第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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ALPPS一期术后刺激残肝再生及其相关因素的研究
目的 通过建立联合肝脏分隔和门静脉结扎二步肝切除术模型(associated liver partition and portal vein ligation for staged hepectomy,ALPPS)来探讨骨髓来源肝血窦内皮祖细胞(bone marrow liver sinusoidal endothelial cell progenitor cells,BM SPCs)在ALPPS一期术后肝再生中的作用.方法 选取180～ 200 g健康SD雄性成年大鼠72只,按照随机数字表法分为ALPPS组、门静脉结扎组(portalvein ligation,PVL)和假手术组,分别在术后1、2、4、7d检测各组大鼠保留侧肝脏体质量比,血清HGF表达水平,肝脏组织BM SPCs表面标记物CD133、CD45、CD31,以及肝功能和肝组织病理学,并对结果进行统计分析.结果 ①相比于PVL组,ALPPS组在术后Ki-67阳性细胞更多,保留侧肝脏体质量比更高(P＜0.05);②ALPPS组血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和总胆汁酸在术后第1天显著升高(P＜0.05),第4天与PVL组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);③ALPPS组血清中的HGF在术后第1天达到峰值,明显高于PVL组,从第2天起开始下降,第4天开始有所回升(P＜0.05);④ALPPS组结扎侧的BM SPCs表面标志物在术后1、2、4、7d呈阳性,而ALPPS组的保留侧及其PVL组、Sham组均呈阴性.结论 BM SPCs参与了ALPPS术后肝脏的快速再生.
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NSE启动子在骨髓间充质干细胞成神经分化中启动FTH1基因特异性表达及体外磁共振成像
目的 探讨神经元特异性烯醇化酶(neuron-specifc enolase,NSE)启动子控制的铁蛋白重链(ferritin heavy chain 1,FTH1)报告基因在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)成神经分化中的特异性表达及MRI显像的可行性.方法 以慢病毒为载体将含NSE启动子的FTH1基因转入MSCs中,对其成神经诱导分化,Western blot检测分化前后细胞内FTH1的表达,在0.5 mmol/L枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)的培养条件下,细胞内FTH1基因表达所引起的聚铁效应通过普鲁士蓝染色及透射电镜检测;磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)观察细胞T2WI信号变化.结果 含NSE启动子的FTH1基因的MSCs(MSCs-NSE-FTH1)成功分化为神经元样细胞(Neurons-NSE-FTH1).Western blot检测结果显示FTH1在Neurons-NSE-FTH1细胞内明显表达,而在MSCs-NSE-FTH1细胞内表达极低.普鲁士蓝染色和透射电镜观察证实Neurons-NSE-FTH1细胞内较多铁颗粒聚集.MRI检查发现Neurons-NSE-FTH1细胞T2WI信号明显降低.结论 NSE启动子在MSCs成神经分化中能特异性启动FTH1基因表达,并引起MRI信号改变.
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microRNA-145通过靶向抑制CREB调节内皮细胞增殖和血管新生
目的 构建微小RNA 145(microRNA-145,miR-145)过表达及干扰腺病毒载体,并探究miR-145对内皮细胞增殖和血管新生的影响及机制.方法 利用T4连接酶分别将miR-145过表达和干扰目的序列插入到pHBAd-EF1-MCS-GFP和pHBAd-U6-CMV-GFP载体,构建出重组miR-145过表达和干扰腺病毒质粒.将重组miR-145过表达和干扰腺病毒质粒分别与骨架质粒pHBAd-BHG共转染人胚肾HEK293细胞进行重组腺病毒的包装与扩增,TCID50法检测病毒感染滴度.miRNA qRT-PCR检测感染腺病毒的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中miR-145的表达水平,MTT及Western blot检测PCNA蛋白表达量以检测细胞增殖情况.小管形成实验检测血管生成能力的变化.采用miRanda、miRwalk等生物信息学方法预测miR-145的靶基因及与环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein,CREB) 3'UTR的结合位点.Western blot检测CREB及其调控的VEGF的表达情况,双荧光素酶实验验证miR-145与目的基因CREB 3'UTR相互作用.结果 基因测序提示miR-145过表达及干扰质粒序列与目标序列一致,qRT-PCR结果亦提示病毒构建成功.细胞增殖和小管形成实验结果显示,与转染空载体组相比,过表达miR-145使570 nm处光密度值明显降低(P＜0.05),亦显著抑制了HUVECs PCNA蛋白表达和小管样结构的形成(P＜0.01),而干扰miR-145表达则使光密度值增高(P＜0.01),亦促进HUVECs PCNA蛋白表达和小管样结构的形成(P＜0.05).同时,过表达miR-145可显著抑制CREB和VEGF蛋白表达(P＜0.05),而干扰miR-145表达则明显促进CREB和VEGF蛋白上调(P＜0.05).双荧光素酶实验亦证实了miR-145与CREB 3'UTR的直接结合作用.结论 miR-145调节内皮细胞增殖和血管新生,其机制与miR-145直接靶向抑制CREB/VEGF信号有关.
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盐酸千金藤碱抑制肝癌肾脏、睾丸转移及其分子机制
目的 通过裸鼠肝原位移植荧光人肝癌细胞,观察肝癌细胞肾脏、睾丸转移情况,并探讨盐酸千金藤碱抑制肝癌细胞转移及其分子机制.方法 采用慢病毒转染构建稳定表达荧光素酶基因的人肝癌细胞SMCC-7721-Luc.BALB/c裸鼠皮下接种SMCC-7721-Luc细胞,待肿瘤长至100 mm3左右,取皮下瘤植入裸鼠肝脏包膜,建立裸鼠原位肝癌模型.裸鼠腹腔注射盐酸千金藤碱,用小动物活体成像系统观察肝原位肿瘤肾脏、睾丸转移情况.给药21 d后,解剖取肿瘤组织,Western blot检测相关蛋白表达,同时取肝脏、肾脏、睾丸等组织,用10％中性甲醛固定,进行病理分析.结果 构建的SMCC-7721-Luc细胞能稳定表达Luc基因,裸鼠肝原位接种该细胞后产生较强、稳定的荧光.活体成像系统显示盐酸千金藤碱能抑制裸鼠原位肝癌向肾脏、睾丸转移,与其降低MMP-7和N-cadherin蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达有关.结论 盐酸千金藤碱通过调控MMP-7、N-cadherin和E-cadherin蛋白抑制原位肝癌向肾脏、睾丸转移.
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PPARγ激活在蛇葡萄素抑制乳腺癌细胞增殖和诱导凋亡中的作用
目的 探讨过氧化物酶体增殖激活物受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)的激活在蛇葡萄素(ampelopsin,AMP)抑制乳腺癌细胞增殖和诱导细胞增殖凋亡中的作用.方法 以不同浓度AMP(20、40、60、80 μmol/L)分别处理人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞24 h后,荧光素酶报告基因法检测AMP对PPARγ的激活作用,CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性.结果 与PPARγ激动剂罗格列酮一样,AMP剂量依赖性地增强报告基因荧光素酶活性,同时显著抑制乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡(P＜0.05);Western blot检测结果显示,AMP在显著上调乳腺癌细胞凋亡相关蛋白Bax、PTEN、活化Caspase-3表达的同时下调Bcl4蛋白及Bcl-2/Bax比值;激酶活性检测结果显示,AMP可显著增强Caspase-3激酶活性,以上作用均可被PPARγ特异性拮抗剂GW9662显著削弱.结论 AMP可能是PPARγ的天然激动剂,其通过激活PPARγ信号途径抑制乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.
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胞外DNA在急性呼吸窘迫综合征小鼠炎症损伤中的作用
目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)小鼠胞外DNA的生成情况及其对肺部炎症损伤的作用.方法 以LPS(6 mg/kg)经鼻气管滴注法建立ARDS模型.40只雄性C57 BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、DNase Ⅰ组、LPS组和LPS+ DNase I组,每组10只.造模后24 h取肺组织行HE染色观察肺组织病理改变;取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)检测细胞数量,采用超敏荧光核酸染料检测其中双链DNA浓度;采用ELISA检测BALF中白介素石(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)浓度.结果 LPS组小鼠肺组织HE染色可见大量中性粒细胞浸润、肺泡结构破坏、肺泡出血及间质水肿,提示LPS诱导ARDS建模成功.LPS组BALF中细胞计数、MPO、IL-6、TNF-α和双链DNA浓度均分别显著高于对照组(P＜0.05),LPS+DNase Ⅰ组肺损伤评分和炎症指标均较LPS组显著降低(P＜0.05).结论 LPS诱导ARDS小鼠BALF中胞外DNA浓度升高,而DNase Ⅰ能够降低ARDS小鼠BALF中DNA浓度,减轻肺部炎症损伤.
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SHP-1在Ang-(1-7)拮抗AngⅡ致心房肌缝隙连接蛋白43重构中的作用
目的 探讨血管紧张素1-7[angiotensin 1-7,Ang-(1-7)]是否通过SHP-1来抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的c-Src激活,从而改善缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)的表达以及功能.方法 以小鼠心房肌细胞系(HL-1细胞系)作为研究对象,分为Control组、AngⅡ组、AngⅡ+SU6656(c-Src抑制剂)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)+SSG(SHP-1抑制剂)组,Western blot分别检测p-c-Src、Cx43、SHP-1的表达,细胞免疫荧光、划痕标记染料示踪技术观察Cx43空间分布以及缝隙连接功能.结果 与Control组比较,高浓度AngⅡ(10-mol/L)干预后p-c-Src表达增加(P＜0.01),Cx43表达降低(P＜0.05),Cx43传导距离缩短;SU6656和Ang-(1-7)预处理可抑制AngⅡ诱导的c-Src激活,Cx43表达增加(P＜0.05),Cx43传导距离增加;同时Ang-(1-7)预处理明显地促进SHP-1的表达增加(P＜0.05).与AngⅡ+Ang-(1-7)组比较,AngⅡ+Ang-(1-7)+SSG组SHP-1表达降低(P＜0.05),p-c-Src表达增加(P＜0.01),细胞Cx43表达降低(P＜0.05),Cx43传导距离缩短.结论 Ang-(1-7)通过增加SHP-1表达从而抑制c-Src活性,进而发挥对AngⅡ的拮抗作用,使Cx43表达上升并改善缝隙连接功能.
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IKBKE在烟气凝集物诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程中的作用
目的 探讨核因子κB抑制蛋白E抗体(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon,IKBKE)在卷烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用及其分子机制.方法 CSC慢性染毒BEP2D细胞至P70代(0.001支烟/mL),裸鼠皮下成瘤实验观察染毒细胞是否发生恶性转化;采用Western blot检测各代细胞以及CSC急性染毒BEP2D细胞(0.006支烟/mL)4、8、12、24 h和48 h后IKEBE的表达;免疫组化检测烟熏1、3、9个月A/J小鼠外周小气道和瘤体组织IKBKE的表达;慢病毒IKBKE-siRNA感染P70细胞,观察其对细胞增殖、细胞克隆形成和凋亡的影响;观察敲减IKBKE对STAT3信号通路分子表达的影响及STAT3信号通路激活剂IL-6对细胞恶性转化的影响.结果 与P0、P50细胞相比,P70细胞具有恶性转化表型;IKBKE显著高表达于P70细胞(P＜0.05),亦是CSC诱导的早期分子事件;在烟气暴露A/J小鼠肺肿瘤组织中IKBKE表达显著增高(P＜0.01);siRNA沉默IKBKE可显著抑制细胞增殖和细胞克隆形成,诱导细胞凋亡;该作用与抑制STAT3磷酸化有关.结论 IKBKE可能通过调控STAT3通路抑制细胞凋亡,促进其增殖,参与吸烟诱导肺癌发生.
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心肌特异性Hdac3基因缺失引起小鼠心室重构
目的 观察在他莫昔芬诱导下,心肌特异性Hdac3基因缺失对小鼠心脏病理结构及其心脏功能的影响.方法 利用Cre/Loxp基因重组系统,将Hdac3loxp/loxp小鼠与Myh6-creERT小鼠进行杂交,获得带有心肌特异性启动子的Myh6-creERT/Hdac3loxp/loxp小鼠,并按随机数字表法将28只8周龄雄性Myh6-creERT/Hdac3loxp/loxp小鼠分为对照组、模型组.模型组小鼠腹腔注射0.2 mL他莫昔芬(40 mg/mL),每天1次,连续5d,从而诱导性敲除心肌特异性Hdac3基因;对照组小鼠注射0.2 mL的玉米油.在模型建立后第1、4周,采用经胸二维超声心动图检测两组小鼠舒张末期室间隔厚度(diastolic interventricular septum,IVSd)、舒张末期左室后壁厚度(diastolic left ventricular posterior wall,LVPWd)、射血分数(ejection fraction,EF)、左室短轴缩短率(fractional shortening,FS).随后获取并观察小鼠心脏组织,采用HE染色、Masson三色染色、天狼星红染色、WGA免疫荧光染色检测小鼠心脏病理改变.采用TUNEL检测心肌细胞凋亡水平,Western blot检测DNA损伤相关指标.结果 Hdac3基因缺失后,与对照组相比,模型组小鼠IVSd与LVPWd明显增高(P＜0.05),EF与FS明显降低(P＜0.05).病理学观察结果显示,与对照组相比,模型组小鼠于Hdac3基因敲除后第1周,心肌细胞排列紊乱,横断面显示心肌细胞肥大,间质纤维化增多,伴有少量的炎症细胞浸润;第4周可见弥漫的心肌纤维化与肥大不规则的心肌细胞.TUNEL免疫荧光染色显示模型组凋亡细胞较对照组显著增多(P＜0.05);Western blot检测结果显示,模型组γH2AX蛋白表达量显著高于对照组(P＜0.05).结论 小鼠心肌特异性Hdac3基因的缺失能够引起DNA损伤并诱导心肌细胞凋亡,导致心肌细胞发生病理性结构改变及心脏功能降低,终引起心室重构.
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培美曲塞联合奈达铂治疗晚期肺腺癌临床疗效及其安全性观察
目的 探讨培美曲塞联合奈达铂治疗晚期肺腺癌临床疗效及安全性.方法 选择2015年4月至2017年12月本科收治的晚期肺腺癌患者,按照随机数字法分成对照组和观察组.观察组使用培美曲塞联合奈达铂方案治疗,对照组使用培美曲塞联合顺铂方案治疗.剔除失访病例后,共有60例患者完成本实验,观察组31例,对照组29例.对比两组患者的临床疗效及随访结果、药物毒副作用、体力状况变化、PS标准评分及生活质量评分.结果 ①临床疗效及患者随访结果:对照组总有效率为37.93％;观察组总有效率为41.94％,观察组及对照组有效率比较差异无统计学意义(x2=0.073,P=0.735);两组中位无进展生存期及1年生存率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).②化疗药物毒副作用:在白细胞减少的发生率上观察组Ⅲ度以上患者显著比对照组低(P＜0.05).观察组Ⅱ度以上恶心、呕吐发生率显著比对照组低(P＜0.05).③2组治疗前后变化PS评分比较及肿瘤患者的生活质量(quality of life,QOL)评分比较差异无统计学意义(P＞0.05).④治疗前后EORTC QLQ-C30评价比较:经过化学药物治疗之后,观察组患者总体的健康状态及一般情况(如困倦乏力、恶心、呕吐等)均明显优于对照组(P＜0.05).结论 培美曲塞联合奈达铂方案与培美曲塞联合顺铂方案的临床疗效在晚期肺腺癌的治疗中无明显差异,但前者副作用小,安全性高,培美曲塞联合奈达铂化疗方案在针对晚期肺腺癌的治疗上值得推广.
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高分辨CT增强扫描联合双时相PET/CT显像对肺炎型肺癌的诊断价值
目的 探讨肺炎型肺癌的18F-FDG PET/CT表现特征,评价胸部增强CT联合双时相l8F-FDG PET/CT显像对肺炎型肺癌的诊断价值.方法 分析武警四川省总队医院放射科2013年1月至2017年6月收集的19例肺炎型肺癌患者的18F-FDG PET/CT及胸部增强CT临床资料[男性12例,女性7例,年龄30～79(58.8±13.2)岁,体质量43 ～82(57.3±11.4)kg],比较采用CT增强检查、单时相PET/CT、单时相PET/CT联合增强CT、双时相PET/CT、双时相PET/CT联合增强CT对肺炎型肺癌的诊断效能.结果 依据病理结果为金标准,CT增强组正确诊断5例(26.3％);单时相PET/CT正确诊断组12例(63.2％);单时相PET/CT联合增强CT组正确诊断15例(78.9％);双时相PET/CT正确诊断组14例(73.7％);双时相PET/CT联合增强CT检查组正确诊断18例(94.7％).经x2检验,差异有统计学意义(x2=22.697,P＜0.05).采用Fisher确切概率法比较5组间的诊断正确率,结果显示仅有双时相PET/CT联合增强CT组与增强CT组差异存在统计学意义(P ＜0.005),即双时相PET/CT联合增强CT的诊断正确率高于增强CT组,其他组不能表现出差异.结论 双时相18F-FDG PET/CT联合增强CT可以提高诊断肺炎型肺癌的正确率.
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血浆血红素加氧酶1和基质金属蛋白酶9与冠心病的相关性分析
目的 探讨血浆血红素加氧酶1(heme oxygenase-1 HO-1)和血浆基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMPO)与冠心病的相关性.方法 选择2011年3月至2014年12月在北京市门头沟区医院心内科疑似冠心病的住院患者292例,其中男性167例,女性125例;年龄34 ～ 90(64±12)岁.根据冠脉造影(coronary angiography,CAG)结果分为对照组(143例)和冠心病组(149例),冠心病组根据病变支数又分为单支病变(38例)、双支病变(46例)、多支病变(65例),测量患者HO-1及MMP-9水平,计算冠心病组Gensini积分;同时收集病史、尿酸、血脂、高敏C反应蛋白、糖化血红蛋白等指标,评价HO-1、MMP-9与冠心病的相关性.结果 ①冠心病组MMP-9及Gensini积分明显高于对照组(P＜0.05),HO-1水平明显低于对照组(P＜0.05);②MMP-9及Gensini积分随着病变血管数增加而升高(P＜0.05),HO-I水平则降低(P＜0.05);③HO-1与Gensini积分呈负相关(r=-0.952,P＜0.01),MMP-9与Gensini积分呈正相关(r=0.881,P＜0.01),HO-1与MMP-9呈负相关(r=-0.818,P＜0.01).结论 血浆中HO-1和MMP-9水平与冠心病有关.
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环状RNA-IARS在胰腺癌中的表达及临床意义
目的 检测环状RNA-IARS(hsa_circ_0087493,circRNA-IARS)在胰腺癌组织中的表达水平并探讨其表达与临床病理特征及预后的关系.方法 利用环状RNA(circular RNA,circRNA)芯片比较胰腺癌Hs 766T与Hs 766T-L2细胞circRNA表达差异,并用实时定量PCR (qRT-PCR)验证,结合生物信息学分析选择circRNA-IARS;用qRT-PCR检测25对胰腺癌组织及配对癌旁组织中circRNA-IARS和linar-IARS(线性IARS)的表达水平;同时检测115例胰腺癌中circRNA-IARS表达水平,并分析其与胰腺癌临床病例特征和预后的关系.结果 circRNA芯片示Hs 66T-L2细胞中28条circRNA表达上调.circRNA-IARS在胰腺癌组织表达水平明显高于癌旁组织中(P＜0.05),linar-IARS表达无差异(P＞0.05);circRNA-IARS表达水平与淋巴结侵袭、血管侵袭、肝转移及肿瘤TNM分期有关(P＜0.05),linar-IARS表达与临床病理特征无关(P＞0.05);circRNA-IARS高表达组患者术后生存时间明显短于低表达组(P＜0.05).结论 circRNA-IARS在胰腺癌组织中高表达,与肿瘤淋巴结侵袭、血管侵犯、肝转移及TNM分期有关,并影响患者预后.
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创伤性颅脑损伤患者脑能量代谢改变的特点与研究展望
创伤性颅脑损伤(traumatic brain injury,TBI)是发达国家40岁以下人群中死亡的主要因素.TBI发生后的继发性脑损伤是影响预后的重要因素,如何尽早发现和持续监测继发性脑损伤并及时采取治疗措施是临床重大的挑战[1].脑能量代谢障碍是TBI发生后重要的病理生理改变之一,并且是导致继发性脑损伤的重要原因[2].近年来,关于TBI患者中脑能量代谢发生的改变,以及对TBI患者进行脑能量代谢监测在诊断和治疗中的作用越来越受到重视.因此,本文对TBI患者脑能量代谢的改变及监测的研究进行总结和展望.
