脂质体介导p27基因转染对喉癌细胞系Hep-2生长影响的研究

目的 探讨p27基因对喉癌Hep-2细胞系生长的抑制作用,为喉癌发生机制的研究和基因治疗提供理论依据.方法 采用基因转染技术,将p27cDNA转染到喉癌Hep-2细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响.结果 转染p27基因的喉癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约4倍.对细胞周期分析表明,处在G0～G1期的细胞由32.2%增加到66.9%,经Dot blot、Western blot杂交和免疫组化证实,p27mRNA表达有明显差异(P<0.01),p27的蛋白表达量有明显差异(P<0.01),说明p27蛋白具有生长抑制功能,其作用点为G1～S期.结论 提高喉癌细胞中p27的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,导人p27基因是一种治疗喉癌的新途径.

截敏祛风汤对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织的影响

目的 观察截敏祛风汤对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)大鼠的治疗作用,探讨其作用机制.方法 选择健康大鼠40只,随机分为截敏祛风汤组(A组)、西替利嗪组(B组)、模型对照组(C组)和正常对照组(D组).造模成功后分别给药7天,观察大鼠行为学变化,计数鼻腔分泌物中嗜酸性粒细胞(eosinophile granulocytest,EOS);观察鼻黏膜组织形态学改变,检测乙酰胆碱酯酶(acetylcholine esterase,AchE)活性.结果 A、B组大鼠过敏症状较C组明显减轻,与D组相近;A、B、D组鼻分泌物中EOS个数明显低于C组;各组大鼠鼻黏膜组织形态学表现不同:A、B组鼻黏膜组织中AchE活性升高,与C组比较有显著差别(P<0.05);C组和D组AchE活性相近.结论 截敏祛风汤能明显改善AR大鼠的过敏症状,机制可能是通过作用于EOS,延缓或阻断变态反应进程,提高大鼠鼻黏膜组织中AchE活性,进而降低组织中乙酰胆碱含量来实现的.

RNA干扰沉默STAT3基因增强人喉癌细胞放射敏感性的实验

目的 探讨RNA干扰沉默信号转导及转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)基因对人喉癌Hep-2细胞放射敏感性的影响.方法 构建STAT3短发夹RNA(short halrpin RNA,shRNA)真核表达质粒pshSTAT3,将PshSTAT3和阴性对照质粒(pshNeg)转染喉癌Hep-2细胞,24小时后以60Co γ射线0、2、4、6、8、10 Gy照射,培养48小时后,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测细胞凋亡率、6 Gy射线照射后的STAT3、p-STAT3、B淋巴细胞2(bcl-2)蛋白的表达.结果 成功构建STAT3重组质粒pshSTAT3,质粒转染人喉癌Hep-2细胞后,pshSTAT3与pshNeg组和空白对照组相比,细胞增殖明显受抑制,凋亡率明显升高(P<0.05).pshSTAT3+照射组STAT3、p-STAT3、bcl-2的蛋白表达量均明显低于空白对照组、单纯照射组、pshNeg组、pshNeg+照射组和pshSTAT3组(P<0.05),p-STAT3蛋白表达与bcl-2表达呈正相关(r=0.974,P<0.05).结论 RNA干扰抑制STAT3基因表达能提高Hep-2细胞对放射线的敏感性,STAT3基因可能是联合放疗治疗头颈肿瘤的理想靶点.

以鼻后滴流为主要症状的变应性鼻炎的误诊分析

目的 探讨具有鼻后滴流症状的变应性鼻炎患者的临床表现特点及容易误诊的原因.方法 分析3例分别被诊断为慢性鼻窦炎、感冒后咳嗽综合征、慢性鼻炎的以鼻后滴流为主要症状的变应性鼻炎患者的诊疗经过,分析症状的发生机制和剖析误诊原因.结果 按照目前推荐的变应性鼻炎治疗推荐原则,经抗变应性鼻炎的治疗,患者症状缓解.临床治愈.结论 误诊原因:①以非变应性鼻炎症状为主诉;②鼻塞、鼻痒、喷嚏、清涕等症状程度轻:③其他症状,如鼻后滴流引发的刺激性咳嗽、咽部异物感、鼻塞等症状较重;④有变应性鼻炎症状前有明显的鼻窦炎、上呼吸道染等症状,掩盖变应性鼻炎本身的症状.因此,对于有鼻后滴流症状的患者,应考虑有变应性鼻炎的可能.如果怀疑变应性鼻炎,可以考虑试验性治疗.

喉全切除术后应用电子喉与机械喉的声学参数比较

目的 比较喉全切除术后应用电子喉与机械喉患者的声学参数异同,为无喉者的发音状况提供参数指标.方法 选取喉全切除术后应用电子喉与机械喉患者分别为28例和30例,同时选取无嗓音病者24例作为对照组.测定发元音/a/时的声学参数,并进行比较.结果 电子喉组与机械喉组相比较,各声学参数差异均无统计学意义(P均>0.05);而与健康组相比较,声时、大声强、一口气节数、基频以及振幅无显著性差异,基频微扰、振幅微扰、标准化噪声能量和谐噪比有显著性差异(P均<0.05).结论 电子喉组的发音声学特征与机械喉组相近,与健康组相比均有显著性差异.机械喉音的音调、音色、音质优于电子喉.

变应性鼻炎小鼠外周调节性T细胞的表达特征

目的 运用流式细胞仪检测小鼠变应性鼻炎模型的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和脾脏单个核细胞中Foxp3+、CD4+、CD25+的表达情况,比较与正常对照组间是否存在差异.方法 选取8周龄成熟雌性BALB/c小鼠30只,随机分为实验组和对照组各15只.卵清蛋白致敏建立BALB/c小鼠变应性鼻炎模型.21天实验结束取鼻腔HE染色观察形态学特点及差异;分别取脾脏和外周血分离获得单个核细胞,流式细胞仪检测其Foxp3+、CD4+、CD25+的表达情况.结果 卵清蛋白造模成功,实验组小鼠均出现喷嚏、搔鼻、鼻周红肿等症状;镜下可见鼻黏膜下较多嗜酸性粒细胞、浆细胞及肥大细胞浸润.实验组PBMC中CD4+CD25+T细胞和Foxp3+CD4+CD25+T细胞明显低于对照组,均具有极显著性差异(P<0.01).小鼠脾脏单个核细胞中CD4+CD25+T细胞和Foxp3+CD4+CD25+T细胞均略低于对照组,但统计学显示无显著性差异(P>0.05).结论 调节性T细胞(regulato ry T cell,Treg)在变应性鼻炎中作用机制尚未完全明晰,本实验从分子水平分析变应性鼻炎中CD4+细胞的表达特征,旨在为Treg的深入研究提供又一实验依据.

共刺激分子CD28、CD137在喉癌患者T淋巴细胞中的表达及其与细胞免疫功能失调的关系

目的 探讨共刺激分子CD28、CD137与喉癌患者细胞免疫功能状况的关系.方法 应用梯度离心法分离并纯化外周血和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiItrating lymphocyte,TIL),流式细胞术检测喉癌患者外周血T细胞CD8+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、CD28+细胞亚群分布和双香豆素(phytohemaggIutinin,PHA)刺激前后患者外周血T细胞及TIL中CD137的表达.结果 喉癌患者CD8+T细胞比率为(32.11±5.07)%,CD8+CD28-T细胞比率为(21.03±5.69)%,均明显高于正常对照组(均P<0.01);CD28+T细胞比率为(45.53±4.51)%,CD8+CD28+T细胞比率为(12.70±3.41)%,均明显低于正常对照组(P均<0.01).CD137+T细胞活化增殖能力与CD28的阳性表达呈明显的正相关,喉癌患者外周血T细胞和TIL在未受PHA刺激时CD137+T细胞比率分别为(1.90±0.71)%和(3.52±1.64)%,明显高于正常对照组(P均<0.01).但经PHA刺激484小时后,外周血和TIL中CD137+-48h/CD137+-Oh值为分11.48±4.03和10.39±3.02,均明显低于正常对照组,P均<0.01.结论 共刺激分子CD28在CD8+T细胞亚群中的表达失调使免疫效应性CD137+T细胞活化增殖能力下降,是引起喉癌患者细胞免疫功能紊乱的重要原因之一.

上颌骨掀翻入路颅底应用显微解剖学

目的 研究上颌骨掀翻入路所暴露的颅底解剖区域以及所受到的限制,为采用该术式处理颅底病变提供显微解剖学资料.方法 对10例(20侧)经甲醛固定的成人尸头,模拟上颌骨掀翻入路,对涉及的组织结构,神经、血管进行显微解剖观测.结果 上颌骨掀翻入路可暴露广阔的颅底解剖区域,可以同时处理中颅底和侧颅底包括鞍区、垂体、斜坡全程和至少第1颈椎、手术侧海绵窦、鼻咽部、翼腭窝、颞下窝、咽旁间隙的茎突前、后间隙,颈内动脉岩骨内段及岩尖等区域的病变.结论 ①经一侧上颌骨掀翻入路可同时获得对中颅底及侧颅底良好的暴露;②蝶骨翼突及其后方的腭帆张肌、腭帆提肌及咽鼓管等结构是限制同时处理中颅底和侧颅底病变的主要障碍;③经一侧上颌骨掀翻入路处理咽旁间隙的茎突后间隙、茎突外区域、颈内动脉岩骨水平段及海绵窦区域病变时会受到一定限制.

β-连环素及Notch1蛋白质在鼻内翻性乳头状瘤中的表达及意义

目的 通过对鼻内翻性乳头状瘤(nasal inverted papilloma,NIP)组织中β-连环素(β-catenin)及Notch 1表达水平的测定,探讨NIP中Wnt及Notch信号传导系统的调控作用.方法 63例鼻内翻性乳头状瘤、30例鼻息肉、38例鼻腔鼻窦鳞状细胞癌(简称鳞癌)及11例正常鼻黏膜组织均采用免疫组织化学法检测β-catenin及Notch 1蛋白质的表达水平.结果 鼻息肉、鼻内翻性乳头状瘤和鼻腔鼻窦鳞癌中的β-catenin异常表达率分别为3.33%、58.73%和78.95%;正常鼻黏膜、鼻息肉、鼻内翻性乳头状瘤和鼻腔鼻窦鳞癌中Notch 1阳性表达率分别为27.27%、36.67%、73.02%和92.11%,呈阶梯状升高且差异有统计学意义(P<0.05);β-catenin异位表达与鼻内翻性乳头状瘤不典型增生程度有一定的相关性(P<0.05),复发组中Notch 1的水平明显高于初发组(P<0.05).结论 Wnt/β-catenin和Notch信号途径的异常澈活对NIP中起不同作用,β-catenin对NIP的发生发展及终恶变成鳞癌可能起到了重要作用,术后Notch 1水平升高可提示NIP复发.

经鼻内镜下脑脊液鼻漏修补术

目的 探讨经鼻内镜下脑脊液鼻漏修补术的临床应用.方法 2003年10月～2008年12月诊治的38例行经鼻内镜下脑脊液鼻漏修补术的患者,其中外伤性脑脊液鼻漏21例,自发性脑脊液鼻漏10例,其他原因7例.结果 术后随访6个月～3年,1次手术成功率为92.1%.2次手术成功2例,1例3次手术成功,术后脑膜炎和急性梗阻性脑积水各1例.结论 经鼻内镜下脑脊液鼻漏修补术成功率高,创伤小,应作为首选治疗方法;漏口定位和处理、适宜的外科修补技术及术后处理是手术成功的关键.

鼻腔硬化性上皮样纤维肉瘤

硬化性上皮样纤维肉瘤(SCIe rosing epitheliojd fibrosarcoma,SEF)是一种罕见的好发于软组织的肿瘤由Meis-kindbIom等[1]在1995年首次报道,原发于鼻腔的SEF未见报道.2008年3月我科收治1例鼻腔SEF的患者,现对其临床表现、病理特征、诊断等进行初步分析.

食管异物致食管穿孔伴颈部脓肿

食管异物是耳鼻咽喉科常见的急症.单纯的食管异物,经食管镜取出后患者可恢复健康,进入正常的工作及生活.一旦异物导致食管穿孔则有较高的死亡率,有文献报道为15%～33.3%[1].颈部脓肿形成是食管穿孔后严重的并发症之一,病情危重,发展迅速,严重者可危及生命,其抢救措施是积极抗炎的同时行颈侧切开脓肿引流.我科收治1例食管异物致食管穿孔伴颈部脓肿形成的病例,经食管镜下异物取出后保守治疗,穿孔愈合颈部脓肿吸收,此在临床较少见,现将该病例报道如下.

慢性化脓性中耳炎病原菌分布及耐药性分析

近年来由于抗菌药物广泛应用,慢性化脓性中耳炎(chronic suppuralive otitis media, CSOM)病原菌构成及对抗菌药物的敏感性发生了改变.为了解本地区情况,指导临床合理用药,对近2年CSOM患者需氧菌培养阳性结果进行回顾性分析,报道如下.

鼻腔神经内分泌癌

神经内分泌癌(neuroendocrine carcinoma,NEC)是一类极少见的恶性肿瘤,具有合成、贮存和分泌激素的功能,发生于鼻腔者极少见,本文对2002和2005年我院收治的2例鼻腔神经内分泌癌报道如下.

咽后脓肿累及上纵隔1例

1 临床资料患者,男,46岁,因误咽鱼骨6天,颈部肿胀伴呼吸困难4天急诊入院.患者6天前误咽鱼骨出现颈部不适,进食后颈部疼痛加重,当日行胃镜检查,未见异物,自行口服抗生素治疗未见好转.4天前颈部疼痛加重,伴呼吸困难,不能吞咽及进食,颈部进行性肿胀,故急来我院.

上颌窦黏液瘤1例

1临床资料患者,男性,14岁,以左侧上颌窦根治术后2年,左面部肿胀1个月收治入院.患者2年前因左面部肿胀于当地行左上颌窦根治术,术后病理为梭形细胞肿瘤,伴黏液变性.1个月前无明显诱因再次出现左侧面部肿胀,无面麻,牙痛,张口困难,视力障碍,无头痛、发热等其他不适.既往体健.

长期吸鼻致中耳不张

1临床资料患者男,18岁.双侧耳闷、耳鸣10余年来诊.自幼感双耳闷、耳鸣,吸鼻后改善,否认耳流脓史.专科检查双侧外耳道干净、通畅,双鼓膜完整但明显内陷,自行捏鼻鼓气后双侧鼓膜向外膨出,吸鼻时鼓膜内陷且与砧镫关节相贴,鼓气耳镜检查鼓膜活动欠佳.双侧鼻腔黏膜光滑,淡红色,双下鼻甲不大,鼻腔干净,未见分泌物.鼻咽镜检查双侧咽鼓管13通畅,鼻咽顶未见腺样体残留.

过敏性鼻炎患病状况研究

过敏性鼻炎属慢性非感染性疾病,是全球性的健康问题.由于过敏性鼻炎在人群中的患病率较高,分布范围较广,常用描述性研究中的现况研究观察过敏性鼻炎的患病情况.其样本选取的方法多采用抽样调查的方式,随后进行收集信息工作,分问卷调查和临床确诊检查两个步骤.常用问卷有国际儿童哮喘和过敏反应研究问卷和欧共体呼吸健康调查问卷.我国的流行病学研究以局部地区花粉症相关研究做为开端,目前已有部分符合国际流行病学研究规范的数据,初步揭示了成人和儿童在我国中心城市的患病现状.

喉全切除术后喉呖闭锁(续上期)

上呼吸消化道重复癌

临床资料患者,男,37岁,因发现颈部肿块40余天入院.患者40余天前偶然发现颈部肿块,约30天前起肿块明显增大,静脉滴注环丙沙星,肿块略缩小,于当地医院行颈部肿块穿刺细胞学检查,结果:鳞状细胞癌.发病以来无颈部活动受限,无呼吸及吞咽困难,无咽喉部疼痛等不适.一般状态良好,既往身体健康,无家族遗传性疾病史.

脱细胞骨微管用于构建组织工程化听骨赝复物的可行性

目的 观察脱细胞骨微管用于制备组织工程化听骨的可能性.方法 制备脱细胞骨微管,观察其组织相容性及生物力学变化,并作为含复合骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein,BMP-2)胶原海绵载体,植入动物中耳空腔,进行异位诱导成骨观察.结果 脱细胞骨微管具有良好的生物相容性,其生物力学性能无显著变化.负载含BMP-2胶原海绵后,可以在中耳腔内诱导形成新生骨组织.结论 脱细胞骨微管负载含BMP-2胶原海绵可用于构建组织工程化听骨赝复物.

大鼠耳蜗器官培养及其组织学检查技术

目的 探讨大鼠耳蜗器官体外培养的方法和观察毛细胞、神经纤维及螺旋神经节细胞的组织学检查技术.方法 将出生3天的SASCO Sprague Dawley大鼠耳蜗取出平铺培养.应用神经丝免疫组织化学方法对螺旋神经节细胞及神经纤维染色,同时应用鬼笔环肽染色特异性显示耳蜗毛细胞的静纤毛和表皮板.在共聚焦显微镜下应用不同的激发荧光分别显示耳蜗毛细胞、螺旋神经节和神经纤维.结果 耳蜗器官经1～3天离体培养,内、外毛细胞生长良好,无衰亡和缺损;神经纤维排列有序;螺旋神经节细胞形态正常.结论 本文介绍的耳蜗器官体外培养方法和组织学检查指标,将在常规评估耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞和神经纤维的离体培养损害实验模型中,有一定应用价值.

三种病毒载体经蜗窗膜导入大鼠耳蜗的靶向分布比较

目的 比较3种病毒载体经蜗窗膜注人大鼠耳蜗鼓阶介导报告基因在内耳的转染分布,甄选螺旋神经节细胞及其神经纤维基因靶向转移载体.方法 分别将带有绿色荧光蛋白基因的慢病毒、5型-腺病毒、2型-腺相关病毒载体经大鼠耳蜗蜗窗膜缓慢注人鼓阶外淋巴,荧光显微镜观察病毒载体导入后3、7、14天绿色荧光蛋白基因在内耳表达部位及荧光强度.结果 经蜗窗膜注入3种病毒载体能有效转染内耳多种类型细胞,相对其他两种病毒载体,5型-腺病毒载体高效转染螺旋神经节及其神经纤维,持续稳定表达2周以上.结论 不同病毒载体经蜗窗膜导入后,在耳蜗内的表达分布存在明显差异,5型-腺病毒高效转染耳蜗神经,可作为未来听神经病变分子治疗的载体工具选用.

诱导新生大鼠耳蜗大上皮嵴细胞分化为毛细胞样细胞

目的 大鼠耳蜗大上皮嵴细胞(greater epithelial ridge,GER)转染Hath1基因,与耳蜗间质细胞共培养诱导分化为毛细胞样细胞.方法 取出生后第1天的大鼠耳蜗,利用机械分离和酶消化相结合的方法分离出纯的GER细胞,与耳蜗间质细胞共培养或转染Hath1基因培养,做免疫组化和扫描电镜观察.结果 GER体外培养具有增殖能力,GER与耳蜗问质细胞共培养或转染Hath 1基因后,免疫组化MyosinⅦa阳性,扫描电镜部分细胞的表面可见不成熟的纤毛样结构,提示GER已分化为毛细胞样细胞.结论 GER细胞作为毛细胞前体细胞可以实现体外培养,与耳蜗间质细胞共培养或转染Hath1后,可分化为毛细胞样细胞.