鼠胸腺、脾脏及脑指数,检测小鼠血清及脑组织中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MAD)和血清过氧化脂质(LPO)的量.结果 复方扶芳藤合剂可明显提高衰老小鼠的学习和记忆能力,能显著增大衰老小鼠胸腺、脾脏及脑指数,还可不同程度提高衰老小鼠血清和肝组织中T-AOC和SOD与GSH-Px活性,降低MDA和LPO水平.结论 复方扶芳藤合剂可能通过提高机体免疫和抗氧化能力而发挥抗衰老作用.
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滑石粉烫制刺猬皮工艺优化及质量标准制定
目的 筛选滑石粉烫制刺猬皮的佳工艺,并制定其质量标准.方法 以粉碎率和醇溶性浸出物为评价指标,正交实验法优选烫制温度、烫制时间和滑石粉用量,采用《中国药典》2015版方法对制刺猬皮中水分、灰分、总氮及醇溶性浸出物进行测定,氨基酸自动分析仪测定氨基酸含有量.结果 佳炮制工艺为100 kg刺猬皮加40 kg滑石粉,烫制温度210~220℃,翻炒4 min.制刺猬皮中水分5.1%、总灰分13.9%、总氮9.6%、醇溶性浸出物10.5%,含有17种氨基酸,总含有量52.69%.结论 该工艺稳定可行,重复性好,可用于滑石粉烫制刺猬皮质量标准的制定.
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黄荆子总木脂素的提取工艺优选
目的 优选黄荆子总木脂素的提取工艺.方法 以总木脂素提取量为考察指标,在单因素试验的基础上采用正交试验确定黄荆子总木脂素的佳提取条件,试验因素为乙醇体积分数(30%、50%、70%)、提取温度(65、75、85℃)、提取次数(1、2、3次).结果 乙醇体积分数、提取温度和提取次数是总木脂素提取量的关键因素,其中乙醇体积分数对其有显著影响(P<0.05).佳提取方法为10倍量70%乙醇在75℃水浴中回流提取2次,每次60 min.结论 该提取方法简单,而且稳定可行,为黄荆子总木脂素的分离纯化、含有量测定及新药研发奠定了基础.
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山楸梅浆果中花青素提取方法的优化和测定
目的 优化山楸梅浆果中花青素的提取方法,并采用pH示差法测定其含有量.方法 以料液比、提取时间、乙醇体积分数为指标,正交试验对提取工艺进行优化.分别用pH 1.0和pH 4.5的缓冲液稀释,在510 nm和700 nm波长处测定吸光度.结果 佳条件为料液比1∶20,提取时间20 min,乙醇体积分数60%.3批山楸梅浆果中花青素含有量分别为5.59、5.57、5.48 mg/g.结论 该方法灵敏准确,消除了干扰物质的影响,可用于山楸梅浆果中花青素的测定.
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维药恰玛古硫代葡萄糖苷的提取纯化工艺及其抗肿瘤作用
目的 优选维药恰玛古硫代葡萄糖苷的提取纯化工艺,并对其进行抗肿瘤作用研究.方法 正交设计安排试验因素,以硫代葡萄糖苷含有量和得率的综合评分为指标,比较不同工艺条件对恰玛古硫代葡萄糖苷的提取纯化效果.通过动物体内抗肿瘤实验,观察其对小鼠肉瘤S180、结肠癌CT-26的抑制作用.结果 恰玛古硫代葡萄糖苷佳提取工艺为加8倍量95%乙醇回流提取2次,每次1h.酸性氧化铝纯化该成分的佳工艺条件为洗脱液KNO3浓度0.15mol/L,上样液质量浓度1 g/mL、洗脱液用量6倍于柱体积.该提取物对小鼠移植性肉瘤S180、结肠癌CT-26均显示出剂量依赖性的抗肿瘤作用.结论 酸性氧化铝对于恰玛古硫代葡萄糖苷具有一定的富集纯化作用,而且其提取物具有抗肿瘤活性.
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鞣花酸对酒精性脂肪肝大鼠肝损伤的保护作用及对TNF-α、Leptin的影响
目的 观察鞣花酸对脂肪肝大鼠的瘦素(Leptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,并探讨对其肝损伤的保护作用.方法 随机将72只清洁级Wistar大鼠分为6组,采用高脂饮食加乙醇饮用的复合造模方法诱导大鼠酒精性脂肪肝(AFL)模型,正常组不造模,不给予药物干预;模型组造模,不给予药物干预;阳性组造模,给予护肝片干预;鞣花酸大、中、小剂量组造模,给予106.7、213.4、426.8 mg/kg鞣花酸干预.观察各组大鼠血清中血脂、肝功能、血清Leptin、TNF-α和肝组织中谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平.结果 模型组大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较正常组显著升高,HDL-C显著降低;鞣花酸各剂量组大鼠血清TC、TG及LDL-C较模型组显著降低;模型组大鼠γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝脏系数较正常组显著升高,鞣花酸各剂量组大鼠上述指标较模型组显著降低;模型组大鼠肝组织GSH、SOD水平较正常组显著降低,MDA水平较正常组显著升高;鞣花酸各剂量组大鼠肝组织GSH、SOD水平较模型组显著升高,MDA水平显著降低;模型组大鼠血清TNF-α、Leptin水平较正常组显著升高.鞣花酸各剂量组大鼠血清TNF-α、Leptin水平较模型组显著降低.结论 鞣花酸对AFL大鼠具有抗氧化、降低血脂、改善肝功能、降低血清TNF-α和Leptin水平的作用.
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5种大孔树脂纯化鲜核桃青皮汁多酚工艺的比较
目的 比较D-101、NKA-9、AB-8、X-5、HPD-100大孔树脂纯化鲜核桃青皮(walnut green husk)汁多酚的工艺.方法 新鲜核桃青皮榨汁后,用5种大孔树脂纯化其多酚,从静态吸附-解吸角度考察多酚质量浓度、乙醇体积分数、pH值,以及从动态吸附-解吸角度考察多酚质量浓度、上样体积流量、体积、乙醇体积分数、体积、体积流量对纯化工艺的影响.结果 AB-8型大孔树脂对鲜核桃青皮汁多酚的吸附性好,解吸率高.佳条件为多酚质量浓度2.0 mg/mL,pH值4.0,上样体积1.6 BV,体积流量2.0 BV/h;以70%乙醇洗脱,体积流量2.0 BV/h,体积2.10 BV.在此条件下,其纯度由9.26%提高到52.59%.结论 该工艺稳定可行,可用于纯化鲜核桃青皮汁多酚.
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妇科十味片中挥发性组分的GC特征图谱及加速稳定性
目的 建立妇科十味片中挥发性组分的GC特征图谱,并结合加速稳定性试验考察其相似度变化.方法 GC特征图谱以α-香附酮、藁本内酯为参照物,分析采用Elite-5石英毛细管柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm);进样口温度280℃,程序升温;进样分流比30∶1;载气(氮气)体积流量1.5 mL/min;FID检测器,温度300℃.加速稳定性试验取薄膜衣片和素片各3批,在温度(40±2)℃、相对湿度(75±5)%的条件下放置6个月,测定GC特征图谱.结果 建立了妇科十味片的GC特征图谱,确认共有峰13个,其精密度、重复性和稳定性均符合要求.薄膜衣片和素片分别在第4、3个月时特征图谱相似度小于0.90.结论 妇科十味片有效期的制定要考虑其中挥发性物质,而非现行标准单一的测定指标.
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中药注射剂树脂检查方法的改进
目的 改进中药注射剂中树脂的检查方法,提高检查灵敏度.方法 将清开灵注射液、双黄连注射液、丹参注射液和灯盏细辛注射液用分子筛(3000、10 000、30000Da) 10倍富集大分子物质,参照《中国药典》方法,取大分子富集液5 mL,氯仿萃取挥干,冰醋酸复溶后加入三蒸水混合30 min,3 000 r/min离心10 min,通过观察有无沉淀来判定树脂有无.结果 富集大分子后,可检查到清开灵注射液、双黄连注射液、丹参注射液含有树脂,而灯盏细辛注射液不含有树脂.结论 该方法的灵敏度高于药典法,可以用于中药注射剂的树脂检查.
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HPLC法测定炎热清片中4种成分
目的 建立HPLC法测定炎热清片中龙胆苦苷、栀子苷、芒果苷和黄芩苷的含有量.方法 分析采用C18色谱柱;以甲醇-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱;检测波长254 nm.结果 龙胆苦苷、栀子苷、芒果苷和黄芩苷分别在12.17~304.2、54.99~1 375、5.320~133.0、479.2~11 980 ng范围内呈良好的线性关系,R分别为0.999 5、0.999 6、0.999 7、1.000,平均回收率(n=6)分别为99.36%、99.37%、98.24%、98.96%.结论 该方法可靠准确,专属性强,可用于炎热清片的质量控制.
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新疆两色金鸡菊挥发油清除亚硝酸盐、抑制亚硝胺形成及抑菌活性
目的 考察新疆两色金鸡菊挥发油清除亚硝酸盐、抑制亚硝胺形成的能力,同时测试其对5种常见细菌的抑菌能力.方法 体外模拟人体胃液酸性环境(pH 3.0,37℃),对水蒸气蒸馏法获得的新疆两色金鸡菊挥发油进行清除亚硝酸盐(NaNO2)和抑制亚硝胺形成活性测试;同时考察其对志贺氏菌、乳房链球菌、沙门氏菌、出血性大肠埃希氏菌和大肠埃希氏菌的抑制能力.结果 新疆两色金鸡菊挥发油对亚硝酸盐的清除能力SC50为(0.391 2±0.012 7)μg/mL,是维生素C(1.0345 ±0.0648)的2.6倍;是叔丁基对羟基茴香醚(1.278 3±0.059 2)的3.3倍.其对亚硝胺形成的抑制能力SC50为(0.656 4±0.036) μg/mL,是维生素C(15.76±0.061)的24倍,是叔丁基对羟基茴香醚(14.39±0.029)的22倍.同时挥发油对上述5种细菌的生长具有一定的抑制作用,但效果弱于阳性对照药青霉素G钠.结论 新疆两色金鸡菊挥发油具有很强的清除亚硝酸盐和抑制亚硝胺形成的能力,同时具有一定抑制细菌生长的能力.
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复方儿茶酊的生药学鉴定及质量控制
目的 建立复方儿茶酊的生药学鉴定标准,并通过HPLC法同时测定其中儿茶素、表儿茶素、黄芩苷及小檗碱的含有量.方法 性状鉴别和显微鉴别对儿茶、黄芩及黄柏进行鉴定.HPLC分析采用Kromasil C1s色谱柱(250 mm× 4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸水,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长300 nm;进样量10 μL;柱温30℃.结果 儿茶、黄芩及黄柏经鉴定均为正品.儿茶素在10~ 200 μg、表儿茶素在0.1~20μg、黄芩苷在10~200μg、小檗碱在0.1 ~ 20μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率(RSD)分别为99.7%(1.7%)、98.8%(2.1%)、101.0%(1.4%)、100.2%(1.9%).结论 该方法简单可靠,可对复方儿茶酊进行质量控制.
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HS-SPME-GC-MS联用分析五色梅不同部位中挥发性成分
目的 分析五色梅Lantana camara Linn.花、茎、叶、果实中挥发性成分.方法 采用顶空固相微萃取(HSSPME)法萃取五色梅挥发性成分,结合气相色谱-质谱联用(GC-MS)法分析其组成,面积归一化法计算各成分的相对含有量.结果 鉴定出74个化合物,共有成分有31种.其中,花中鉴定出51个化合物,占挥发物总量的92.53%;叶中鉴定出47个化合物,占挥发物总量的93.38%;茎中鉴定出54个化合物,占挥发物总量的93.76%;果实中鉴定出53个化合物,占挥发物总量的94.08%.叶中挥发性成分含有量高,花次之,茎和果实相当,为低.结论 五色梅不同部位的化学成分基本相近,但含有量差异明显.
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响应面法优化机械化学辅助提取西红花花瓣总黄酮工艺
目的 优化机械化学辅助提取西红花Crocus sativusL.花瓣总黄酮工艺.方法 在单因素试验的基础上,利用响应面法对碳酸钠用量、液料比和提取时间进行优化.结果 佳提取条件为球磨时间15 min、碳酸钠用量19.55%、液料比39.3∶1、提取时间38 min,提取温度65℃,提取率2.296%.结论 该工艺准确可靠,可用于机械化学辅助提取西红花花瓣总黄酮工艺.
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黄芪甲苷抗人肺癌SPC-A-1细胞增殖作用及其机制
目的 探讨黄芪甲苷对人肺癌SPC-A-1细胞增殖抑制作用及其机制.方法 细胞分为不同浓度黄芪甲苷组(10、20、40μmol/L)及溶剂对照组,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)染色法检测黄芪甲苷对SPC-A-1细胞活力的影响,原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性,免疫印迹法(Western blot)检测β细胞淋巴瘤2因子(BCL2)、凋亡相关基因(BAX)蛋白的表达.结果 黄芪甲苷作用24、48、72 h后能显著抑制SPC-A-1细胞活力;同时黄芪甲苷能够增加SPC-A-1细胞的凋亡率;10~ 40 μmoL/L的黄芪甲苷能明显增加SOD及GSH-Px的活性,同时能使细胞中BCL2蛋白表达降低(P<0.01),BAX蛋白表达升高,BCL2/BAX比率降低.结论 黄芪甲苷能抑制SPC-A-1细胞增殖,增加细胞凋亡率,其机制可能与其增加SOD及GSH-Px活性有关.
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平胃散中药物炮制前后及配方颗粒与传统汤剂的药效学比较
目的 针对平胃散燥湿健脾、行气和胃的功效,复制相应的病理模型,将方中药物炮制前后分别组成平胃散,进行药效学比较研究,探讨方中药物炮制的合理性;同时将佳组方制成平胃散配方颗粒与传统汤剂进行药效学比较,拟阐明平胃散配方颗粒与汤剂的生物等效性.方法 将80只大鼠随机分为空白组,模型组,生品低、高剂量组,炮炙品低、高剂量组,配方颗粒低、高剂量组8个组.除空白组外,其余各组大鼠采用饮食不节,外湿过盛,情志不遂的综合方法复制湿困脾胃证病理模型,再进行平胃散干预治疗.结果 造模后,模型组与空白组相比,其胃排空和小肠推进能力下降,血清淀粉酶(AMS)、胃泌素(GAS)含有量显著下降,神经降压素(NT)、胃动素(MTL)、一氧化氮(NO)含有量显著升高;与模型组比较,平胃散配方颗粒和汤剂各剂量组均能显著降低模型大鼠营养糊的胃残留率,提高小肠推进率,并能改善大鼠血清各项指标.结论 平胃散中药物炮制入药具有一定的合理性和科学性,平胃散配方颗粒与汤剂的药理作用有生物等效性.
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慈姑多糖的提取工艺及其抗肿瘤活性
目的 研究慈姑多糖的佳提取工艺,并测定其抗肿瘤活性.方法 苯酚-硫酸法测定慈姑多糖含有量.在单因素试验的基础上采用L9(34)正交试验,以慈姑多糖提取率为参数,分析提取次数、提取温度、提取时间与料液比对慈姑多糖提取率的影响,优化提取工艺.在小鼠右腋皮下接种S180肿瘤细胞,灌胃后观察移植瘤抑制率,ABCELISA法检测小鼠血清中IL-2、TNF-α水平.结果 佳条件为料液比1∶40,提取温度100℃,提取时间120 min,提取次数3次,平均提取率为13.76%.慈姑多糖可抑制小鼠S180移植瘤的生长,高剂量组(1.60 g/kg)抑瘤率为39.80%,还能提高血清中IL-2和TNF-α水平.结论 慈姑多糖具有较明显的体内抗肿瘤活性,其机制可能与多糖提高机体免疫功能有关.
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HPLC法同时测定牛黄抱龙片中7种成分
目的 建立HPLC法同时测定牛黄抱龙片(牛黄、茯苓、麝香等)中7种成分的含有量.方法 分析采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm);流动相乙腈(A)-0.05%磷酸溶液(B),梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;夏佛托苷和异夏佛托苷的检测波长为270 nm,去氢土莫酸、土莫酸、3-表去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸为210 nm;进样量20 μL.结果 夏佛托苷、异夏佛托苷、去氢土莫酸、土莫酸、3-表去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸分别在2.88 ~ 57.60 μg/mL(r=0.999 4)、2.42~ 48.40 μg/mL(r=0.999 1)、3.17~ 63.40 μg/mL(r=0.999 9)、2.36 ~47.20 μg/mL(r=0.999 6)、2.18~43.60 μg/mL(r=0.999 7)、3.12~62.40 μg/mL(r=0.999 9)、3.46~ 69.20 μg/mL(r=0.9998)范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为98.89%(1.30%)、97.74% (1.16%)、99.33% (1.15%)、98.57% (1.25%)、97.08% (0.58%)、99.44% (1.12%)、98.09%(1.66%).结论 该方法简便、快速、准确,可用于牛黄抱龙片的质量控制.
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HPLC-DAD法同时测定右归丸中6种成分
目的 建立高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法同时测定右归丸(熟地黄、附子、肉桂等)中6种成分的含有量.方法 分析采用Waters X Bridge-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-1%冰醋酸,梯度洗脱;柱温30℃;体积流量1.0 mL/min.结果 绿原酸、莫诺苷、松脂醇二葡萄糖苷、马钱苷、阿魏酸和肉桂酸均呈良好的线性关系(r≥0.999),平均加样回收率(n=6)为99.7%~102.2% (RSD< 3%).结论 该方法简便快速,准确可靠,重复性好,可用于右归丸的质量控制.
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原子荧光光谱法测定麦味地黄丸中砷和汞
目的 建立原子荧光光谱法测定麦味地黄丸(麦冬、五味子、熟地黄)中砷和汞的含有量.方法 61批样品微波消解后进行分析;PMT负高压270 V;灯电流为砷59 mA,汞20 mA;原子化器高度8 mm,载气(Ar)体积流量300 mL/min.结果 砷和汞分别在0~10 μg/L (r=0.9999)和0~1.0 μg/L (r=0.999 8)范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)分别为94.2%(RSD=0.28%)和97.8% (RSD=1.35%).结论 样品中砷的检出率为1.64%,合格率为98.4%;汞的检出率为6.56%,合格率为93.4%.
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RP-HPLC法同时测定强力天麻杜仲胶囊中6种成分
目的 建立RP-HPLC法同时测定强力天麻杜仲胶囊(天麻、杜仲、当归等)中6种成分的含有量.方法 分析采用依利特C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈(A)-0.03%磷酸(B),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长220 nm;柱温25℃.结果 天麻素、对羟基苯甲醇、松脂醇二葡萄糖苷、阿魏酸、咖啡酸和绿原酸分别在1.010 0~10.1000 μg(r=0.999 6)、0.012 5 ~0.125 0μg(r=0.999 8)、0.009 8 ~0.098 0μg (r=0.999 1)、0.0320~0.320 0μg (r=0.999 1)、0.049 5~0.495 0μg(r=0.999 2)、0.031 6~0.316 0μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为97.9%、97.5%、96.7%、97.8%、96.8%、98.2%,RSD分别为0.25%、1.25%、2.19%、0.59%、1.02%、0.90%.结论 该方法准确可靠,重复性好,可用于强力天麻杜仲胶囊的质量控制.
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HPLC-DAD法同时测定四季三黄丸中9种成分
目的 建立高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法同时测定四季三黄丸(大黄、黄柏、黄芩等)中9种成分的含有量.方法 分析采用Agilent SB-C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5μm);乙腈(A)-0.5%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;柱温38℃;大黄酸、大黄素、大黄素酚和大黄素甲醚检测波长254 nm,栀子苷240 nm,黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素278 nm,巴马汀345 nm;进样量10μL.结果 栀子苷、黄芩苷、黄芩素、巴马汀、大黄酸、汉黄芩素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在15~225 μg/mL (r=0.999 8)、8~120 μg/mL(r=0.999 3)、7~105 μg/mL (r=0.999 6)、10~150μg/mL (r=0.999 3)、20~300 μg/mL(r=0.999 5)、6~90 μg/mL(r=0.999 7)、5~75 μg/mL(r=0.999 6)、15~225 μg/mL(r=0.999 5)、21~315 μg/mL(r =0.999 4)范围内线性关系良好,平均回收率98.82% ~ 100.85%,RSD均小于2.0%.结论 该方法简单、准确、可靠,可用于四季三黄丸的质量控制.
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清肠栓质量标准研究
目的 建立清肠栓(三七、青黛、五倍子等)的质量标准.方法 TLC法对三七、青黛、五倍子和马齿苋进行定性鉴别,HPLC法定量测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含有量.结果 TLC斑点清晰,分离度好.三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1分别在1.007 5~8.06 μg(r=0.999 9)、0.99~7.92 μg (r=0.999 1)、1.0125~8.1 μg (r=0.999 1)范围内线性关系良好,平均回收率均大于95%.结论 该方法可靠准确,专属性好,可用于清肠栓的质量控制.
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结合斑蝥素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的作用
目的 研究贵州罗甸地区南方大斑蝥(Mylabris phalerata Pallas)和黄黑小斑蝥(Mylabris cichorii Linnaeus)体内的结合斑蝥素(conjugated cantharidin)对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用两种斑蝥三氯甲烷提取物的水浸液获取结合斑蝥素.运用磺酰罗丹明染色法(SRB)检测结合斑蝥素对HepG2细胞增殖的作用.利用Annexin V-FITC/PI双染法检测结合斑蝥素对HepG2细胞凋亡的影响.应用倒置相差显微镜、透射电子显微镜观察凋亡细胞的形态学变化.结果 两种结合斑蝥素对HepG2细胞的增殖均有显著的抑制作用,呈剂量依赖性,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.90、0.85 mg/L.流式细胞术结果显示,以0.90 mg/L的南方大斑蝥结合斑蝥素和0.85 mg/L黄黑小斑蝥结合斑蝥素作用HepG2细胞24 h后,细胞呈典型的凋亡形态特征,凋亡率分别为(10.5±1.45)%和(12.8±1.53)%;结论 两种来源斑蝥体内结合斑蝥素均可抑制肝癌HepG2细胞的增殖并促进其凋亡.
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芝麻素对高糖损伤SH-SY5Y细胞的保护效果及机制
目的 研究芝麻素(sesamin)对高糖所致人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用及其机制.方法 SH-SY5Y细胞接种于含100 mmol/L葡萄糖的培养基并与10、20、40 μmol/L芝麻素共同孵育36 h,MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平,ELISA检测DNA片段及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性.2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的水平,试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和还原型谷胱甘肽(GSH)活性.光度法检测细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性,实时荧光定量检测NADPH氧化酶亚基p47phox mRNA表达.Western blot法检测p47phox蛋白表达.结果 芝麻素可增加高糖作用下SH-SY5Y细胞的存活率,抑制细胞LDH释放,阻止高糖诱导的DNA断裂,降低Caspase-3活性.同时芝麻素能够增加高糖作用下SH-SY5Y细胞内SOD、CAT和GSH的活性,清除细胞内的ROS,抑制NADPH氧化酶活性及p47phox mRNA和蛋白的表达.结论 芝麻素对高糖诱导SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抗氧化和抑制NADPH氧化酶活性有关.
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复方脑脉通治疗缺血性脑中风多靶点作用的分子对接
目的 复方脑脉通用于治疗缺血性脑中风具有重要的意义,在分子对接的基础上筛选复方脑脉通的活性成分并阐明其作用机制.方法 将缺血性脑中风的21个关键蛋白靶点与筛选得到的278个复方脑脉通活性分子进行对接.并将具有10个或10个以上靶点的活性分子通过Cytoscape 3.1.1软件建立成分-靶点网络模型进行网络分析.结果 脑缺血关键蛋白靶点对接得分大于5.0的活性分子中,川芎有19个,大黄有19个,葛根有16个,人参有4个.结论 经过分子对接技术筛选得到的58个活性小分子,仍然需要经过传统的药理学实验进行验证.
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人参水提液通过免疫调节TAMs影响A549增殖
目的 探讨人参水提液(1 g/mL人参水提液中Rg1、Re、Rb1的量分别为1.4、1.17、1.42 mg/mL)对肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)的表型调节进而间接抑制肺癌细胞A549的增殖.方法 采用佛波酯、IL-4、IL-13联合处理人急性单核细胞白血病细胞THP-1来建立TAMs的体外模型;RT-PCR技术、流式细胞技术、ELISA用于分析2.5、5、10、20、40 mg/mL人参水提液及药物处理6、12、24、48 h对TAMs的表型调节;用Transwell上下室共培养体系和上清共培养体系观察TAMs对A549增殖的抑制.结果 人参水提液能显著上调TAMs中M1型标志物IL-12及iNOS的表达水平;人参水提液双向调控M2型标志物(下调甘露糖受体CD206和上调IL-10)的表达水平.经人参水提液调节的TAMs能够显著抑制A549增殖且呈剂量依赖性.结论 人参水提液能调节肿瘤微环境中TAMs的表型进而抑制A549的增殖,这可能与人参水提液提高了TAMs中M1型巨噬细胞的比例有关.
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蠲痹胶囊醇提工艺对大鼠骨性关节炎模型的影响
目的 比较醇提工艺和水煎工艺生产的蠲痹胶囊(熟地黄、肉苁蓉、骨碎补等)防治大鼠膝骨性关节炎的差异.方法 90只SD大鼠,除空白组10只外,其余采用4%木瓜蛋白酶制备膝骨性关节炎模型,随机分为模型组,壮骨关节丸组,水煎工艺和醇提工艺蠲痹胶囊的低、中、高剂量组.给药30 d后,各组大鼠称重,检测血清及关节腔液中环氧化酶-2 (COx-2)、一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;病理学检查取各组胫骨平台关节软骨,分别进行HE、AB-PAS染色及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β (IL-1β)免疫组化染色,观察各组关节软骨形态及炎性因子表达.结果 醇提工艺蠲痹胶囊比水煎工艺更能显著降低膝骨性关节炎和大鼠血清及关节液中COX-2、NO、iNOS及TNF-α、IL-1β含有量,延缓软骨降解.结论 蠲痹胶囊醇提工艺取代水煎工艺是合理的.
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12β-羟基藜芦酰棋盘花胺对小鼠小脑和大脑皮层组织DNA损伤的影响
目的 探讨12β-羟基藜芦酰棋盘花胺(12β-hydroxylveratroylzygadenine,Vog)引起小鼠小脑和大脑皮层组织DNA损伤的影响.方法 取132只雄性昆明种小鼠,随机分为空白组,Vog高(2.50 μmol/kg)、低剂量组(0.25 μmol/kg),给药7d.采用彗星实验检测小脑和大脑皮层DNA损伤及修复情况;酶联免疫法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、醌氧化还原酶(NQO1)含有量;比色法测定小脑和大脑皮层活性氧自由基(ROS)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含有量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;RT-PCR检测小脑和大脑皮层8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(Ogg1)和血红素加氧酶-1(Ho-1)mRNA表达.结果 Vog明显提高小鼠小脑和大脑皮层MDA、ROS、NO以及尿液中8-OHdG含有量,降低GSH-Px和T-SOD活力,以及NQO1含有量,上调Ogg1表达.停药后第3天DNA修复接近正常水平,8-OHdG含有量接近正常水平.结论 Vog可能引起氧化应激,导致DNA损伤.Vog同时上调Ogg1表达,为抗氧化防御状态和DNA修复系统的代偿性调节.
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中药水提液真空膜蒸馏过程中膜通量衰减及清洗方法
目的 研究中药水提液真空膜蒸馏过程中的膜通量衰减和清洗方法.方法 选择代表性中药(黄芩、白芍、二丁颗粒)水提液,通过恒浓、浓缩实验分析膜通量衰减.以通量恢复率和膜表面结构变化为指标,考察不同清洗方法对聚偏氟乙烯疏水膜的效果.结果 与吸附污染相比,浓度变化对膜通量的影响更大.酸碱液结合的清洗效果好,通量恢复率可达97.98%;超声波清洗会破坏膜的表面结构,使通量恢复率大于100%.结论 酸碱液(0.3%氢氧化钠+0.3%柠檬酸)结合更适合用于清洗聚偏氟乙烯疏水膜.
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消癌平注射液提取浓缩工艺的优化
目的 采用充氮-纳滤耦合技术优化消癌平注射液的提取浓缩工艺.方法 以绿原酸及总酚酸为指标,采用HPLC和紫外可见分光光度法分析两者含有量的变化,比较常规方法与充氮-纳滤耦合技术的提取浓缩效果.结果 充氮提取后,绿原酸及总酚酸的含有量分别提高了33.68%和22.22%;纳滤浓缩后,两者分别提高了174.73%和97.42%.结论 该技术重复性好,可应用于中药制剂生产过程中的提取和浓缩,尤其是对含有易氧化成分者.
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12种黄酮化合物油水分配系数的测定
目的 测定12种黄酮化合物的油水分配系数.方法 采用经典摇瓶法与HPLC法测定油水分配系数,并进行比较.结果 白杨素、芹菜素、木犀草素、山柰酚、桑色素、杨梅素、橙皮素、柚皮素、花旗松素、二氢杨梅素、刺芒柄花素、大豆黄素的Log P值分别为4.38、2.69、2.89、4.87、4.62、4.23、2.44、3.77、1.76、1.36、4.15、3.88.结论 花旗松素与二氢杨梅素在体内能被较好地吸收,透过生物膜能力良好,而芹菜素、木犀草素和橙皮素亲脂性较强.黄酮化合物的油水分配系数与其结构有着密切关系.
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清补平衡膏提取工艺的优化
目的 优化清补平衡膏的提取工艺.方法 HPLC法测定没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药苷含有量,并以其为评价指标.在单因素试验基础上,正交试验优选提取工艺.结果 佳条件为加8倍量水,浸泡时间1h,煎煮2次,每次90 min,没食子酸、5-羟甲基糠醛和芍药苷含有量分别为212.4、7 340.52、247.59 μg/mL.结论 该方法合理可行,可为清补平衡膏的生产及其质量标准的建立提供依据.
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UPLC法同时测定桑白皮中8种成分
目的 建立UPLC法同时测定桑白皮Mori Cortex30%、50%、80%乙醇组分中桑皮苷A、桑辛素M-6,3'-O-β-D-二葡萄糖苷、5,7-二羟基香豆素、东莨菪亭、桑辛素M、桑辛素M-3'-O-β-D-葡萄糖苷、桑黄酮G、桑辛素的含有量.方法 分析采用Dionex Acclaim TMRSLC 120 C18色谱柱(2.1 mm×100mm,2.2μm);以0.1%乙酸水溶液(A)-甲醇(B)(30%乙醇)、0.1%磷酸水溶液(A)-甲醇(B)(50%乙醇)、0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)(80%乙醇)为流动相,梯度洗脱;体积流量0.3 mL/min;柱温20℃;检测波长305 nm(30%乙醇)、315 nm(50%乙醇)、280 nm(80%乙醇).结果 8种成分均呈良好的线性关系(r>0.999 0),平均加样回收率95%~105%,RSD均小于5%.结论 该方法准确简便,灵敏度高,适用于桑白皮中化学成分的测定.
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DNA提取4种中药材方法的筛选
目的 筛选龙胆Gentiana scabra Bunge、锁阳Cynomorium songaricum Rupr、天花粉Trichosanthes kirilowii Maxim.、菟丝子Cuscuta chinensis Lam.的DNA提取方法.方法 通过试剂盒法、SDS法、高盐低pH法、CTAB法以及改良PVP法,对4种中药材DNA进行提取.紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增进行检测,SPSS20.0软件进行统计学分析.结果 改良PVP法所得4种中药材DNA的得率均较高.SDS法和改良PVP法提取的DNA条带较清晰,高盐低pH法提取者呈弥散状态,试剂盒法和CTAB法提取者几乎看不到条带.试剂盒法和改良PVP法提取的DNA可完全扩增ITS2和psbA-trnH序列,而其他3种方法未能完全扩增.结论 改良PVP法高效简单,适合提取这4种中药材DNA.
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诱导子和前体物质对明党参悬浮细胞中3种呋喃香豆素合成的影响
目的 考察诱导子(水杨酸、茉莉酸甲酯、酵母浸出物)和前体物质(L-苯丙氨酸)对明党参Changium smyrnioides Wolff.悬浮细胞中呋喃香豆素(佛手酚、佛手柑内酯和花椒毒素)合成的影响.方法 在悬浮细胞稳定期前加入诱导子及前体物质,以悬浮细胞增长量和呋喃香豆素含有量为指标,选择佳质量浓度及诱导时间.结果 水杨酸和茉莉酸甲酯可明显促进佛手酚、佛手柑内酯和花椒毒素的合成.其中,200 μmol/L水杨酸可使其含有量达到高,分别为0.654%、0.293%和0.060%.佳诱导时间为8d.结论 水杨酸和茉莉酸甲酯增加了明党参悬浮细胞中呋喃香豆素的含有量.
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重金属在甘草中的健康风险评估及限量浓度测定
目的 评估重金属在甘草Glycyrrhizae Radix et Rhizoma中的健康风险,并测定其限量浓度.方法 计算甘草中6种重金属质量浓度及超标率,评估健康风险,蒙特卡洛模拟进行不确定性分析和敏感性分析,并测定其限量浓度.结果 Cu、Pb、As、Cd、Hg、Cr超标率分别为5.88%、26.00%、6.67%、3.33%、12.50%、35.00%,其限量浓度分别为24.60、2.31、0.185、0.615、0.43、922.51 mg/kg,宁夏产甘草的重金属安全性更高.结论 6种重金属均会造成较高的非致癌风险,并且As会引起致癌风险.Pb和As限量浓度应进一步降低以提高重金属安全性.
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沉香GC-MS指纹图谱分析
目的 建立沉香Aquilaria sinensis (Lour.) Gilg的GC-MS指纹图谱,并进行分析.方法 分析采用HP-5MS色谱柱;载气He;进样量1.0 μL;离子源温度230℃;四极杆温度150℃;质量扫描范围m/z 29~ 500.结果 10批样品中检测到90个色谱峰,鉴定出75种成分,其中共有成分11种.GC-MS指纹图谱可分成倍半萜类区间和色酮类区间,相似度0.48~0.92.R2为0.67时,样品可分为2类;R2为0.82时,样品可分为3类.利用建立的指纹图谱对2批整树结香法所产的沉香和2批未知样品进行分析.发现2批整树结香法所产沉香中化合物的类型更接近于黄熟香,色酮类成分含有量明显高于倍半萜类成分.2批未知样品分别加入了邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯和沉香提取物.结论 GC-MS指纹图谱能快速检测沉香中挥发性成分,并可用于真伪鉴别.
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无花果的药理作用研究进展
无花果、叶具有显著的抗癌与抗肿瘤、增强免疫力、抗氧化、抑菌作用,同时无花果叶还具有降血糖、抗病毒作用;在临床上,无花果植物还具有治疗痔疮的作用.为全面了解无花果植物的果实、叶、根的重要和新的药理研究进展,本文将按抗癌与抗肿瘤、增强免疫力、抗病毒、抗菌、抗氧化、降血糖和其他作用,展开论述无花果、叶、根三个部位相同和不同的药理研究,以期为开发无花果相关药用和保健产品提供有效指导.
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中药结肠靶向制剂制备技术的研究进展
结肠靶向给药可以解决普通制剂口服后在到达结肠或直肠前被吸收或降解的问题,从而提高中药对靶向组织的药理作用强度,还能代替毒副作用较大直肠给药药物,具有疗效好、使用方便、患者痛苦小、医护人员负担轻等特点.近年来,中药结肠靶向制剂制备技术正在迅速发展,本文综述了该技术的新研究进展,以期为其制备提供参考.
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含矿物药外用制剂的临床应用研究进展
矿物药及含矿物药外用制剂在我国传统医药中有着悠久的临床应用历史,是中医药不可缺少的重要组成部分,其应用极具特色.本文对近20年来含矿物类中药外用制剂的临床应用进行了总结分析,该类制剂在皮肤科、肛肠科、妇科和五官科等疾病的治疗广泛应用,效果可靠.本文旨在为含矿物药外用制剂的临床应用提供参考,并为矿物药资源的开发利用、传承和发扬提供临床基础.
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196例中药制剂不良反应分析与原因探讨
目的 探讨我院中药制剂所致药品不良反应(ADR)发生的一般规律和特点,并分析其原因,为临床医师更合理地使用中药制剂提供参考.方法 对196例中药制剂所致的ADR进行回顾性分析.结果 196例ADR的发生有个体差异;中药注射剂所致ADR例数占首位,且其中以活血化瘀类中药品种居多;ADR表现以皮肤及附件损害为常见.结论 中药制剂不良反应的发生与个体因素、药物和临床不合理使用等因素有关,应加强对中药制剂生产和临床使用的监管力度,确保患者用药安全有效.
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参附注射液联合重组人脑利钠肽治疗急性左心衰竭102例疗效观察
目的 观察参附注射液(去甲乌头碱和人参皂苷)联合重组人脑利钠肽(rhBNP)治疗急性左心衰竭(ALHF)疗效.方法 将203例ALHF患者随机分为两组,对照组101例在常规治疗基础上静脉输注冻干rhBNP注射液,治疗组102例在对照组基础上加用参附注射液,观察两组疗效和药物副作用.结果 治疗组总有效率显著高于对照组;治疗后两组血浆人脑利钠肽(BNP)水平显著降低,治疗组治疗后血浆BNP水平较对照组显著降低;两组左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(LVFS)较治疗前显著升高,左室舒张末内径(LVEDD)显著降低,治疗组治疗后LVEF和LVFS较对照组显著升高,LVEDD显著降低;治疗组治疗后血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平较治疗前显著降低,与对照组比较显著降低.治疗组低血压反应发生率低于对照组.结论 参附注射液联合rhBNP治疗ALHF疗效较好,值得临床应用.
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芪黄通秘软胶囊治疗功能性便秘的临床研究
目的 评价芪黄通秘软胶囊(黄芪、制何首乌、当归等)对功能性便秘(虚秘证)的临床安全性和有效性.方法 采用开放、多中心设计,随机选择2 400例功能性便秘(虚秘证)患者接受芪黄通秘软胶囊治疗,并进行便秘症状、中医证候疗效评价和常规安全性、不良事件/反应等安全性评价.结果 治疗21 d后,便秘症状综合疗效总有效率为94.7% (n=2430),双侧95%可信区间为93.7%~95.5%;中医证候疗效痊愈率为31.9%,总显效率为82.0%,总有效率为98.8%.研究期间出现54例(61例次)不良事件,发生率为2.2%.54例不良事件中有6例为不良反应,发生率为0.2%,均为轻度胃肠道不良反应.结论 芪黄通秘软胶囊治疗功能性便秘(虚秘证)安全有效且适用人群范围广.
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复方苦参注射液对原发性肝癌患者肝切除术后免疫功能的影响
目的 探讨复方苦参注射液(苦参和白土苓)对原发性肝癌患者肝切除术后免疫功能的影响.方法 89例完成肝切除术的原发性肝癌患者术后依据患者的意愿分为治疗组(复方苦参注射液)和对照组(未应用复方苦参注射液),观察两组患者治疗前、后免疫功能的改变.结果 治疗组和对照组术前1d的自然杀伤细胞(NK细胞)水平,辅助T细胞(CD4+)、细胞毒T细胞(CD8+)水平和CD4+/CD8+比值无统计学差异(P>0.05).术后14 d,治疗组的NK细胞水平,CD4+水平和CD4+/CD8+比值与术前自身比较,和与对照组比较都有明显上升(P<0.05).结论 复方苦参注射液能增强肝切除术后原发性肝癌患者的机体细胞免疫功能,对患者的预后具有积极意义.
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骨后康颗粒对老年股骨粗隆间骨折PFNA术后的疗效观察
目的 研究骨后康颗粒(茯苓、川续断、党参等)对老年股骨粗隆间骨折行股骨近端防旋髓内钉(PFNA)内固定术后的临床疗效.方法 选取我院70例老年股骨粗隆间骨折患者随机分为观察组与对照组,各35例.两组均行PFNA内固定术,在常规治疗的基础上,术后观察组服骨后康颗粒,对照组服碳酸钙D3片.随访比较两组患者骨折愈合时间、髋关节Harris评分、骨密度(BMD)以及药物不良反应.结果 6个月后,观察组骨折愈合时间明显少于对照组(P<0.01),BMD和Harris评分高于对照组(P<0.05),髋关节功能优良率为94.3%,高于对照组的74.3%(P<0.05),药物不良反应少于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 骨后康颗粒对促进老年股骨粗隆间骨折愈合有显著效果,可提高BMD,改善髋关节功能,提高患者的生活质量.
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UPLC-Q-TOF/MS法分析对叶百部蜜炙前后化学成分的变化
目的 采用超高效液相-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)法分析对叶百部Stemona tuberosa Lour.蜜炙前后化学成分的变化.方法 分析采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱;以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相,梯度洗脱;正离子模式下采集数据.主成分分析(PCA)法和正交偏小二乘判别分析(OPLS-DA)法进行数据处理.结果 蜜炙后,百部宁、oxystemoninine、百部碱、N-氧-对叶百部碱及其同分异构体、对叶百部碱H含有量减少.结论 对叶百部蜜炙前后化学成分差异显著,可能是该植物增效减毒的物质基础.
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白芍药材和饮片一体化加工工艺的优化
目的 优化白芍Paeoniae Radix Alba药材和饮片的一体化加工工艺.方法 UPLC法测定没食子酸、儿茶素、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷含有量,并以其为指标,煮制时间、干燥温度及干燥时间为因素,正交试验法优化加工工艺.结果 佳条件为煮制时间15 min,干燥温度50℃,干燥时间6h.结论 该工艺保证白芍药材和饮片质量,降低生产成本,并提高生产效率.
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HPLC法同时测定杜仲3个药用部位中8种成分
目的 建立HPLC法同时测定杜仲Eucommia ulmoides Oliver板皮、枝皮及叶中8种成分的含有量.方法 分析采用Agilent Zorbax Eclipse C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长208 nm(桃叶珊瑚苷、槲皮素)、238 nm(京尼平苷酸、京尼平苷、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷)和320 nm(绿原酸、咖啡酸).结果 桃叶珊瑚苷、槲皮素、京尼平苷酸、京尼平苷、京尼平、松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸和咖啡酸分别在0.037 5~2.25、0.024 4~0.488、0.008 7~0.487 2、0.019 85~ 0.397、0.022 9 ~0.458、0.027 5~1.1、0.029 45~0.736、0.004526~0.238 1μg范围内呈良好的线性关系.叶中黄酮和苯丙素含有量高于板皮,枝皮中木脂素含有量与板皮相当,而且这两个药用部位中环烯醚萜含有量都较高.结论 在降血压和抗炎应用中,杜仲枝皮与叶可作为板皮的替代物.
年 | 期数 |
2019 | 01 02 |
2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2004 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 z1 |
2003 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2002 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2001 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
2000 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |