第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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肿瘤抗原MAGE-3预测CTL表位的合成与鉴定
目的合成并鉴定已预测出的4个MAGE-3 HLA-A2限制性CTL表位多肽,为后续研究奠定基础.方法采用固相合成法合成多肽,经RP-HPLC纯化、纯度分析,用质谱进行定性鉴定.结果4个合成肽的纯度都在95%以上,经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符.结论所得多肽为高纯度的目标肽,为后续研究提供了可靠的保证.
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噬菌体呈现颗粒疫苗诱导抗肿瘤细胞毒性T细胞反应
目的构建呈现肿瘤相关抗原P815A的噬菌体颗粒,在体诱导针对肥大细胞瘤P815的特异性细胞毒性T细胞(CTL)反应.方法构建呈现CTL表位P1A35～43的噬菌粒载体,大量制备呈现此表位的重组噬菌体颗粒,小剂量、无佐剂皮下免疫DBA/2小鼠(H-2d),采用51Cr释放法、ELISPOT观察针对肥大细胞瘤P815的CTL反应.结果重组噬菌体呈现颗粒疫苗在体诱导了针对弱抗原P815A的CTL反应.结论丝状噬菌体呈现疫苗增强肿瘤相关抗原的免疫原性,是一种颇有潜力的抗肿瘤疫苗形式.
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MART-1 HLA-A2限制性CTL表位的预测
目的预测黑色素瘤分化抗原MART-1的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位.方法采用超基序与量化基序多项式方案相结合的办法,对目的抗原MART-1的HLA-A2限制性CTL表位进行预测.结果预测出了6个九肽表位.结论两种方法预测结果的一致性较好,所预测出的6个MART-1的HLA-A2限制性CTL表位经后续实验筛选、鉴定后,可望用于新型MART-1肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究,为临床特异性治疗恶性黑色素瘤奠定基础.
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肿瘤抗原MAGE-2 HLA-A2限制性CTL表位的预测
目的预测黑色素瘤抗原MAGE-2的HLA-A2限制性CTL表位.方法采用超基序法与量化基序法的联合应用.结果发现8个HLA-A2限制性CTL表位.结论超基序法与量化基序法联合应用可以提高预测效率.
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肿瘤抗原MAGE-3 CTL预测表位的计算机分子模拟研究
目的从理论上分析预测表位与HLA-A2分子的结合情况及其为HLA-A2限制性CTL表位的可能性.方法应用计算机分子模拟的方法,建立MAGE-3 4个GTL预测表位的HLA-A2结合三维结构和各多肽与HLA-A2分子所形成复合物的三维结构.结果4个预测表位的三维结构完全符合HLA-A2限制性CTL表位的结构要求,且都能与HLA-A2分子结合.结论4个CTL预测表位为HLA-A2限制性CTL表位的可能性较大.
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人源多克隆抗血清识别的HBsAg模拟表位筛选
目的获得与乙肝病毒表面抗原(HBsAg)人源抗血清特异结合的噬菌体呈现模拟多肽,加深对乙肝病毒表面抗原(HBsAg)B细胞表位的了解.方法基于噬菌体小衣壳蛋白(gpⅢ)构建12氨基酸随机肽库.经混合多克隆人源HBsAb阳性血清的三轮筛选,阳性噬菌体经ELISA和竞争实验证实,并测定其对应呈现多肽的插入序列,分析其氨基酸序列与HBsAg的相似性.结果两个噬菌体颗粒在ELISA实验中呈阳性,其中之一被竞争实验证实,此模拟多肽序列与HBsAg135～146相似.结论采用疾病抗原的人源多克隆抗血清筛选噬菌体随机肽库,能获得抗原的模拟表位,从而为了解被人源抗血清识别的抗原表位提供了技术手段.
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一种新Pre-S(2)合成肽CTL表位糖基化方法
目的为研究HBV Pre-S(2)上糖基化(Glycosylation)结构差异(包括位置、种类、数量和糖链长度差异)与其生物学活性关系,建立一种N-或O-连接糖基化以外的合成肽α-和ε-氨基糖基化方法.方法用化学方法将单、双和聚糖共价连接在Pre-S(2)合成肽上的含α-和ε-氨基的氨基酸残基上,即具体连接在肽N端M1的α-氨基和K16的ε-氨基上.此二氨基酸残基位于或接近Pre-S(2)上公认的一个CTL表位,氨基酸残基1～15.结果Pre-S(2)合成肽聚糖(Mannan)、单糖(GalNAc)和双糖(Glc-Gal)糖基化的收益率分别为24.0%、24.5%和21.0%.经还原处理后,稳定性显著增加.HPLC图谱显示一包容峰.结论结果显示此方法具较高的糖基化效率,为研究Pre-S2糖肽免疫学活性提供了一种新手段.但存在糖基化的均一性欠佳,费时较长的缺点.
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HBV新型免疫原的设计、合成及免疫原性研究
目的探讨如何将表位构建成有效免疫原.方法以Pre-S(2)蛋白两优势性B细胞表位和HB-cAg两Th细胞表位为基础,设计、合成了2种MAP多肽,以此两MAP肽为免疫原免疫兔和小鼠,观察体液免疫反应.结果此两种MAP多肽均比Pre-S(2)蛋白诱发更高抗体滴度;Th细胞表位引入可显著增强反应强度.结论增加肽抗原结构复杂性可提高其免疫原性,其表位排列以B细胞表位在赖氨酸核心外侧为佳,MAP是一种较好的肽苗结构.
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O-糖基化HBV Pre-S(2)CTL表位分子模建及免疫学活性研究
目的研究O-糖基化(Glycosylation)修饰对HBV Pre-S(2)上CTL表位结构及其免疫学活性的影响.方法选择HBV Pre-S(2)上公认的HLA-A2限制性CTL表位44～53(SILSKTGDPV),以Ser44为糖基化位点,进行计算机分子模建,并利用糖肽合成技术,固相合成α-GalNAc糖基化CTL表位,免疫BALB/c(H-2Db)小鼠,观察其诱导CTL活性.结果α-GalNAc-糖基化可改变表位形态使之更适宜与HLA-A2类分子结合,糖基部分基团可从HLA-A2结合沟中向外伸出.与对照组比Ser44α-D-GalNAc O-糖基化44～53肽,诱导出较强的针对经抗原预刺激P815细胞的CTL应答,特别是50 μg和500 μg组,而且有明显的剂量-效应关系.结论Ser44α-D-GalNAc-糖基化修饰能改变Pre-S(2)上CTL表位44～53的结构,并促进特异性CTL应答,表明表位糖基化修饰可以调节CTL应答.
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乙肝治疗性多肽免疫刺激复合物的制备及鉴定
目的为有效提高小分子多肽在体诱导CTL应答的能力,制备了乙肝治疗性多肽免疫刺激复合物(ISCOMs),并对其形成进行了鉴定.方法乙肝治疗性多肽ISCOMs采用透析法制备获得,并经小分子多肽的SDS-PAGE电泳法确定了复合物中小分子多肽的存在,采用Bradfords法测定了复合物中多肽的结合量.结果在电镜下呈典型的蜂巢状亚微型颗粒结构,所制备的ISCOMs中多肽的结合量约为0.30 mg/ml.结论ISCOMs的成功制备,为进一步研究小分子多肽免疫刺激复合物的免疫学特性奠定了基础.
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含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究
目的以肿瘤抗原P815AB抗原肽为模式抗原,研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应.方法用[3H]-TdR掺入法研究CpG ODN体外刺激小鼠脾细胞增殖效应,用ELISPOT和[3H]-TdR释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性CTL应答的效应.结果ODN1826在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖.经4次免疫,在"肽+ODN1826+IFA"组中,4/6的小鼠体内出现了特异性CTL应答;在"肽+ODN1826+PBS"组,有3只小鼠在完成4次免疫前先后死亡,余3只中有1只体内也可检测到相应CTL反应;而对照"肽+IFA"组,6只小鼠体内均未诱发出特异性CTL应答.结论CpG ODN对P815AB表位肽有较为理想的免疫佐剂效应,但疫苗构成形式对其免疫效果有着决定性的作用,"肽+ODN1826+IFA"是本研究中有效的疫苗形式,同时需注意到CpG ODN具有一定的毒副作用.
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噬菌体呈现疫苗诱导乙型肝炎病毒特异性细胞毒性T细胞反应
目的研究噬菌体呈现颗粒作为亚单位疫苗是否能在体诱导乙型肝炎特异性细胞毒性T细胞反应.方法构建呈现MHC I类分子(H-2d)限制性表位HBs28～39的噬菌体颗粒,小剂量、无佐剂接种BALB/c(H-2d)小鼠.结果重组噬菌体呈现颗粒在体诱导H-2d限制的HBs28～39特异性细胞毒性T细胞反应.结论丝状噬菌体呈现疫苗有效诱导细胞毒性T细胞反应,能用于发展抗病毒疫苗.
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Delta Pak C18填料用于P44纯化制备工艺可行性研究
目的研究Delta Pak C18反相填料用于P44纯化制备工艺可行性,为固相合成疏水性肽苗的制备工艺作探索性研究.方法选用美国Waters公司Delta Pak C18反相色谱填料和高压液相色谱系统Delta600,采用乙腈、三氟乙酸体系为流动相,对P44从分析柱、半制备柱、径向加压制备柱3个水平进行了基线分离载量及放大的研究.结果目标肽峰面积积分分别为71.14%、70.12%、69.68%,收率放大前后趋一致,载量分别为100 μg、＜5 mg、＜10 mg,制备目标肽收峰经Symmetry C18柱分析及PDA纯度鉴定为单一组分.结论该填料可作为P44的小量精制,用作放大制备其载量尚不能满足需要.
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O-乙酰氨基半乳糖基化氨基酸的化学合成
目的为获得精确定位糖基化糖肽,合成O-乙酰氨基半乳糖基化氨基酸,作为糖肽固相合成的原料.方法利用环状糖结构的半缩醛羟基可与含侧链羟基氨基酸的羟基形成糖苷键,用化学方法,使过乙酰化GalNAc与氨基被9-Fluorenylmethoxycarbonyl(N-α-Fmoc)保护的丝氨酸或苏氨酸连接.结果反应产物通过反相制备HPLC纯化后,可作为O-连接糖肽合成构建单位(Building blocks)在固相多肽合成仪上合成所需的病毒或肿瘤相关糖肽,并可进一步研究其生物学活性.结论本法相对易操作,重复性好,收益率也较高,更重要的是糖基化的均一性好,对推动糖肽研究具有重要意义.
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小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达
目的克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的P1A基因以制备肿瘤DNA疫苗.方法用RT-PCR方法制备P1A基因,以哺乳细胞高效表达质粒pCI-neo为载体,构建重组DNA疫苗.重组体用克隆位点上游和下游的T7和T3启动子序列为测序引物,用自动测序仪测序鉴定克隆的正确性.再将鉴定过的重组质粒用磷酸钙法转化293细胞,用RT-PCR法鉴定转化细胞中P1A基因的表达.结果正确构建了P1A/pCI-neo重组质粒,并且在转化此质粒的293细胞中检测出了P1A的表达.结论成功地构建了重组P1A/pCI-neo肿瘤疫苗,可以进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及疗效观察.
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LC/MS鉴定固相合成多肽P14分子异构体存在的方法
目的确认固相合成多肽P14分子是否存在异构体.方法通过HP 1100与ESI离子源PEAPI2000液质联用(LC/MS)分离P14肽,在质谱鉴定合成肽主峰为理论设计分子量前提下,应用PE SCIEX Analyst 1.0b3质谱分析软件分析子离子流色谱图.结果从总离子流色谱图中精确提取P14肽Q1正离子双电荷质量数,形成P14肽质量数子离子流色谱图,其中有散在的不同保留时间的质量数存在.结论P14肽有异构体存在,与结合理论上分析P14氨基酸组成发现(P14组成中有6个胱氨酸,其存在无疑增加了分子内二硫键形成的可能性)一致.
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77例上腔静脉综合征临床分析
上腔静脉综合征(Superior vena cava syndrome,SVCS)是临床上一种危及生命的急症.现就77例SVCS作一临床分析.
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1例糖尿病并大疱表皮坏死性药疹的护理
大疱表皮坏死性药疹是药物性皮炎中严重的一种形式.在患有糖尿病的情况下并发大疱表皮坏死性药疹,使病情加重,增加了护理工作的难度.根据患者的病情,我们制定详细的护理计划,收到了良好的效果,现将护理体会报告如下.
关键词： 糖尿病/并发症 表皮坏死性药疹/护理 -
碘伏对垂直阻生(8 8)急性冠周炎不同龈瓣覆盖的作用比较
有关下颌阻生第三磨牙急性冠周炎的各种研究已有报道[1].本研究就碘伏行冠周冲洗对急性冠周炎不同龈瓣所致急性冠周炎的疗效进行比较,现报告如下.
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小儿外伤性脑梗塞26例报告
小儿外伤性脑梗塞在临床较为少见.我院从1995～1999年收治小儿外伤性脑梗塞26例,经非手术治疗,疗效满意,现就其治疗结果,结合文献报告如下.
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腹腔镜子宫内膜癌淋巴结切除术2例
例1:患者53岁,因阴道不规则出血14个月,伴阴道分泌物增多1年.于2000年7月4日在我院行诊断性刮宫术,病理报告:子宫内膜乳头状腺癌.于7月6日收入院.孕6产3存3流3,既往无特殊病史.
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急性创伤患者的围手术期护理
我院急救部自1999年开展急救、手术、术后监护一体化以来,已成功救治数十例急性创伤患者.现就急诊手术患者的围术期护理,谈谈体会.
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CTL与肿瘤治疗性疫苗
恶性肿瘤是当前威胁人类生命健康的几大主要疾病之一,其发病率和死亡人数呈逐年上升趋势,特别是在发展中国家,其新增肿瘤病人人数占全球新增肿瘤病人的60%.据WHO统计,1990年全球肿瘤死亡人数约为510万,到1997年已上升至620万,死亡人数占全球死亡总人数的比例位居几大主要疾病之三,且呈上升趋势.肿瘤已成为世界性疾病,对其采取有效的治疗和控制已迫在眉睫.目前对恶性肿瘤的治疗多采用手术、化疗、放疗、生物治疗和中医疗法联合应用.
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CTL活性检测与监测
在肿瘤及病毒性疾病的研究、治疗中,体液免疫并不能彻底消除肿瘤细胞及细胞内感染病毒,只有细胞介导的免疫反应,特别是细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)介导的细胞免疫反应才能发挥根本的作用.
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CTL表位预测的方法学进展
CD8+αβT细胞在机体抗感染和抗肿瘤免疫中发挥着极为重要的作用.现已知,CD8+αβT细胞所识别的靶抗原需先经抗原递呈途径以"抗原肽-MHC Ⅰ类分子"复合物的形式呈现于抗原递呈细胞(Antigen presenting cells,APCs)或靶细胞表面方可被表达有相应αβTCR(T cell receptor)的CD8+T细胞所识别,相应的与MHCⅠ类分子结合的抗原肽即为CTL表位(Cytotoxic Tlymphocyte epitopes).
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蛋白糖基化与细胞毒性T淋巴细胞应答
糖基化是已知的蛋白重要的翻译后修饰.已知的蛋白糖基化有多种类型,其中常见的是发生在天冬酰胺(Asparagine,Asn)的N-糖基化(N-linked glycosylation)和发生在丝氨酸(Serine,Ser)和苏氨酸(Threonine,Thr)的O-糖基化(O-linked glycosylation).糖蛋白中糖基的结构大小不一,少者仅一个单糖,稍复杂的寡糖链可由12～15个单糖残基衍生物组成,甚至可多达20～30个单糖残基.糖链的结构类型与其在肽链上共价连接的氨基酸种类有关.
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CTL与细胞内感染
感染性疾病,特别是慢性持续性感染,是危害动物和人类健康与生命的全球性顽疾之一,它与某些癌症的发生有密切关系,也是世界各国政府和医疗界普遍关注的热点和棘手问题之一.
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特异性细胞毒性T细胞活化的研究进展
特异性细胞毒性T细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)的活化是现代细胞免疫的重要研究领域,是具有高度时空复杂性的生物学行为,是众多免疫细胞、免疫分子协同作用的结果.
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CTL与Th1/Th2极化
杀伤性T细胞又称为细胞毒性T细胞(CTL),主要参与抗病毒、肿瘤免疫以及移植排斥反应.静止的CTL前体细胞通过其TCRαβ识别靶细胞或抗原提呈细胞表面的"抗原肽-MHCⅠ复合物",被活化为抗原特异性的细胞毒效应细胞,并通过颗粒外吐和受体介导的机制(如Fas/FasL途径、TNF/TNFR途径等)杀伤靶细胞.多年的研究表明,辅助性CD4+T细胞存在着功能性极化反应,而该极化反应的平衡对诱导或抑制CTL的活化及功能有着重要的调节作用.
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DNA疫苗与CTL
强力有效的免疫策略对一些疾病如感染性疾病和肿瘤等是迫切需要的,而传统途径和分子免疫途径到目前为止并没有取得太大的成功.近关于不同T细胞亚群的作用的研究使得解决这个问题有了一个更加合理的途径.现在已知,对多种感染性疾病特别是病毒感染如人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)的感染以及肿瘤的防治需要产生强有力的细胞介导的免疫反应(Cell-mediated immunity,CMI).
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CTL的免疫识别
免疫识别是机体免疫系统产生特异性免疫的基础,通过对抗原的特异性识别,激发机体产生免疫应答,终由效应细胞和/或效应分子(Ab)清除病原体或"异己"物质.对特异性抗原的大量研究,并由此研制的疫苗在预防、控制多种传染性疾病方面起到重要作用.近年来,细胞毒性T细胞(CTL)引起人们的重视,发现人类面临的多种难以攻克的疾病,如肿瘤、AIDs、乙型肝炎等,CTL扮演着关键角色.现就CTL免疫识别方面的问题作一综述.
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CTL细胞毒作用的颗粒依赖性途径
细胞毒T淋巴细胞(CTL)是机体防御细胞内感染的主要成员之一,分为CD8+CTLs、CD4+CTLs和双阴性CD4-CD8-CTLs(DN CTLs)几个亚群.CTL细胞毒性通过两条接触依赖性途径杀伤靶细胞:Fas配基(FasL)-Fas介导的细胞凋亡作用和颗粒-胞吐途径介导的溶细胞作用.
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免疫识别、分子设计与抗原工程
从Jenner开始,疫苗的研制即采用模拟自然感染过程的策略.基于此而研制的减毒活疫苗或亚单位疫苗在脊髓灰质炎、麻疹、腮腺炎、流感、黄热病等病原体进化相对保守、自然感染可引起长时间免疫力、保护性免疫主要依赖于中和抗体的一类疾病获得成功.但是,在自然感染不能引发长时间免疫力而且引起慢性持续性感染的疾病如许多寄生虫感染、分枝杆菌感染及一些病毒性感染,模拟自然感染过程的策略不能制备出高效疫苗.
