miR-338-5 p在肾移植患者的表达及其意义

目的：研究肾移植受者血清中miR-338-5p的表达特点，及其与B细胞活化因子（ BAFF）信号的相关性，进而探讨其在抗体介导肾移植排斥中的潜在意义。方法：收集肾移植患者的血清（健康志愿者为对照），应用荧光定量 PCR法检测患者血清中miR-338-5p的表达差异；ELISA法检测血清可溶性BAFF（ sBAFF）水平；液相芯片技术检测血清中抗HLA-Ⅰ类抗体、抗HLA-Ⅱ类抗体、抗MICA抗体滴度。采用SPSS17.0统计软件包进行分析。两个独立样本均数间的比较采用双侧t检验；相关性分析采用Spearman法及Pearson法。 P＜0.05被认为具有统计学意义。结果：与健康对照组比较，肾移植受者血清miR-338-5p水平显著下降（P＜0.001）、血清sBAFF水平显著增高（P＜0.01）。移植术后1年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后1年以上者（P＜0.01）；移植术后3年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后3年以上者（P＜0.01）。对全部研究对象进行统计分析显示，血清miR-338-5p与sBAFF、抗HLA-Ⅱ抗体均呈显著负相关，相关系数分别为-0.51（ P＜0.001）、-0.322（P＜0.05）；术后3年内者，血清miR-338-5p与抗HLA-Ⅱ抗体、抗MICA抗体均呈显著负相关，相关系数分别为-0.423（P＜0.05）、-0.411（P＜0.05）；术后3年以上者，血清miR-338-5p与抗MICA抗体、抗HLA＆MICA抗体均呈显著正相关，相关系数分别为0.486（P＜0.05）、0.578（P＜0.01）。结论：miR-338-5p直接或间接地对BAFF信号发挥调控作用；miR-338-5p可能通过对靶基因的调控参与肾移植术后抗体介导的免疫反应过程，影响移植肾长期存活。

cGVHD患者外周血中CD45 RA＋和CD45 RO＋T淋巴细胞亚群的特点及其临床意义

目的：探讨同种异基因造血干细胞移植（ allo-HSCT ）后发生慢性移植物抗宿主病（ cGVHD ）患者外周血中CD45 RA＋和CD45 RO＋T淋巴细胞亚群特点及其与cGVHD发生之间的关系。方法：回顾性研究广东省人民医院2001年3月～2009年9月64例造血干细胞移植植入成功的患者，其中无cGVHD发生21例，轻度cGVHD 15例，中度cGVHD 18例，重度cGVHD 10例，应用流式细胞术，对其外周血中CD4＋CD45RA＋、CD4＋CD45RO＋、CD8＋CD45RA＋和CD8＋CD45RO＋T淋巴细胞亚群进行检测。结果：与无cGVHD患者相比，cGVHD患者CD4＋CD45RA＋T细胞百分比均明显降低（P＜0.05），CD4＋CD45RO＋T细胞百分比均明显增高（ P＜0.05），而CD8＋CD45 RA＋、CD8＋CD45 RO＋T细胞百分比均无明显改变。轻、中、重度的cGVHD患者之间比较，CD4＋CD45RA＋、CD4＋CD45RO＋、CD8＋CD45RA＋和CD8＋CD45RO＋T细胞百分比均无明显改变。结论：CD4＋CD45RA＋和CD4＋CD45 RO＋T细胞可能对cGVHD的发生有重要意义。

血清肿瘤标志物在卵巢癌早期诊断中的临床价值

目的：研究血清中人附睾蛋白4（HE4）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原（CA125、CA199、CA153）、甲胎蛋白（AFP）和人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）7种肿瘤标志物在卵巢癌早期诊断中的临床价值。方法：选取卵巢癌、卵巢良性肿瘤患者以及门诊健康体检女性各60例，用Abbott Architect i2000SR系统检测其术前血清中7种肿瘤标志物的浓度。结果：卵巢癌组血清中HE4、CA125、CA199、CEA、CA153、AFP和β-HCG水平显著高于卵巢良性肿瘤组和对照组中的水平，其差异有统计学意义（ P＜0.05）。各肿瘤标志物对卵巢癌诊断的特异性均较高，但敏感性除HE4和CA125分别为76.67％和68.33％，其他肿瘤标记物的敏感性都不是很高。结合Youden指数和ROC曲线下面积可以看出，HE4单项检测卵巢癌的特异性、敏感性和准确度较高，CA125、CA199和CEA对卵巢癌的诊断价值中等。肿瘤标志物联合检测可以提高卵巢癌诊断的敏感性，但特异性会相应降低，综合考虑以HE4、CA125、CA199和CEA联合检测效果好。结论：CA153、AFP及β-HCG对卵巢癌诊断能力较差， HE4、CA125、CA199、CEA联合检测用于卵巢癌早期诊断的特异性，敏感性和准确度较高。

麻风病患者外周血IL-10与调节性T细胞的相关性研究

目的：通过检测麻风病患者血清IL-10及外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（ Treg）的水平，分析它们相互间的关系，探讨IL-10及调节性T细胞引起麻风患者免疫功能异常的机制。方法：用流式细胞微球芯片捕获技术（ CBA）检测30例麻风患者及25例正常对照血清IL-10的浓度；用流式细胞仪检测51例麻风患者及56例正常对照外周血Treg细胞的水平。结果：麻风患者血清IL-10浓度（130.00±54.27）pg/ml比对照组（15.64±7.11） pg/ml高（P＜0.05）；外周血Treg细胞水平（17.626±8.1977）％比对照组（9.998±1.7062）％高（P＜0.05）；麻风患者治愈后血清IL-10的浓度与外周血Treg细胞水平呈正相关线性关系（ P＜0.05）。结论：IL-10及Treg细胞的调控失衡可能是引起麻风发病的原因之一。

天津市滨海新区水痘疫苗免疫效果评价

目的：开展无明胶冻干型水痘减毒活疫苗保护性效果评价；观察突破病例发生情况，探讨水痘疫苗免疫策略。接种人群为居住在滨海新区的满12月龄～12周岁儿童，已接种过水痘疫苗或已患过水痘的除外。对照人群为环城四区同龄未接种水痘儿童。方法：对目标人群实施疫苗接种。全部接种者观察42 d至2年半后，水痘突破病例发生情况。以观察组和对照组两组对比观察计算水痘疫苗保护率。结果：本次无明胶水痘减毒疫苗突破病例为134例，发生率为0.35％；无明胶水痘减毒疫苗保护率80.92％，与国内外相关报道基本一致。结论：接种疫苗后42 d至2年半内，接种水痘疫苗可有效保护儿童免于发病，同时减轻了儿童患病的痛苦和家庭的经济负担。接种水痘疫苗后仍有突破病例发生，因此要考虑进行二次接种，以进一步观察二次接种后机体产生抗体水平变化及流行病学保护效果。

甲型H1N1流感病毒流行病学调查

目的：了解甲型H1 N1流感病毒的流行特点及传播规律，加强对流感大流行的防控。方法：收集2009年10～12月吉林大学第一医院住院发热门诊中具有流感症状患者的临床样品（鼻咽拭子和血清），采用血凝抑制法、巢式 RT-PCR技术检测具有流感症状患者血清标本中的特异性抗体、咽拭子中的甲型H1N1 RNA 等指标。结果：结果56份流感患者的咽拭子经核酸检测，甲型流感NP和M的阳性率分别为37.5％和27.8％，而甲型H1N1的阳性率仅为3.6％。通过血凝抑制实验结果表明：在相应的血清标本中，能特异性抑制甲型H1N1流感病毒红细胞凝集的样品为27份，抗体均大于1∶320，其中8份样品抗体效价大于1∶5120。恢复期的血清效价与急性期相比有显著的抗体差异，甲型H1 N1病毒特异性抗体阳性率为48.2％，明显高于核酸的检测。结论：核酸检测可在感染早期（排毒期）进行检测，而血清学的抗体检测多用在感染中后期（抗体产生）检测，两者联合可提高甲型H1 N1流感的检出率。

肿瘤逃避T细胞免疫监视的研究进展

免疫监视学说早是由Ehrlich于1909年提出的，其认为免疫系统的一个关键作用是识别并清除肿瘤，之后又不断有学者（ Burnet and Thomas ）完善免疫监视学说理论，认为免疫系统能够清除新生的肿瘤病变［1］。而肿瘤能够逃避免疫监视则被视为肿瘤的十大特征之一［2］。尽管免疫监视理论目前仍有争议，T细胞在体内抑制肿瘤发生发展中扮演的重要角色却已得到公认［3，4］。本文将针对T细胞和肿瘤的相互作用做一综述，为理解肿瘤如何逃避T细胞的免疫监视作用提供参考。

NK细胞受体及其配体与结核分枝杆菌感染

NK细胞是抗肿瘤和病毒感染的重要的固有免疫细胞，也具有重要的抗结核作用。无须预先致敏就可以杀伤被感染的细胞，但NK细胞的有效活化依赖于其激活和抑制信号间的动态平衡，与其激活性和抑制性 NK 细胞受体（ Natural killer receptor ， NKR）及其靶细胞表面相应配体的表达或缺失密切相关［1］。在结核分枝杆菌（ Mycobacterium Tuberculosis，Mtb）感染时，机体的免疫系统会相应发生一系列生理病理改变。 NK 细胞及其受体、配体也会有相应变化。本文就近年来对NK细胞与Mtb感染的相互关系及NK 细胞受体、配体与Mtb感染的相互关系的研究作一简要综述。

调控抗病毒干扰素产生的信号转导机制研究进展

干扰素（ Interferon，IFN）是有效抵抗病毒入侵的多功能细胞因子，在先天性免疫抗病毒感染过程中发挥重要作用，探讨病毒抑制干扰素产生的信号转导机制是目前研究的热点［1］。 IFN分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型，Ⅰ型与Ⅱ型IFN都具有抗病毒作用，但Ⅰ型IFN 是机体对抗病毒感染的关键因素［2］。 I 型IFN可由多种细胞产生，II型IFN只能由NK细胞、激活T淋巴细胞、巨噬细胞和神经元细胞等特定细胞产生。Ⅰ型IFN既然为抗病毒先天性免疫的主要细胞因子，那么它是如何产生，并作用于邻近细胞，防止病毒扩散的呢？首先在内体内， TLR3、TLR7／8和TLR9分别识别dsRNA、ssRNA和CpG DNA ，导致受体二聚化以及TRIF和MyD88的招募反应，起始信号级联放大，激活IRF3／IRF7、NF-κB和AP-1通路。 RIG-I／MDA5识别病毒 RNA，通过 RIG-I 的CARD结构域激活IFN-β启动刺激因子（ IPS-1）， IPS-1调节不同的调节子和激酶，诱导IRF3、IRF7和NF-κB通路激活。 IRF3／IRF7、NF-κB和AP-1等转录因子一旦激活，将转运入核，同cAMP反应元件结合蛋白（ CREB ）的结合蛋白（ CBP ）一起诱导IFN-α和IFN-β转录，调控IFN-α和IFN-β的产生。 IFN-α和IFN-β一旦产生并分泌到细胞外，通过自分泌和旁分泌的方式直接与IFN受体结合，联合JAK1激酶的受体磷酸化，通过SH2区的磷酸化作用激活STAT1和 STAT2招募，磷酸化的 STAT1和 STAT2与IFN受体分离后，与IRF9形成ISGF3复合物，转运到核后与ISRE结合，导致上百种ISGs转录，其中MxA、OAS-1／RNaseL、RIG-I／MDA5、ISG15和 PKR为5种主要的ISGs［3］。许多ISGs作为PRRs识别病毒分子，放大信号通路，增加IFN产生。本文对激活TLRs、RIG-I／MDA5、JAK-STAT及ISGs的信号转导机制研究进展进行综述。

类风湿关节炎中血管新生调节网络及其药物研究启发

类风湿关节炎是一种自身免疫性疾病，它的发病机制还未完全了解。其病理特点是：滑膜增生、血管新生以及血管翳形成。滑膜增生导致低氧，刺激血管新生，血管新生介导淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞等向滑膜迁移形成血管翳，血管翳阻断骨通过滑膜获取营养，激活破骨细胞分化，导致骨和软骨的侵蚀，关节破坏。血管生长是炎性关节炎早期极其重要的阶段。治疗类风湿关节炎的药物从以前的非特异性抗炎药转向特异性抗炎药（如TNF-α阻断剂），现在，又开始研发作用于炎症信号通路的小分子药物（如Janus 激酶抑制剂）。但是存在严重副反应以及某些个体并不反应的缺陷。所以，了解血管新生在类风湿关节炎中的机制以及研发以此为靶点的药物，引领类风湿关节炎治疗的发展是非常必要的。

共抑制分子在脓毒症中的作用研究进展

根据Kevin Lafferty提出的关于T细胞激活的双信号假说， T细胞的激活不仅需要MHC-肽-TCR提供的第一信号，而且需要细胞膜上的共信号分子所传递的第二信号。其中共刺激分子传递正性信号促进T细胞的活化，而共抑制分子将传递负性信号引发T细胞的无应答、耐受或细胞凋亡。近年研究发现，共抑制分子如程序性死亡因子（ PD-1）、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4（ CTLA-4／CD152）及B／T淋巴细胞弱化因子（ BTLA ）等在自身免疫性疾病、肿瘤、慢性感染等多种疾病中发挥作用。

视神经脊髓炎的抗体时代：论抗体致病与治病

NMO是主要累及视神经和脊髓的中枢神经系统自身免疫性脱髓鞘疾病。该病临床主要特征是病变同时或相继累及患者的脊髓和视神经，病程可呈单向，但多呈缓解复发性，女性多见，一般急性或亚急性起病。有关NMO的病因及确切的发病机制尚未完全阐明，早期该病常被认为是多发硬化的一个变异型，自NMO-IgG（水通道蛋白4抗体）及其作用靶点水通道蛋白（ AQP-4）发现以来，该病逐渐从MS独立出来。 NMO-IgG是目前NMO的唯一诊断性抗体，以往国外研究证实该抗体对诊断NMO的敏感性和特异性可高达33％～91％（平均63％）和85％～100％（平均9％），相比而言国人NMO-IgG的敏感性和特异性亦可达74.3％和100％，结合CSF抗体检测，可使敏感性进一步提高到90％以上。该抗体是否影响NMO某些临床特点目前尚存争议，已有日本学者发现抗体阳性患者的颅内病灶及长节段脊髓病灶出现的概率可能更高，但在南方汉族国人患者中并未发现该特点。该抗体对NMO的发病、缓解及诊断无疑至关重要，然其可能并非唯一致病性抗体，在NMO-IgG阴性及少数阳性NMO患者CSF或血浆中，不断有可能的新型致病抗体或治疗性抗体被发现，这些抗体的出现究竟是巧合是疾病的叠加还是对NMO确有致病／治疗意义仍有待进一步研究，本文以NMO-IgG致病机制为主要对象进行综述如下。

鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd平衡致死系统的构建及其生物学特性的研究

目的：为了研制更加安全的鸡白痢沙门菌弱毒株，并将其开发为疫苗活载体。方法：本研究构建了鸡白痢沙门菌C79-13ΔcrpΔasd缺失株。双基因缺失株的构建是以含有重组自杀性质粒pREΔasd的大肠杆菌χ7213为供体菌，C79-13Δcrp为受体菌进行接合转移，两步法筛选crp/asd基因双缺失突变株。结果：PCR及测序结果表明C79-13ΔcrpΔasd构建成功。进一步研究表明，该缺失株的生长需要外源的二氨基庚二酸（DAP），且能稳定遗传缺失的asd基因，与亲本株C79-13相比，其血清型未发生变化，但其生长速度明显减慢，毒力明显降低。结论：C79-13ΔcrpΔasd双缺失株可接受asd＋质粒作为宿主平衡致死系统高效稳定地表达外源基因，并为研制安全有效的鸡白痢沙门菌疫苗弱毒株以及进一步将其开发为适于黏膜免疫的口服活载体疫苗奠定了基础。

Peroxiredoxin 2基因慢病毒载体的构建及对结直肠癌SW480细胞增殖的影响

目的：构建Peroxiredoxin 2（Prdx2）基因慢病毒表达载体，建立能够稳定高表达Prdx2的结直肠癌SW480细胞株，研究Prdx2的高表达对SW480细胞生长增殖的影响。方法：利用PCR扩增Prdx2编码区片段，克隆插入载体Ubi-MCS-EGFP-IRES-Puromycin （GV218）中，构建Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin（LV-Prdx2）慢病毒表达载体，包装产生慢病毒颗粒，鉴定后将其转染SW480细胞，荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白表达；应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（ qRT-PCR ）和Western blot方法检测SW480细胞中Prdx2的mRNA和蛋白水平表达情况；MTT法检测细胞生长情况；平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果：构建的重组慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin（LV-Prdx2）经鉴定正确；慢病毒转染SW480细胞后，细胞中Prdx2在mRNA和蛋白水平高表达。 MTT法及平板克隆形成实验结果显示Prdx2高表达的SW480细胞增殖能力显著增强（P＜0.05）。结论：成功构建Prdx2基因慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin，筛选出稳定高表达Prdx2的SW480细胞株；高表达的Prdx2分子可显著促进结直肠癌SW480细胞增殖。

流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的方法学探讨

目的：探讨利用流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球能力试验方法的灵敏性、稳定性以及易操作性，以期获得一套优化的方案。方法：取ICR小鼠腹腔巨噬细胞，以原液和1∶1稀释液使用，采用三个微球浓度（5×106/孔、1×107/孔和1.5×107/孔），经1 h、1.5 h和2 h孵育，通过酶消化或细胞刮刀法将贴壁细胞消化处理后，利用流式细胞仪检测含不同数量荧光微球的巨噬细胞数值，计算吞噬率及吞噬指数。为验证实验条件的可靠性，取ICR小鼠每日灌胃金葵素胶囊30 d后，取腹腔巨噬细胞分别用流式细胞术和传统鸡红细胞方法检测吞噬能力。结果：微球浓度越高，吞噬率和吞噬指数越大；细胞浓度为1×105～2×105 ml-1，孵育时间1.5 h，微球浓度为1.5×107/孔时吞噬率（PP）和吞噬指数（PI）高（89.87％，1.54），孵育至2 h时出现下降（57.71％，1.51）；细胞浓度对吞噬率和吞噬指数的影响与荧光微球浓度呈负相关。贴壁巨噬细胞经胰酶加EDTA消化后PP为44.51％，PI为0.68，单独使用EDTA消化后PP为37.92％，PI为0.57，均低于使用细胞刮刀处理组。流式细胞术法与鸡红细胞法测定金葵素胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力影响的结果一致，均为高剂量组吞噬率与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：小鼠腹腔巨噬细胞浓度调整为1×105～2×105，孵育1 h，1×107/孔微球浓度可使实验快速而又精确地反映巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，且与传统方法结果有良好的一致性。

siRNA对人-单核巨噬细胞TLR2基因表达的抑制

目的：筛选特异性抑制人-单核巨噬细胞TLR2基因表达的siRNA（ small interference RNA ）序列，在分子水平上初步讨论其在HIV治疗方面的前景。方法：在基因库中寻找TLR2基因的mRNA序列，针对TLR2基因设计并合成3条siRNA，阳性对照为人类看家基因GAPDH siRNA，阴性对照为6-羧基荧光素标记的siRNA（ NC-FAM）。采集健康人新鲜外周血，分离单个核细胞，再经贴壁法培养纯化为人-单核巨噬细胞。采用阳离子脂质体试剂Lipofectamine 2000介导转染培养的人-单核巨噬细胞。用q-PCR法测定干扰后单核巨噬细胞的TLR2 mRNA的表达，Western blot 法测定干扰后TLR2蛋白表达。结果：转染72 h后，阳性对照组GAPDH mRNA及蛋白的表达明显降低（ P＜0.05）。 siRNAs组TLR2 mRNA表达水平整体有显著性差异（F＝41.957，P＜0.001），与阴性对照组比较，TLR2 siRNA各组的TLR2 mRNA相对表达水平均明显降低（P＜0.05），抑制率分别为46％、43％、43％。 WB结果显示，TLR2 siRNA各组的TLR2蛋白表达量显著降低（ P＜0.05）。结论：本研究设计的siRNA能够有效抑制人-单核巨噬细胞TLR2基因的表达，从分子免疫学角度出发，表明通过阻断siRNA介导的TLR2信号传导通路能够为HIV治疗提供新思路。

与抗原结合的结缔组织肥大细胞促进特异性T细胞反应

目的：研究结缔组织肥大细胞（Connective tissue mast cells，CTMCs）通过抗原依赖方式对T细胞反应的影响。方法：从小鼠骨髓细胞用细胞因子诱导培养CTMCs，荧光染料标记的模式抗原鸡卵清蛋白OVA与IgG形成免疫复合物后，与CTMCs共培养，通过流式细胞术观察CTMCs通过抗原抗体复合物摄取抗原的能力，并用CD69和Ki67指标进一步检测其刺激抗原特异性CD4＋T淋巴细胞激活和增殖的能力。结果：从小鼠骨髓细胞成功诱导CTMCs。 CTMCs能通过其表面的Fcγ受体（ FcγRs）结合环境中的抗原抗体复合物，通过IgG有效摄取抗原，其水平高于摄取未与抗体结合的抗原。结合抗原后能以抗原依赖的方式激活CD4＋T淋巴细胞并促进其增殖。结论：结缔组织肥大细胞通过其FcγRs和IgG抗体增加摄取抗原的能力，进而直接或间接将抗原递呈给CD4＋T淋巴细胞，促进其增殖和活化，在获得性免疫中发挥重要作用。

鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白可增强DnaJ蛋白的免疫反应

目的：明确鞭毛蛋白的黏膜佐剂作用，并研究其与DnaJ蛋白联合免疫对肺炎链球菌感染的保护作用。方法：含有重组质粒pET-28（ a）/鞭毛蛋白基因的大肠杆菌DE3经IPTG诱导后表达鞭毛蛋白，纯化后用于后期动物实验如下：将C57BL/6小鼠随机分为四组通过鼻腔分别滴入鞭毛蛋白（10μg）与DnaJ蛋白（10μg）混合剂（实验组）、DnaJ蛋白（10μg）（对照组1）、DnaJ蛋白（10μg）与GST蛋白（10μg）混合剂（对照组2），每组均30μl。通过检测抗体的效价、亚型以及细胞因子水平来评估鞭毛蛋白能否提高肺炎链球菌DnaJ蛋白诱导的免疫效应；然后用肺炎链球菌D39（5×107 CFU）进行鼻腔攻毒，观察小鼠的生存率，以评估其保护效应。结果：实验组较对照组产生更高效价的血清IgG（其中主要产生IgG1）和更高水平的细胞因子IFN-γ、IL-17A和IL-4；另一方面实验组对致死性D39感染的保护率达60％，DnaJ蛋白免疫组的保护率为50％。结论：鞭毛蛋白与DnaJ蛋白联合应用可以增强宿主对DnaJ蛋白的免疫反应，并且对致死剂量的肺炎链球菌感染有保护作用，提示鞭毛蛋白可以作为肺炎链球菌DnaJ蛋白疫苗的佐剂应用。

单宁酸对糖尿病大鼠肾组织和肾小球系膜细胞培养上清中8-OHdG及3-NT含量的影响

目的：观察单宁酸（ TA）对糖尿病（ DM）模型大鼠肾脏形态和功能的影响，并从氧化应激、亚硝基化应激角度探讨单宁酸改善作用的机制。方法：6周龄健康雄性Wistar大鼠68只，随机选取8只作为正常对照组，其余60只给予高糖高脂饲料喂养4周后以链脲佐菌素（ STZ）按52 mg/kg体重单次腹腔注射制造糖尿病大鼠模型，造模成功的大鼠进一步随机分为模型组、氨基胍（ Aminoguanidine ，AG）组、单宁酸低剂量组、单宁酸高剂量组。氨基胍组及单宁酸低高剂量组分别腹腔注射AG[40 mg/（kg· d）]及单宁酸[20及30 mg/（kg· d）]，正常对照组和模型组给予生理盐水[30 mg/（kg· d）]，10周后处死大鼠取材。 HE染色观察DM大鼠肾脏形态学变化，进行肾脏功能相关生化指标检测，ELISA法检测各组大鼠肾组织匀浆8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）及3-硝基酪氨酸（3-NT）含量；同时体外培养肾小球系膜细胞，分别用高浓度葡萄糖（30 mmol/L）及AGEs （250 mg/L）处理，同时用不同浓度单宁酸（10、20、40及80μmol/L）进行干预，设立相应对照组，培养48 h后留取培养上清， ELISA法检测细胞各条件培养基中8-OHdG及3-NT的含量。结果：单宁酸可有效改善DM大鼠肾脏病理改变及改善肾功能。DM模型大鼠肾组织匀浆中以及高糖及AGEs作用下GMC培养上清中8-OHdG及3-NT的含量均显著增多。单宁酸可减少DM大鼠肾组织及高糖、AGEs作用下GMC培养上清中8-OHdG及3-NT的含量。结论：单宁酸可能通过降低肾脏氧化应激、亚硝基化应激机制从而改善糖尿病大鼠肾脏结构和功能的损害。

MicroRNA-150通过降低CD122的表达调控NK及NKT细胞的分化

目的：探讨microRNA-150缺失对调节性T细胞（ Treg）、γδT细胞、NK及NKT细胞产生、发育和自稳的影响。方法：采用microRNA-150基因敲除小鼠；Real-time PCR检测microRNA-150的表达；流式细胞术检测小鼠胸腺和脾脏Treg、γδT细胞、NK及NKT细胞数量变化；采用Annexin V染色法检测细胞凋亡；5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）掺入法检测细胞增殖。结果：microRNA-150缺失对小鼠Treg 和γδT细胞的产生和发育不发挥明显作用，但导致NK和胸腺NKT细胞数量显著降低，而且，microRNA-150缺失导致小鼠NK及NKT细胞中CD122的表达显著降低，细胞发育受阻，凋亡增加，同时NK细胞的增殖能力也显著降低。结论：microRNA-150调控小鼠NK和NKT细胞的发育和自稳，CD122可能在以上调控过程中发挥重要作用。

PIMT对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响

目的：探讨蛋白异天冬氨酰甲基转移酶（Protein isoaspartyl-methyltransferase，PIMT）过表达对类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synoviocytes，FLS）凋亡的影响。方法：构建PIMT表达载体，转染RA-FLS细胞，检测PIMT在RA-FLS细胞表达水平，观察转染后RA-FLS细胞的凋亡情况。结果：转染后的RA-FLS细胞PIMT mRNA和蛋白质表达水平上升，与正常对照和转染空载体的RA-FLS细胞阴性对照相比较，转然后RA-FLS细胞的凋亡增加。结论：PIMT在RA-FLS细胞中表达下降是RA-FLS细胞凋亡减少的一个重要原因，PIMT在RA-FLS细胞增殖/凋亡失调中起作用。

《中国免疫学杂志》征稿、征订启事

珍宝丸预处理对新生大鼠缺氧性脑损伤Fas和Fas L影响的实验研究

目的：探讨珍宝丸预处理对新生大鼠缺氧性脑损伤Fas和Fas L蛋白表达的影响。方法：取新生7 d Wistar大鼠200只，雌雄不限，随机分成5组（n＝40）：正常对照组、模型缺氧1 h组（Ⅰm-12 h、Ⅰm-24 h、Ⅰm-48 h、Ⅰm-72 h）、模型缺氧4 h组（Ⅳm-12 h、Ⅳm-24 h、Ⅳm-48 h、Ⅳm-72 h ）、珍宝丸缺氧1 h治疗组（ⅠT-14 h、ⅠT-24 h、ⅠT-48 h、ⅠT-72 h ）、珍宝丸缺氧4 h治疗组（ⅣT-14 h、ⅣT-24 h、ⅣT-48 h、ⅣT-72 h）。将新生Wistar大鼠置于8％O2＋92％N2（V/V）的缺氧箱内建立新生鼠缺氧模型。在造模前每日一次连续7 d灌胃给予生理盐水和珍宝丸，缺氧期间也同样剂量给药，分别于缺氧后12、24、48、72 h处死动物取血及脑组织待测。采用ELISA法检测大鼠血清及脑组织悬液中Fas和Fas L的蛋白含量；采用免疫组织化学方法检测各组大鼠脑组织中Fas和Fas L蛋白的阳性表达。结果：与正常对照组比较，其他四组Fas和Fas L蛋白含量、蛋白的阳性表达均在缺氧后12 h时间点明显增高，且在24 h时间点达高峰，有统计学意义（ P＜0.01），模型组在各时间点上明显高于治疗组；模型组在48、72 h时间点Fas和Fas L表达低于12 h时间点，但仍明显高于正常对照组（ P＜0.01）；珍宝丸治疗组在48、72 h时间点Fas和Fas L表达低于12 h时间点，但仍高于正常对照组（ P＜0.05）。结论：珍宝丸可通过下调缺氧性脑损伤大鼠Fas和Fas L的蛋白含量、蛋白的阳性表达强度，从而对缺氧性脑损伤具有一定的保护作用。

黄芪多糖对布鲁菌S2株感染小鼠免疫功能的调节作用

目的：研究黄芪多糖（ APS）对猪布鲁菌S2株感染小鼠免疫功能的调节作用。方法：120只BALB/c小鼠随机分为4组，实验组小鼠分别腹腔注射0.4、1.2、3 mg/ml的黄芪多糖1 ml，1次/d，对照组注射同体积的生理盐水，连续3 d。第4天腹腔注射1×107 L-1的猪布鲁菌S2株1 ml进行感染，分别于感染后1、6、12、24、48、72 h眼球放血后处死5只小鼠，取腹腔巨噬细胞（ Macrophage ，MΦ）涂片、瑞-姬氏染色，计算感染1 h后吞噬率并计算吞噬指数；ELISA法检测S2株感染后不同时间点血清中TNF-α、IL-12和IFN-γ；涂布法检测MΦ内及脾脏中的载菌量。结果：在感染后1 h，APS各剂量组腹腔MΦ吞噬率和吞噬指数均高于对照组（ P＜0.05）；在感染后1 h APS各剂量组小鼠腹腔MΦ的载菌量均高于对照组，而在感染6 h后，APS各浓度组MΦ的载菌量则明显低于对照组（ P＜0.05）；感染后6 h APS各浓度组小鼠脾内的载菌量均高于对照组，而在感染后12 h APS各浓度组脾脏载菌量又明显低于对照组；APS各浓度组血清中TNF-α、IL-12和IFN-γ的含量与对照组相比，都有显著提高（ P＜0.05）。结论：APS在体内能够促进MΦ活化，增强其吞噬和杀伤布鲁菌S2株的活性；APS可促进小鼠体内TNF-α、IL-12和IFN-γ的分泌，增强小鼠抗布鲁菌细胞免疫应答的功能。

沉默Gli1基因对人非小细胞肺癌A549／DDP顺铂耐药性的影响

目的：以Gli1 siRNA转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP，研究其对靶细胞顺铂耐药性的影响。方法：以Gli1 siRNA转染A549/DDP细胞，分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果，同时检测蛋白Bcl-2、caspase-3、cyclinD1的变化；Hoechst 33258染色观察各组细胞自发性凋亡情况；流式细胞术检测细胞周期；MTT法测定顺铂对各组细胞的半数抑制浓度（ IC50）；Annexin V-FITC法检测顺铂诱导的细胞凋亡率。结果：转染Gli1 siRNA能有效抑制Gli1在mRNA和蛋白水平上的表达（ P＝0.001）；Bcl-2和cyclinD1蛋白表达水平明显下降（P＝0.003），caspase-3表达量显著升高（P＝0.001）；实验组细胞的自发性凋亡率高于对照组；细胞周期显示：Gli1 siRNA能使更多细胞停滞在G1期；IC50值由干扰前的（12.63±1.11）μg/ml/（13.81±1.14）μg/ml下降为干扰后的（2.65±0.85）μg/ml（P＝0.000）；顺铂诱导的细胞凋亡率明显提高（35.19％±3.92％ vs 6.43％±0.11％/5.01％±0.77％，P＝0.000）。结论：利用RNA干扰技术能有效抑制Gli1基因的表达，提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。这将为逆转肺癌细胞的耐药性提供新的研究思路和作用靶点。

RNA干扰技术沉默MMP-9基因对THP-1细胞影响的实验研究

目的：研究RNA干扰（ RNA interference ，RNAi） MMP-9基因对THP-1细胞增殖的抑制作用。探讨RNA干扰MMP-9基因在白血病治疗中的应用。方法：设计合成针对MMP-9基因的小干扰RNA（ small interfering RNA，siRNA），转染THP-1细胞，采用RT-PCR法测定MMP-9 mRNA的表达，Western blot测定MMP-9蛋白的表达，MTT和台盼蓝染色观察RNAi后对THP-1细胞生长的影响，显微镜下观察细胞形态改变。结果：siRNA转染组THP-1细胞MMP-9 mRNA及蛋白表达受到抑制，显著低于空白对照组和阴性对照组。 MTT及台盼蓝染色结果显示，siRNA组转染后48 h、72 h，THP-1细胞的增殖能力明显下降，细胞生长明显受到抑制，细胞活率明显低于对照组（ P＜0.05）。倒置显微镜下发现，对照组细胞呈半贴壁生长，细胞轮廓清楚，形态均一，生长旺盛。而siRNA组细胞生长呈受抑制状态，Wright染色后观察，siRNA组细胞形态有明显改变，大部分细胞出现凋亡的形态学变化。结论：靶向MMP-9的siRNA 不仅能特异性降低 MMP-9 mRNA 及蛋白的表达，且能有效抑制THP-1细胞的增殖，促进THP-1细胞凋亡。

雷帕霉素对RAW264.7巨噬细胞10种与细胞自噬相关的miRNAs表达的影响

目的：为了探讨雷帕霉素对RAW264.7细胞miR-30b、miR-200a和miR-17-5p等10种与细胞自噬相关的miRNAs表达水平的影响，为进一步研究miRNAs调控细胞自噬的机制提供理论依据。方法：雷帕霉素刺激RAW264.7巨噬细胞后，分别在2、4、6、8 h提取细胞small RNA，利用miRNA特异性的茎环引物反转录成cDNA，采用Real-Time PCR检测miR-30b、miR-30c、miR-106a、miR-214、miR-183、miR-200a、miR-376c、miR-17-5p、miR-142-3p、miR-377分子的表达情况。结果：雷帕霉素作用RAW264.7细胞后，miR-17-5p、miR-106在2、4、6 h表达上调（大于2.1倍P＜0.05），miR-214在2、8小时表达上调（＞2.4倍，P＜0.05），miR-30b、miR-30c、miR-183、miR-200a、miR-376c、miR-142-3p在2、6、8 h表达上调（＞2.4倍，P＜0.05），而miR-183、miR-200a在4 h表达下调（＞2.1倍，P＜0.05），miR-30b在8小时则是显著性表达下调（大于50倍，P＜0.05），miR-377在4 h则是表达上调（＞2.5倍，P＜0.05），但在2、8 h则是显著表达下调（＞50倍，P＜0.05）。结论：雷帕霉素刺激RAW264.7巨噬细胞后miR-200a、miR-30b、miR-377、miR-30c、miR-376c、miR-17-5p有显著性变化，说明这些miRNAs可能通过调控某些自噬相关基因在细胞自噬过程中发挥着重要作用。

脐带间充质干细胞移植对类风湿性关节炎患者相关炎性因子影响的探讨

目的：探讨脐带间充质干细胞对类风湿性关节炎患者相关炎性因子的影响。方法：选自2011年4月至2012年12月在我科住院应用脐带间充质干细胞（ UC-MSCs）治疗的94例RA患者，细胞治疗经院伦理委员会批准，患者知情同意并签字。94例患者均直接将细胞数为4×107的UC-MSCs40ml静脉输注，其中57例接受了2次UC-MSCs治疗，采用多功能流式点阵仪Luminex 200分析检测血清中TNFα，IFN-γ，IL-1β，IL-4，IL-6，IL-8，IL-10等13种因子含量并检测CPR、ESR，评估DAS28、HAQ、ARA。随访治疗后1周、3个月、6个月（2次细胞治疗的60例患者）。结果：①DAS28、HAQ评分标准，3个月、6个月较治疗前逐渐下降（ P＜0.01），2次治疗较1次治疗继续下降（ P＜0.01）；ESR、CRP在治疗后1周显著下降（ P＜0.01），3个月、6个月较治疗前也有下降（ P＜0.05）。②IL-6、TNF-α治疗后1 w、3个月、6个月进行检测，均呈下降水平（ P＜0.05）。结论：经过脐带间充质干细胞输注治疗后，RA患者部分与发病相关的炎症因子下调。94例患者其他炎性因子（ IL-17、IL-4、IL-10等）也有一些变化，仍需进一步观察探讨。因此在按风湿病指南用药的同时，协同使用UC-MSCs可使RA患者改善局部及全身的炎性反应、阻止病情进展发挥着重要作用。

《医学免疫学》精品资源共享课在我校的建设与思考

精品资源共享课是国家精品开放课程建设项目的组成部分。国家教育部将在“十二五”期间支持建设5000门国家级精品资源共享课，其中，2012年和2013年重点开展原国家精品课程转型升级为国家级精品资源共享课的建设。新乡医学院的医学免疫学课程在2004年即建设成为省级精品课程，2012年顺利转型升级为省级精品资源共享课。本文总结我校在医学免疫学转型升级建设中的经验及近两年在教学实践中的应用。