经鼻蝶手术入路相关结构的可视化研究

目的建立经鼻蝶手术入路中相关解剖结构的计算机三维可视化模型.方法应用中国可视化人体数据集,选取从筛窦上缘到上颌窦下缘的连续断层图像,在计算机上对经鼻蝶入路重要结构的断层图像轮廓进行数据分割、对位重建和三维显示.结果重建了筛窦、蝶窦、上颌窦、鼻中隔、中鼻甲、下鼻甲、垂体、鞍背、颈内动脉、视神经、三叉神经、外展神经等结构的三维可视化模型,该模型既可以进行单个结构的显示,也可以进行多个结构的分色显示,同时也可以任意放大缩小和任意角度旋转观察.结论经鼻蝶手术入路相关结构的三维可视化模型可以为临床神经外科和耳鼻咽喉科手术提供解剖学参考.

组织工程真皮抗张强度的初步研究

目的采用高敏度小张力膜状生物材料力学性能测定仪检测组织工程真皮的抗张强度.方法分别培养含有不同数量成纤维细胞的胶原凝胶和复方壳多糖真皮替代物,15 d后检测抗张强度.结果组织工程真皮抗张强度随成纤维细胞数量增多而增强(P＜0.01),复方壳多糖人工真皮的抗张强度高于胶原凝胶真皮(P＜0.01).结论复方壳多糖真皮替代物具有良好的抗张强度,为临床应用提供稳定机械性能.

四环素致BALB/c小鼠肝脏毒性的基因表达谱研究

目的利用毒理基因芯片技术研究四环素肝脏毒性效应的分子机制.方法利用本室构建的小鼠毒理基因芯片和四环素致BALB/c小鼠肝毒性动物模型,观察不同剂量和时相点小鼠肝脏基因表达谱变化,利用Gene OntologyConsortium分析系统并结合层次聚类对差异表达基因进行初步功能分析.结果四环素作用后引发肝脏多种基因表达改变,聚类分析发现高、低剂量四环素作用的表达谱明显差异,高剂量各时相点差异基因聚类分为4类,涉及的分子机制包括能量代谢抑制,蛋白质合成和降解增加,抗氧化体系受损,信号转导基因表达改变促进凋亡发生,以及药物代谢相关酶系基因抑制等.结论毒理基因芯片技术能够为我们在分子水平上提供四环素对小鼠肝脏毒性损伤机制的众多线索,为进一步生物学效应研究奠定基础.

核转录因子κB在TNF-α诱导人气道上皮细胞hBD-2表达中的作用

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人气道上皮细胞人β防御素-2(hBD-2)的表达及核转录因子κB(NF-κB)在hBD-2表达中的作用.方法用TNF-α和或NF-κB抑制剂PDTC处理体外培养人气道原代上皮细胞,RT-PCR法检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot检测细胞质IκB-α蛋白活性变化,凝胶迁移试验(EMSA)检测不同时相NF-κB活性的变化.结果TNF-α刺激0.5 h后可见人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,并呈时间依赖性;PDTC可抑制hBD-2mRNA表达;NF-κB在TNF-α刺激1 h后明显活化,抗体超迁移率实验结果显示p65-p50异型二聚体NF-κB参与了NF-κB的活化.结论一定剂量的TNF-α可诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,NF-κB在TNF-α诱导气道上皮细胞hBD-2mRNA起重要的调控作用.

hITF毕赤酵母表达载体的构建及分泌表达

目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础.方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF.BspH I线性化后氯化锂转化进入X-33,Zeocin筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因.阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tricine SDS-PAGE分析及Western blot检测.结果经测序及PCR证实,hITFcDNA准确插入酵母表达载体pGAPZαA中,氯化锂转化后,重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中.Tricine SDS-PAGE分析证明hITF的分子量约为10×103,Western blot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性.结论成功构建出酵母表达载体pGAPZαA-hITF,获得重组hITF,为深入研究hITF奠定了基础.

全脑缺血再灌注后神经元凋亡的时相和分布特征

目的探讨大鼠全脑缺血再灌注后神经元凋亡的时相和分布特征,为神经元损伤的早期干预和继发性脑损害的防治提供实验依据.方法建立大鼠全脑缺血模型,采用TTC染色、原位细胞凋亡检测(原位末端标记法,TUNEL)及AO/EB荧光比色法观察脑缺血再灌后海马、皮层凋亡发生的数量和分布,用荧光指示剂Fura-2 AM标记,检测脑海马细胞内游离钙的浓度.结果 TUNEL显示再灌注3 h海马部位即出现散在凋亡细胞,并向皮层区域扩展,24～48 h达高峰;坏死细胞迟于凋亡出现,弥散分布于凋亡细胞周围,再灌注48 h后坏死细胞增多,72 h多.AO/EB法显示海马、额叶和顶叶凋亡细胞总数分布在再灌注后24 h和72 h达高峰,并显著高于对照组(P＜0.05).TTC染色证实全脑缺血再灌注后不出现梗死灶,而是在海马及大脑皮层有弥散性坏死.胞内[Ca2+]i各时间点与对照相比匀显著升高(P＜0.01).结论全脑缺血再灌后受累神经元经历了由凋亡到死亡的过程,对缺血敏感的海马神经元首先受损,并向顶叶和额叶皮层扩展,细胞质内[Ca2+]i增加是主要原因.利用凋亡时间窗进行早期干预可能有益于保护和挽救凋亡前期神经元,减小继发性损害的严重程度.

5-aza诱导干细胞经乙酰化特异RNAi后心肌细胞发育相关基因检测

目的通过组蛋白乙酰化作用相关shRNA质粒转染5氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导后不同时间段间充质干细胞心肌发育基因的检测,探讨乙酰化修饰在干细胞特化心肌样细胞转录调控中的作用.方法选择7条组蛋白乙酰化修饰关键因子Gcn5基因片段,用带有绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的pGenesil-1作为载体,构建相应7个shRNA质粒.5-aza诱导大鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)24 h、2、4、7 d,分别用重组shRNA质粒脂质体共转染后提取RNA,逆转录PCR检测Gcn5基因和心肌早期发育基因GATA4的表达.结果经特异性限制性内切酶酶切分析和DNA序列测定,质粒构建与设计符合;各个时间段对照组Gcn5和GATA4均有表达,而实验组却无相应表达.结论通过实验提示封阻干细胞染色质组蛋白乙酰化可以达到抑制干细胞特化心肌细胞转录过程的作用,这为进一步研究组蛋白末端乙酰化修饰与干细胞分化调节机制奠定实验室基础.

不同伤情血清可有效激活IEC-6细胞PI3K/Akt通路

目的检测不同伤情血清对肠上皮细胞PI3K/Akt通路的激活.方法将对数生长期的IEC-6细胞无血清培养基培养24h后,加入单放、单烧和复合伤24 h大鼠血清,并设正常大鼠血清组和无血清组作对照,刺激12 h后检测细胞AKT磷酸化水平.利用SELDI(surfaced enhanced laser desorption/ionization)蛋白质芯片技术对单放、单烧、复合伤24 h大鼠血清差异蛋白进行筛选和分析.结果单放、单烧和复合伤24h大鼠血清刺激后的IEC-6细胞Akt磷酸化水平较正常大鼠血清刺激的高,其中烧伤组高.单放组血清与单烧血清比较有11个差异峰,复合伤组与单烧组相比有6个差异峰.结论单放、单烧和复合伤血清均可有效激活IEC-6细胞的PI3K/Akt通路,烧伤组强,可能和烧伤组血清特殊变化有关.

基质干细胞及明胶微载体植入大鼠心脏的研究

目的探讨将来源于人类胚胎肝脏的基质干细胞(human fetal liver-delivered mesenchymal stem cells,HFMSCs)及明胶多孔微载体植入正常心肌组织促使心肌及微循环再生的可行性.方法将SD大鼠分为细胞植入组(n=9)、微载体植入组(n=9)和对照组(n=4),分别在左心室室壁内注射80～100μl含HFMSCs的perfadex溶液、含微载体的perfadex溶液或单纯perfadex溶液.用超声心动图评定移植前后大鼠心脏功能,并分别于术后7、14 d取出心肌组织作原位杂交、HE染色、免疫组化染色及混合淋巴细胞培养(MLC).结果细胞植入7 d后,心脏功能有显著的增加,原位杂交显示,有较多细胞在心肌组织中存活,但免疫组化染色未发现植入细胞向心肌细胞方向的分化;至移植后第14天,移植细胞从心肌组织中消失,在注射局部发现大量巨噬细胞浸润,而体外MLC证实,此时HFMSCs有诱导SD大鼠内淋巴细胞增殖的效应.微载体植入7、14 d后,心脏功能无明显增加,微载体仍集中在注射部位,并保持原有形状,其上有较多细胞生长贴附,免疫组化染色显示,这些细胞既不是心肌细胞,也不是毛细血管.结论 HFMSCs植入正常大鼠心脏组织中能短期存活并促进心脏功能增加,但因慢性免疫排斥反应,移植细胞在发生心肌分化之前在体内逐渐消失;明胶多孔微载体植入正常心肌组织后,不能促进心脏功能增加,也不能促使心肌及其微循环生长于其中.

难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序

目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序.方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序.结果 AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp.结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列.

ORC1与大鼠血管平滑肌细胞DNA复制的关系及意义探讨

目的探讨大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖过程中DNA复制与起始识别复合物1(origin recognition complex 1,ORC1)基因表达的关系及意义.方法采用组织块贴片法培养大鼠胸主动脉VSMCs,利用MTT法绘制生长曲线,分析不同生长状态VSMCs的DNA合成与ORC1 mRNA和蛋白表达的关系.结果静止状态的VSMCs无ORC1 mRNA及蛋白质表达,血清刺激后12～24 h VSMCs DNA的合成量显著增加,ORC1 mRNA及蛋白质表达量与VSMCs DNA的合成量相一致.结论 ORC1与大鼠VSMCs增殖过程中的DNA复制密切相关.

轮状病毒结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位的初步鉴定

目的预测并初步鉴定轮状病毒Wa株结构蛋白VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位,为轮状病毒免疫保护机制研究及疫苗的研制奠定基础.方法应用表位亲和力预测软件SYFPEITHI及蛋白酶切位点预测软件PAProc和Fragpredict相结合预测VP6 HLA-A*0201限制性CTL表位;用分子模拟对候选肽作进一步筛选;标准Fmoc方案合成候选肽,RP-HPLC纯化、分析,质谱进行鉴定;后用T2细胞株测定候选肽与HLA-A*0201分子的亲和力及稳定性.结果结合SYFPEITHI、蛋白酶切位点预测结果及分子模建结果,选择分值高同时在C-末端含有蛋白酶切位点的4条肽作为候选表位肽;标准Fmoc方案合成的各肽纯度均大于95%,质谱检测结果表明,各肽的相对分子质量与理论值基本一致;在候选的4条表位肽中,TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)与HLA-A*0201呈高亲和力结合,荧光系数(flurorescene index,FI)分别为2.66和2.64,同时肽-HLA-A*0201复合物半数解离时间(dissociation complex50,DC50)均大于8 h.结论TLLANVTAV(340-348)和VLADANETL(333-341)为潜在的HLA-A*0201限制性CTL表位.

抗人MIF单克隆抗体的制备及其活性的初步鉴定

目的构建人巨噬细胞移动抑制因子(human macrophage migrationinhibitoryfactor,hMIF)原核表达系统并制备其单克隆抗体.方法采用RT-PCR从乳腺癌细胞株MDA-MB453细胞克隆hMIF cDNA,测序后构建pET11b/hMIF重组表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达hMIF;重组hMIF经纯化和鉴定后,作为抗原常规免疫和CpG ODN加强免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体并鉴定活性.结果构建pET11b/hMIF重组表达质粒,表达出预期hMIF蛋白,表达率30%,纯化后纯度达95%.Western blotting鉴定为hMIF,NO释放实验证实具有生物学活性.两种免疫方案共获得9株分泌抗hMIF抗体的杂交瘤细胞株,其中一株经Western blotting和活性鉴定证明具有特异性和生物学活性.结论获得hMIF重组蛋白和抗hMIF单克隆抗体,为其基础性研究和在脓毒症的治疗等临床应用研究奠定基础.

小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究

目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,检测HPCs在小鼠脾脏内分化和移植细胞的功能及其在脾脏组织中的整合情况,探讨肝细胞合适的替换治疗细胞来源.方法体外培养ESC并制备拟胚体(EBs),体外诱导EBs 18 d后得到HPCs,然后用Hochest 3342荧光标记HPCs并制备成6.0×107/ml细胞悬液.移植受体小鼠用2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理,移植前受体鼠经过7 Gy 60 Coγ全身辐照和50%肝脏切除,造成小鼠体内对肝细胞的极大需求;然后将0.1 ml含6.0×106 HPCs细胞悬液经尾静脉注射移植入脾脏,细胞移植4周后,检测移植细胞在小鼠脾脏整合分化情况.结果体外培养ESC并制备出EBs,EBs经体外诱导为HPCs,并将HPCs移植到小鼠脾脏,4周后观察到移植细胞能够嵌合到受体脾脏组织,在脾脏组织中未形成畸胎瘤,并且移植细胞能表达肝细胞较特异标志物白蛋白、CK19和糖原PAS染色呈阳性反应.结论本实验建立一种将体外ESC诱导的HPCs移植并整合到脾脏的细胞移植技术,为研究肝细胞分化的分子机制和肝病的细胞替换治疗提供基础.

应用基因芯片筛选人高、低转移肺巨细胞癌细胞株差异表达基因的初步探讨

目的应用基因芯片探讨人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95D和95C的基因表达差异,筛选肺癌转移相关基因.方法提取人高转移肺巨细胞癌细胞株95D和人低转移肺巨细胞癌细胞株95C的mRNA并反转录为cDNA,分别用Cy5-dUTP和Cy3-dUTP进行标记后与基因芯片杂交,然后用Scan Array 3000扫描仪及ImaGene3.0软件处理杂交信号得到95D和95C的表达差异基因.对部分有差异表达的基因进行RT-PCR分析鉴定.结果在被检测的人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95D和95C中,共有466条基因出现表达差异,其中具有同一GenBank ID号的Double基因共108对,包括上调基因47对,下调基因61对.有表达差异的Fln29、RUVBL2、C14orf3等基因RT-PCR结果与基因芯片一致.结论圹多基因参与了肺癌的转移过程,基因芯片技术是筛选肺癌转移相关基因的有效方法.

原代培养大鼠肝窦内皮细胞凋亡的检测及意义

目的检测原代分离培养肝窦内皮细胞(sinusoidal endothelial cells,SECs)的凋亡状况.方法用胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心加选择性贴壁的方法分离SEC;用光镜形态学、Ⅷ因子和CD14免疫细胞化学染色及RECA-1单抗间接免疫荧光法及SEM鉴定SEC;采用TEM及AnnexinV联合PI双染的方法检测SEC的凋亡.结果分离培养的SEC得率为(2.06±0.35)×107/只大鼠,活力≥92%,纯度达90%;光镜下细胞形态典型,Ⅷ因子染色阴性而CD14染色阳性,RECA-1单抗间接免疫荧光染色阳性,SEM下可见SEC表面具有典型的窗孔结构;即使在培养基中加入ECGF,TEM下仍可观察到SEC出现凋亡的典型形态特征,且随培养时间延长,凋亡率明显升高,培养12 h的SEC凋亡率与新鲜分离的相比,差异已具有显著性(F=53.11,P＜0.05).结论体外培养的SEC存在明显的自发凋亡,且这种凋亡呈生长因子抵抗性.

SR-A受体参与抑制LPS刺激RAW264.7产生炎症因子

目的探讨清道夫受体A能否抑制LPS刺激RAW264.7产生炎症因子.方法 LPS诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7 SR-A受体上调后,用LPS再次刺激,观察SR-A受体的上调能否抑制RAW264.7对LPS的反应,后采用遗传互补实验观察转染SR-A受体后能否抑制LPS活化NF-κB.结果 LPS刺激SR-A受体已上调的RAW264.7产生的炎症因子明显下降,而遗传互补实验证实SR-A受体确实能抑制LPS通过TLR4活化NF-κB.结论 SR-A受体参与负调控LPS对RAW264.7的活化,防止过强的炎症反应.

经皮内镜胃造瘘术的临床应用

1资料与方法1.1临床资料男性18例,女性5例,年龄29～61岁,中位年龄48岁.其中脑外伤17例,脑溢血2例,食管气管瘘3例,瘘口直径＞0.5cm,上段食道癌1例.脑部疾病者均存在不同程度意识障碍,行PEG前均已行鼻饲或深静脉营养1～2 m.

肱骨头上皮样血管内皮细胞瘤术后肺转移1例

1 临床资料男性,73岁,于1992年11月查体摄X线片发现右肱骨近端占位病变,无不适.摄CT、MRI,考虑为"右肱骨近端良性病变".定期门诊复查,无明显变化.2004年9月下旬右肩部出现疼痛,并逐渐加重,11月上旬CT检查提示右肱骨近端占位病变较前增大.11月下旬行MRI,未见明显畸形.右肩部冈上肌、冈下肌萎缩.右肩部前方和外侧压痛明显.右肩关节活动受限,内收10°、外展20°、前屈30°、后伸°、内旋45°、外旋0°.

腹腔镜胆囊逆行切除术的临床应用与意义

腹腔镜胆囊切除术(LC)以创伤小、痛苦少、恢复快等优点很快被患者所接受,并成为目前治疗胆囊疾病主要的方法之一.但与此同时,LC术中胆管损伤的病例也时有报道.为减少或防止胆管损伤的机会,我们在常规LC的基础上,于2004年4月至2005年8月对部分病例采用腹腔镜下胆囊逆行切除的方法共62例,现重点就术中操作的有关问题及临床意义进行讨论.

啤酒酵母多糖提取工艺的研究

酵母多糖是酵母细胞壁的重要组成部分,其主要成分为大分子的甘露聚糖及糖蛋白复合物,酵母多糖占酵母细胞壁干重的40%左右[1].研究表明酵母多糖具有多种重要生物活性,如增强免疫功能、抗病毒、抑制肿瘤生长等[2,3].目前我国大部分啤酒生产厂家对废弃啤酒酵母没有很好地开发利用,且造成环境污染和资源浪费.本研究以重庆某啤酒厂废弃啤酒酵母泥为原料,对酵母多糖提取工艺进行试验研究,为废弃啤酒酵母的综合开发利用积累资料.

烧伤并发胰腺炎1例

烧伤后急性胰腺炎的发病率约0.07%,病因尚未完全明了.可能与缺血缺氧、炎症反应导致胰管水肿阻塞,胰管上皮因内压升高受损,胰酶消化胰组织[1],或与肠道菌群移位和重定植相关[2].血清淀粉酶高于500U/dl,尿淀粉酶明显升高(正常值40～180 U/dl)即提示本病,结合症状、腹部B超和(或)CT可确诊.我科收治1例特重烧伤患者,伤后4个月并发胰腺炎,现报告如下.

Studer回肠代膀胱术23例

1993年10月至2005年6月,我院采用Studer手术治疗23例膀胱癌患者,效果满意,现报告如下.

腹腔镜结直肠癌根治术后胃肠运动与血清胃肠激素的变化

目的探讨经腹腔镜和开腹结直肠癌根治术对胃肠动力和胃肠激素的影响.方法 42例行结直肠癌根治术患者非随机分为经腹腔镜和开腹两组,各21例,记录术后肠鸣音恢复和肛门排气时间,并用放射免疫分析法(radio immunoassay,RIA)测定术前12 h和术后24、48、72 h的血清胃动素、胃泌素水平.结果开腹组术后肠鸣音恢复时间和肛门排气时间较腹腔镜手术组明显延迟(P＜0.05).开腹组术后24、48 h血清胃动素、胃泌素较术前12 h及腔镜组同时相相比明显降低(P＜0.01,P＜0.05).结论腹腔镜结直肠癌根治术后患者胃肠道功能恢复较开腹手术明显快,术后胃动素和胃泌素水平变化可能是其机制之一.

部分液体通气联合伊洛前列素治疗兔油酸型急性肺损伤

目的观察部分液体通气(partial liquid ventilation,PLV)联合气道内给予血管扩张药伊洛前列素对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)兔肺气体交换、肺力学方面的影响.方法健康大白兔24只,用油酸混合兔血清复制成ALI模型后随机分为3组.各组采用不同治疗方法:常规机械通气组(conventional mechanical ventilation,CMV);部分液体通气组(PLV);联合组为PLV+雾化吸入伊洛前列素(iloprost).分别监测各组治疗前后各时相点PaO2、PaCO2及肺静态顺应性(Cstat)、肺动脉平均压(pulmonary arterial pressure,PAP)的变化.结果联合组PaO2从(104±16)mmHg升高到(236±38)mmHg(P＜0.05),肺动脉平均压从(22±5)mmHg降低到(16±3)mmHg(P＜0.05).联合组PaO2的升高及PAP的降低优于CMV组和PLV组.结论部分液体通气联合雾化吸入伊洛前列素不仅对于改善ALI肺氧合功能优于单纯部分液体通气,还可减低部分液体通气对肺血流动力学的影响,降低肺动脉高压.

牛磺酸对高原缺氧大鼠视网膜形态结构及SDH、LDH活性的影响

目的观察急性持续性高原缺氧条件下视网膜结构、功能变化,探讨牛磺酸对视网膜缺氧损伤的保护作用.方法以低压舱模拟4 500 m和5 500 m高原条件,SD大鼠经2.4%牛磺酸干预后入舱缺氧.光镜观察视网膜层状结构,检测琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化,电镜技术观察视网膜Müller细胞的超微结构.结果缺氧使内核层、内网状层和节细胞层受损.缺氧早期内网状层细胞移行高于对照组(P＜0.05),4500 m时牛磺酸促进细胞的移行,5500 m早期抑制细胞移行.缺氧后Miiller细胞肿胀,核崩解,细胞器变形,添加牛磺酸损伤减轻.缺氧导致SDH与LDH活性显著下降(P＜0.05),牛磺酸能上调其活性(P＜0.05).结论缺氧引起视网膜内层细胞出现损伤,牛磺酸能显著提高SDH、LDH的活性,减轻视网膜的缺氧损伤,其保护作用与Müller细胞的功能和结构维持相关.

黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响

目的探讨黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响及其机制.方法应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞,不同浓度黄芩甙处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其侵袭力、粘附力,细胞迁移实验测定细胞运动能力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞MMP2、TIMP2、integrin β1、E-cd表达的改变.结果黄芩甙能明显抑制肝癌细胞侵袭力、粘附力及运动能力(P＜0.05),随浓度提高作用增强.形态学观察发现,黄芩甙处理组细胞形态较圆,伪足数目较少.黄芩甙处理组MMP2阳性表达细胞减少,TIMP2阳性表达细胞增多,MMP2/TIMP2比值下降;integrin β1表达增加,E-cd的表达则减低(P＜0.05).结论黄芩甙能抑制肝癌BEL-7402细胞侵袭与转移,其机制可能与直接抑制细胞迁移运动,抑制细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2表达,促进TIMP2表达及抑制粘附分子E-cd的表达,促进integrin β1表达有关.

长程脑电对幕上开颅手术后癫痫的诊断价值

目的观察长程脑电监测对幕上开颅手术后癫痫的诊断价值.方法选择260例幕上占位性病灶患者,术前2～3 d、术后7～10 d和1～3个月分别长程脑电检查.结果①长程脑电术前、术后7～10 d和1～3个月异常率分别为88.1%、97.7%、77.7%.②术前无癫痫发作者,术后新发癫痫17例,提示手术对大脑皮质的损害,可能增加致痫机会.结论长程脑电对幕上占位性病灶术前术后的监测,能显示病灶及手术对脑机能的影响,有助于术后癫痫的诊断.

高效液相色谱法测定人血浆中氨苄西林、丙磺舒的血药浓度的价值

目的建立测定氨苄西林、丙磺舒血药浓度的高效液相色谱法.方法色谱柱:Symmetry ShieldTMRP18柱(5μm,150 mm×3.9 mm);流动相氨苄西林:0.068 mol/L的磷酸二氢钾溶液(pH3.0)-乙腈(92:8,V/V),丙磺舒:水-乙腈-1mol/L的磷酸二氢钾溶液-1 mol/L冰醋酸(59.5:39.8:0.62:0.08,V/V,加入0.15%的三乙胺调至pH 2.76).流速均为1.4 ml/min;检测波长氨苄西林为210 nm,丙磺舒为254 nm.结果氨苄西林的浓度在1.25～40μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9999),丙磺舒的浓度在0.625～20μg/ml范围内线性关系良好(r=0.999 9).结论本法操作简便,灵敏,快速,重现性好,适用于人体药动学研究.

携RGDS超声造影剂的制备及体外靶向血栓研究

目的探讨制备携精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(Arg-Gly-Asp-Ser,RGDS)靶向脂膜超声造影剂的制备,并对靶向微泡的特性及靶向作用进行初步鉴定.方法分别采用酰胺键共价键合的方式和表面吸附法将脂膜超声造影剂与RGDS血栓靶向短肽片段进行结合;制备产物通过流式细胞仪进行携带率和稳定性的检测;对内源性凝血途径产生的血栓进行寻靶作用研究.结果流式细胞仪显示共价键合RGDS脂膜超声造影剂其微泡外壳波长发生了明显变化,显示改变率达到82%,而表面吸附法制备的靶向超声造影剂改变率达到23%;激光共聚焦显微镜显示携带RGDS的脂膜超声造影剂在大量的PBS液清洗后,对离体血栓仍具有很强的靶向性和稳定性,而表面吸附法制备的靶向超声造影剂在大量PBS液清洗后,失去了其靶向性.结论采用共价键合的化学修饰方法可以成功制备稳定性好的亲血栓靶向脂膜超声造影剂.

稳定高效表达正反义Alu-Sx细胞系的建立

目的建立稳定高效表达正反义Alu-Sx的细胞系.方法根据Alu亚家族Sx序列合成两对两端带有限制性酶切位点的引物,提取HEK293细胞的总DNA后PCR扩增,产物连接到真核表达载体pcDNA3.1/myc-His A中构建成重组体.经酶切及测序鉴定后,阳离子脂质体转染法转染HEK293细胞后G418筛选稳定表达的细胞克隆,Northern杂交检测并挑选出表达强的亚克隆.结果成功构建Alu亚家族Sx的正反义真核表达载体并获得高效稳定表达的HEK293细胞亚克隆.结论高效稳定表达正反义Alu Sx的HEK293细胞亚克隆可用于下一步研究.

肺气肿兔膈肌力学模式对慢性超低频复合生理频率电刺激的适应性改变

目的研究不同频率慢性电刺激(CES)后肺气肿模型兔膈肌力学模式适应性变化,以了解慢性超低频电刺激对肺气肿兔膈肌力学特征的影响.方法采用木瓜蛋白酶雾化吸入法建立兔肺气肿模型;测定正常对照组、肺气肿组和肺气肿CES组膈肌颤搐收缩张力(Pt)、强直颤搐收缩张力(Po)、峰值张力时间(TPT)、1/2松弛时间(1/2Rt)、疲劳指数(FI)和疲劳恢复指数(FRI).结果①同正常对照组比较,肺气肿组Pt、Po降低(P＜0.01),TPT、1/2Rt延长(P＜0.01),FI、FRI增加(P＜0.01).②同肺气肿组比较,40 Hz和(2.5+40)Hz组Pt、Po明显增加(P＜0.01),TPT、1/2Rt明显缩短(P＜0.01),10 Hz组结果则相反(P＜0.05).40Hz、(2.5+40)Hz、10 Hz组FI、FRI明显下降(P＜0.01).③(2.5+40)Hz组与40 Hz组比较,Pt、Po、TPT、1/2Rt无显著统计学差异(P＞0.05),FI、FRI下降(P＜0.01).结论超低频复合生理频率慢性电刺激[(2.5+40)Hz]可显著提高肺气肿兔的膈肌收缩力,较生理频率慢性电刺激(40 Hz)能使肺气肿兔膈肌抗疲劳能力得到更明显的提高.

单纯神经内窥镜手术治疗三脑室内囊性颅咽管瘤效果

目的探讨单纯神经内窥镜手术在三脑室内囊性颅咽管瘤治疗中的作用.方法对三脑室内囊性颅咽管瘤伴有梗阻性脑积水的11例患者,应用神经内窥镜缩小肿瘤体积、解除梗阻性脑积水、穿通囊内分隔并行囊腔与第三脑室和/或侧脑室的内造瘘术,术后辅以放射治疗.结果 11例患者术后颅内压增高症状均消失、术前症状改善.影像学复查(CT及MRI)见肿瘤均缩小、脑积水明显减轻或消失.除1例少儿术后昏睡2 d外,余无其他严重并发症.结论对三脑室内囊性颅咽管瘤并伴有脑积水者,采用单纯神经内窥镜手术,术后辅以放射治疗是进一步提高治疗效果、减少严重并发症的有效方法.

幽门括约肌捏断对胃食管高位吻合术后胃排空功能的影响

目的探讨幽门括约肌捏断对食管癌切除胃食管高位吻合术后胃排空功能的影响.方法对28例食管癌切除高位胃食管吻合患者附加幽门括约肌捏断,监测幽门压和胃排空功能.结果幽门括约肌捏断前幽门收缩压(86.56±9.61)mmHg非常显著高于基线收缩压(43.37±4.64)mmHg(P＜0.01),捏断后收缩压(29.96±3.37)mmHg非常显著低于基线收缩压(P＜0.01),而幽门静息压在捏断前、后与基线静息压无显著差异(P＞0.05);幽门括约肌捏断组半量胃排空时间与正常对照组无显著差异(P＞0.05),而未捏断组较正常对照组、捏断组非常显著延长(P＜0.01).结论食管癌切除胃食管高位吻合术后,幽门压力升高,胃排空延缓,幽门括约肌捏断能有效促进胃排空,是一种预防胃排空障碍简便易行的方法.

儿童紫癜性肾炎84例临床分析与血浆内皮素-1变化的意义

目的了解儿童紫癜性肾炎临床特点及血浆内皮素-1变化的临床意义.方法总结2000年1月至2005年6月84例紫癜性肾炎(HSPN)患儿的临床资料,对HSPN发生的流行病学、临床、病理特征进行分析.采用同位素放免法对84例HSPN患儿及16例正常儿童进行血浆内皮素-1(ET-1)浓度检测.结果①发病年龄在5～10岁者占90.6%,9月至次年3月为高发病期,发病率占80.32%;感染仍是主要诱因(40.57%);胃肠症状首发时33.33%发生误诊.临床上以肾病综合征表现常见(47.63%).病理分型以Ⅱ级多见(37.84%),Ⅲ级以上占56.40%.2、HSPN患儿血浆ET-1水平明显高于正常对照组.其血浆ET-1水平与血尿素氮、肌酐呈正相关(r=0.584,0.523,P＜0.05).结论 HSPN的发病具有一定的流行病学特征.HSPN患儿血浆ET-1水平升高与肾功能损害有关.

大鼠骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化的初步研究

目的体外分离培养骨髓间充质干细胞,并探索表皮细胞生长因子诱导MSCs分化的潜能及条件.方法采用直接贴壁法,分离培养大鼠股骨和胫骨骨髓间充质干细胞,应用免疫细胞化学法检测细胞CD44、CD106、CD29、CD90、CD34等,对分离的细胞进行鉴定.以10～40 ng/ml的表皮生长因子处理第3代MSCs,观察细胞角蛋白的表达.用Western blot方法摸索integrin β1的表达与MSCs分化状态的关系.结果原代培养的骨髓间充质细胞CD44、CD106、CD29、CD90免疫细胞化学染色为阳性,CD34为阴性,符合骨髓间充质干细胞特征.MSCs经不同浓度的EGF体外诱导7 d后,免疫细胞化学结果显示,EGF浓度为30 ng/ml和40 ng/ml时,细胞角蛋白出现阳性表达;体外诱导14 d,呈角蛋白染色阳性的细胞比例进一步增加,同时integrin β1表达量下降.结论体外培养的MSCs在EGF诱导下,具有分化为表皮细胞的倾向,同时integrin β1可能在MSCs分化中具有一定的作用.

睡眠剥夺对大鼠空间学习记忆的影响及其LTP机制的研究

目的研究长时间睡眠剥夺对大鼠空间学习记忆及NMDA受体介导的LTP的影响.方法采用侧脑室注射PCPA(15μg/kg,1次/d,连续5 d)和阿托品(15μg/kg,从第8天开始注射,1次/d,连用2 d)制作大鼠睡眠剥夺模型,于注药的第2天起同步连续采集8 d脑电(EEG)、肌电(EMG)、眼电(EOG)对睡眠剥夺模型进行鉴定,Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆,以脑片盲法膜片钳全细胞技术记录兴奋性突触后电流(EPSCs)观察海马CA1区锥体细胞由NMDA受体介导的LTP变化.结果睡眠剥夺组与对照组相比觉醒(Waking)明显延长,慢波睡眠(SWS),快波睡眠(PS),总睡眠时间(TST)明显减少(P＜0.01).在水迷宫实验中睡眠剥夺组大鼠的逃避潜伏期延长,穿过原平台位置次数和在原平台象限探索时间百分率下降(P＜0.05),睡眠剥夺组大鼠海马脑片CA1区锥体细胞由NMDA受体介导的LTP诱出率,非常显著低于对照组(P＜0.01).结论侧脑室注射PCPA与阿托品导致的睡眠剥夺显著的影响了大鼠空间学习记忆能力其机制与NMDA受体介导的LTP有关.

诺帝滴眼液对碱烧伤诱导角膜新生血管的抑制作用

目的观察自制诺帝滴眼液(Nordy eye drop)对Long-Evans大鼠角膜碱烧伤后新生血管(CRNV)有无抑制作用及其对正常角膜有无毒副作用.方法采用0.025%、0.1%两个不同浓度诺帝滴眼液滴眼21 d,通过裂隙灯、光镜、电镜观察检测诺帝滴眼液的毒副作用.建立角膜碱烧伤后角膜新生血管模型,0.025%、0.1%两个不同浓度诺帝滴眼液4次/d滴眼治疗,0.1%地塞米松磷酸钠滴眼液作为阳性对照、空白溶液作为阴性对照,观察诺帝治疗效果.结果诺帝滴眼液滴眼21 d后观察正常大鼠,无畏光、结膜充血等刺激症状,组织学检查显示结构正常,未见炎性细胞浸润.大鼠角膜碱烧伤后1 d时仅见角膜缘血管网扩张,3 d时新生血管长入,7～14 d达高峰,14 d时治疗组和地塞米松组新生血管开始退化;比较各组CRNV面积与角膜面积的比值,治疗组和阳性对照组均小于阴性对照组并有非常显著性差异(P＜0.01),治疗组与阳性对照组间、0.025%与0.1%治疗组间均无显著性差异(P＞0.05).结论 0.025%、0.1%的诺帝滴眼液局部滴眼无明显毒副作用,并且对CRNV有显著抑制作用.

胰岛素强化治疗对急性重型颅脑损伤患者脑脊液乳酸代谢的影响

目的评价强化治疗和血糖控制对改善合并应激性高血糖的重型颅脑损伤患者脑组织代谢和神经系统预后的意义.方法46例发生应激性高血糖(血糖超过9 mmol/L)的重型颅脑损伤患者配对后随机分为胰岛素强化治疗组和对照组,血糖分别控制在4～6 mmol/L和＜11 mmol/L.硬膜外置管动态监测颅内压(ICP)变化,于入院后1周内每日检测脑脊液乳酸浓度和pH值,并行哥拉斯格(GCS)评分评价中枢神经系统功能恢复情况.结果强化治疗显著降低了恢复期脑脊液乳酸浓度和水肿高峰期颅内压峰值,治疗组GCS评分高于对照组,胰岛素治疗并缩短了ICU监护天数和总住院时间.结论胰岛素强化治疗可改善脑外伤后脑脊液乳酸代谢,降低水肿高峰期颅内压,为神经组织细胞恢复提供稳定微环境.

252锎内照射加等中心四野箱式外照射治疗宫颈癌的早期观察

宫颈癌的放疗以内照射+外照射的治疗方法应用的为普遍[1].外照射国外多采用盆腔四野箱式照射,而国内目前多采用盆腔前后对穿野的照射[2].从2002年8月我们采用252锎中子内照射加等中心四野箱式或常规对穿野外照射治疗宫颈癌,本研究的目的在于观察两种外照射时放射性直肠炎、胃肠炎等放疗早期并发症的区别.

大鼠爆炸性脑创伤模型建立

目的建立一种稳定、可靠的大鼠爆炸性脑水肿动物模型.方法 Wistar成年大鼠105只随机分为80、150mg TNT当量组和假手术组(n=35),右侧额顶部开直径为1 cm的骨窗后分别用80 mg和150 mg TNT当量电雷管在5 cm垂直距离爆炸,于1、2、3、4、5、6、7 d检测损伤区脑水肿指数和光、电镜病理形态变化.结果 150 mg TNT当量组大鼠在伤后2 d内全部死亡,80 mgTNT当量组大鼠存活时间在7 d以上,伤后2 d水肿达高峰,第3～7天水肿逐渐减退.结论 80mg TNT当量电雷管在5 cm的爆炸距离可造成稳定的大鼠爆炸性脑水肿模型.

大鼠膀胱平滑肌过度充盈后钙离子分布的变化

目的观察大鼠膀胱平滑肌细胞钙离子在亚细胞水平的分布变化,同时探讨钙离子超微结构示踪方法.方法健康雌性Wistar大鼠10只,分实验组(膀胱过度充盈2 h+排空后2 h)和正常对照组各5只,用草酸钾-戊二醛灌注固定取膀胱组织制样透射电镜观察.结果示踪钙离子呈20 nm直径高电子密度细颗粒状,正常对照组大鼠膀胱平滑肌示踪钙离子数量少,散在分布于滑面内质网内,实验组示踪钙离子在损伤肌细胞内数量明显增多,弥漫密集分布,尤其聚集在线粒体周围.结论急性尿潴留时膀胱平滑肌功能和结构损害与细胞内钙超载密切相关.钙示踪法是观察细胞内钙超载的可靠方法.

胰岛细胞移植治疗糖尿病现状与进展

糖尿病是多基因遗传与环境因素长期共同作用所导致的一组以慢性高血糖为特征的代谢疾病;由于体内胰岛素相对或绝对不足或靶细胞对胰岛素敏感性降低(受体或受体后缺陷)所引起的内分泌代谢性疾病.目前全世界约有1.5亿糖尿病患者,预计到2025年将达到3亿.

关于数字的用法