第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间通讯的改变
目的 观察急性白血病化疗前后与正常人骨髓基质细胞间隙连接蛋白43 (connexin43, Cx43)表达的变化及通讯功能的改变.方法 体外培养初发急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的与正常人的骨髓基质细胞,采用免疫细胞化学方法观察三者之间Cx43表达的变化;采用细胞划痕染料传输技术比较三者之间间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication, GJIC)功能的差异.结果 正常人、急性白血病化疗前及化疗后完全缓解的骨髓基质细胞上Cx43表达的阳性率分别为(88.0±3.5)%、(12.0±2.4) %和(52.0±3.1) %;基质细胞上Cx43蛋白的光密度值分别为(175.08±8.34)、(45.42±3.71)及(94.33±7.20);染料传输的细胞数分别为(9.20±0.35)、(1.84±0.33)和(4.07±0.53).结论 急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常人及化疗后完全缓解急性白血病骨髓基质细胞明显减弱.
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基于流体动力学的mA20质粒及其突变体转染对实验性小鼠内毒素血症的治疗作用
目的 研究mA20及其突变体mA20-ZnF4-7质粒对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)攻击所致实验性内毒素血症小鼠的治疗作用.方法 用LPS攻击小白鼠制备内毒血症动物模型.按10 μg质粒/1.6 ml生理盐水比例溶于生理盐水中,采用基于流体动力学基因转染方法对实验组小鼠进行质粒注射.以ELISA检测各组血浆和组织TNF-α、IL-1β表达.12 h观察组织病理变化.结果 ①mA20质粒治疗组、mA20-ZnF4-7质粒治疗组的TNF-α在各时间点的表达分别为:6 h:(201.797±4.789)、(235.710±6.108) pg/ml,12 h:(236.580±7.497)、(255.130±7.827) pg/ml,24 h:(154.551±16.460)、(223.246±11.316) pg/ml;两组间无显著性差异(P＞0.05);与单纯内毒素组、空质粒组的TNF-α表达比较有显著性降低(P＜0.05).②mA20质粒治疗组、mA20-ZnF4-7质粒治疗组的IL-1β在各时间点的表达分别为:6 h:(87.103±3.840)、(101.586±2.486) pg/ml,12 h:(83.655±4.973)、(94.460±3.110) pg/ml,24 h:(77.678±6.555),(87.103±4.826) pg/ml;该两组间无显著性差异(P＞0.05);与单纯内毒素组、空质粒组的IL-1β表达比较有显著性降低(P＜0.05);各时间点之间比较无明显差别(P＞0.05).③病理学观察结果显示:mA20治疗组、mA20-ZnF4-7治疗组的肝、肺损伤均较单纯内毒素组、空质粒组轻;与生理盐水对照组相比,肝、肺损伤无明显差别(P＞0.05).结论 "基于血流动力学的基因转染方法"能有效地把目的质粒DNA转入肝、肺;对实验性类毒素血症小鼠体外转染mA20-ZnF4-7和mA20有相似的治疗作用,这为临床应用提供一定的实验基础.
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GM-CSF耦联米托蒽醌脂质体的制备及体外抑瘤作用的实验研究
目的 制备粒-巨噬细胞集落刺激因子 (granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)耦联米托蒽醌脂质体(liposome-entrapped mitoxantrone,LEM),比较其与LEM和米托蒽醌(dihydroxyanthraquinone,DHAQ)对HL60/ADM细胞的体外杀伤作用.方法 用逆向蒸发法制备LEM,高速离心法纯化LEM,比色法测定包封率,透射电镜下观察LEM的结构和粒径,以戊二醛交联法制备出LEM-GM-CSF,紫外分光光度法测定耦联率,流式细胞术测定LEM-GM-CSF中GM-CSF的活性保留率.通过MTT法检测所制备LEM-GM-CSF 、LEM 及DHAQ对HL60/ADM细胞的杀伤作用.结果 LEM粒径分布均匀,为170～220 nm,包封率为80%,GM-CSF与LEM有较高的耦联率及活性保留率,分别为42.3%及74.6%;LEM-GM-CSF 、LEM 及DHAQ对HL60/ADM细胞具有杀伤作用,且LEM-GM-CSF的杀伤作用显著强于LEM和DHAQ.LEM-GM-CSF、LEM及DHAQ对HL60/ADM细胞作用24 h的IC50分别是8.73、12.42、27.31 μg/ml;作用48 h的IC50分别是:0.62、8.25、12.44 μg/ml.结论 本研究制备的LEM-GM-CSF对 HL60/ ADM细胞具有明显的杀伤作用,有望成为良好的抗白血病药物新剂型.
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结直肠癌单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定
目的 制备结直肠癌特异性单克隆抗体,为深入研究相关肿瘤的发病机制提供新的实验工具.方法 用人结直肠癌患者的手术标本制备细胞悬液免疫小鼠,按常规方法行细胞融合,经免疫组织化学染色筛选阳性克隆,并对其抗体的特性和生物学性状等进行分析.结果 共获得32个阳性克隆,其中针对结直肠癌较特异性的阳性克隆有2个(克隆株2-3,15-8).免疫组化染色显示,克隆株2-3培养上清和腹水与结直肠癌组织的冰冻切片反应的阳性率可达100%.癌旁正常组织的阳性率较低,且染色强度远弱于癌组织,当抗体稀释度超过1∶6 000时反应阴性,而肿瘤组织仍呈强阳性.从结肠癌的分化程度来看,分化较差的肿瘤组织,包括中、低分化的癌组织染色较强.另外,免疫染色阳性产物主要位于肿瘤的腺腔和正常黏膜表面,提示该抗体所识别的抗原可能为结直肠癌细胞和黏膜上皮分泌的黏蛋白等抗原.结论 本研究成功地制备了两株针对结直肠癌的较特异的单克隆抗体,可作为实验研究相关蛋白在结直肠癌及其他肿瘤发病中的作用机制的方法.
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用T7噬菌体展示技术筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白
目的 用T7噬菌体筛选系统筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白.方法 应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到HCV的核心蛋白作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索.结果 经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与HCV核心蛋白相互作用的蛋白为:Smad interacting-protein 1(SIP1).结论 T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨核心蛋白的致病、致癌机制提供重要依据.
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青蒿素对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用
目的 观察青蒿素(artemisinin, ART)对脓毒症大鼠肺组织损伤的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP)制作大鼠脓毒症模型,动物分为正常对照组、CLP组和青蒿素治疗(ART)组,分别于CLP术后2、6、12、24、48、72 h活杀大鼠取肺组织,匀浆后动态浊度鲎试验法检测内毒素(lipopolysaccharide, LPS)水平,ELISA法检测TNF-α和IL-6的含量,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测肺组织TNF-α和IL-6 mRNA的表达,光镜下观察肺组织的病理改变.结果 CLP术后,ART组大鼠肺组织匀浆LPS、TNF-α和IL-6含量较CLP组明显降低(P＜0.05,P＜0.01),TNF-α和IL-6 mRNA的表达也显著低于CLP组(P＜0.05,P＜0.01),24 h肺组织的病理损伤明显减轻.结论 青蒿素可能通过降低脓毒症大鼠肺组织局部的LPS水平,抑制和减少了TNF-α和IL-6等促炎细胞因子的表达和释放,进而减轻肺组织的损伤.
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人尿路上皮细胞TLR2和TLR4分布情况研究
目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)2和4在人尿路上皮细胞中的表达情况.方法 体外培养人肾小管、肾盂、输尿管和膀胱上皮细胞,提取总RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定不同部位的含量.结果 肾小管、肾盂、输尿管和膀胱上皮细胞TLR2的相对表达量分别为0.326、0.589、0.602、0.735,而TLR4的相对表达量分别为0.223、0.327、0.379、0.365,所有部位尿路上皮细胞中TLR2含量显著高于TLR4(P＜0.05),肾小管上皮细胞TLR2、TLR4含量显著低于其余各组(P＜0.05).结论 人尿路上皮细胞中TLR2和TLR4均有表达,尿路感染致病菌分布量可能与TLR亚型表达情况有关.
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罗非昔布对裸鼠人胃癌原位种植瘤组织中血管内皮生长因子和诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的 探讨罗非昔布对裸鼠人胃癌原位种植瘤组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的影响.方法 建立裸鼠人胃癌原位种植转移模型,以罗非昔布给裸鼠灌胃,通过免疫组化Envision法检测罗非昔布对原位种植瘤胃癌组织中VEGF、iNOS蛋白的表达.结果 VEGF的表达:对照组VEGF阳性率为81.25%, 罗非昔布组为61.25%, 联合组为35.00%, 罗非昔布组与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05), 联合组与罗非昔布组相比,差异有显著性(P＜0.05).iNOS的表达显示:对照组iNOS阳性率为73.75%,罗非昔布组为52.50%,联合组为26.67%,罗非昔布组与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05).结论 环氧合酶-2抑制剂罗非昔布可能通过降低胃癌肿瘤组织中 VEGF、iNOS的表达,使肿瘤血管生成受抑,从而抑制胃癌细胞的生长和转移.
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人CD40L真核表达体系的建立
目的 构建人CD40L真核表达体系并鉴定其在转染细胞中的表达.方法 以DNA重组技术构建CD40L的真核表达载体pcDNA3.1(+)-CD40L,脂质体法转染于人小细胞肺癌细胞株h446,流式细胞技术鉴定其在转染细胞中的表达.结果 双酶切及DNA测序证明,CD40L DNA插入表达载体pcDNA3.1(+) 序列及方向正确,转染肺小细胞肺癌细胞株h446后,经流式细胞仪鉴定转染细胞中存在CD40L表达.结论 成功地建立人CD40L表达体系,为构建以人CD40L为组件的抗肿瘤疫苗的临床研究奠定基础.
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伽玛刀对红藻氨酸模型大鼠海马形态学及苔藓纤维变化的影响
目的 通过红藻氨酸(kainic acid, KA)癫痫大鼠模型的伽玛刀(gamma knife, GK)照射,探讨伽玛刀治疗癫痫的机制,以及伽玛刀与海马苔藓纤维发芽(mossy fiber sprouting, MFS)的关系.方法 74只Wistar大鼠分为3组:正常对照组(A组),红藻氨酸致痫模型大鼠组(B组),40 Gy伽玛刀照射红藻氨酸致痫大鼠组(C组).应用常规病理、电镜观察海马结构形态学改变,Timm's银染色组织化学方法观察伽玛刀对海马区苔藓纤维发芽的影响.结果 B组可见以CA1、CA3区及齿状回内分子层(inner molecular layer, IML)为主的神经元变性、坏死.C组与B组相比,神经元损伤减轻.对Timm's染色脑片海马CA3区透明层进行测定,B、C组大鼠海马苔藓纤维均出现明显的发芽现象,CA3区异常Timm's阳性颗粒光密度值显著高于A组(P＜0.01);C组与B组相比,1～14 d 苔藓纤维发芽未见明显减少(P＞0.05),28～42 d显著减少(P＜0.05).结论 海马细胞形态的改变--苔藓纤维发芽,可能是KA大鼠癫痫形成的重要机制.40 Gy的伽玛刀照射对减轻神经元的损伤有重要作用,抑制苔藓纤维发芽是主要机制之一.
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牛磺酸对模拟急性高原低氧大鼠小肠组织HIF-1α及HIF-1β表达的影响
目的 探讨牛磺酸对模拟高原缺氧大鼠小肠组织HIF-1α及HIF-1β表达的影响.方法 动物经基础饲料或添加牛磺酸饲料喂养7 d后,利用低压舱分别模拟4 500 m及5 500 m海拔高度高原缺氧,分别在高原缺氧处理后第2、6、12、24、48、72 h处死动物,剪取小肠组织,RT-PCR检测 HIF-1α、HIF-1β mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白表达.结果 缺氧条件下HIF-1α、HIF-1β表达明显增强,在缺氧12 h时达到峰值,随后逐渐减弱;添加牛磺酸组在各时相点的表达相对于未加牛磺酸组显著增强.结论 牛磺酸能够显著增强高原缺氧大鼠小肠组织HIF-1α、HIF-1β的表达.
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重组人可溶性补体受体1型SCR15-18片段表达纯化及生物活性鉴定
目的 获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18 (sCR1-SCR15-18)蛋白.方法 重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18 在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2+-NTA 亲和层析后,选择不同氧化还原条件进行复性,进而检测其生物学活性.结果 得到了有较高表达量、较高纯度和较好生物学活性的sCR1-SCR-15-18蛋白.结论 优化了sCR1-SCR15-18蛋白的表达、纯化和复性的参数,所获结果为进一步动物体内保护实验研究奠定了基础.
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三羟异黄酮对小鼠辐射损伤后造血功能的影响
目的 探讨三羟异黄酮(genistein, GEN)对辐射损伤造血功能的影响.方法 6.0 Gy γ射线一次全身照射BALB/c雄性小鼠复制出造血损伤模型.照射前24 h给予GEN灌胃(160 mg/kg体质量),分别观察照射后1、3、7、14、21、30 d不同时相点小鼠血清对粒单系集落形成单位(colony-forming unit-granulocyte/macrophage, CFU-GM)和红系集落形成单位(colony forming unit-erythroid, CFU-E)的支持或抑制活性.结果 辐射前24 h给予GEN,辐射后该组小鼠血清造血刺激活性显著增加,使正常小鼠骨髓有核细胞CFU-GM、CFU-E形成数量明显增多,而且对CFU-GM的刺激活性较CFU-E强.同时,该组小鼠照后血清对CFU-GM、CFU-E的抑制活性明显降低,但对CFU-E和CFU-GM的抑制活性差异不明显.结论 提高辐射损伤后小鼠血清刺激活性可能是GEN防护放射性造血损伤、促进受损造血系统重建的分子机制之一.
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hPDGF-A/hBD2双基因共表达腺病毒载体的构建及表达
目的 制备人血小板源性生长因子-A(human platelet-derived growth factor A, hPDGF-A) 和人β防御素2(human beta defensins, hBD2)双基因共表达腺病毒载体并观察其在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)中的表达.方法 将hPDGF-A和hBD2通过内部核糖体插入位点(internal ribosome entry site, IRES) 连接后,以同源重组的形式插入腺病毒表达载体,由人胚肾293 细胞包装,获得有感染能力的重组腺病毒颗粒.重组病毒感染BMSCs后,用RT-PCR检测重组腺病毒的表达.结果 ①成功构建穿梭质粒pAdTrack-hPDGF-A-IRES2-hBD2.②成功构建重组腺病毒质粒pAdeasy-hPDGF-A-IRES2-hBD2.③293细胞包装获得有感染能力的重组腺病毒.④转染的BMSCs高表达hPDGF-A和hBD2.结论 构建了hPDGF-A/hBD2双基因共表达腺病毒载体,证实其转染BMSC后的表达.
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人胱抑素C的原核表达纯化鉴定及抗血清的制备
目的 构建人胱抑素C(cystatin C, Cys C)的原核表达载体,并用纯化的Cys C重组蛋白免疫家兔,制备Cys C抗血清. 方法 从HL-60细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增Cys C基因,将测序正确的目的基因克隆至pET32 (a)表达载体中,并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;所获得的包涵体蛋白经亲和层析纯化、透析复性、Western blot鉴定后,免疫家兔制备抗血清,抗体效价和特异性分别采用ELISA、Western blot进行检测.结果 测序证实克隆的基因序列与GeneBank中的Cys C序列相符;SDS-PAGE、Western blot结果证实获得相对分子质量为35×103的Cys C 融合蛋白,其表达形式为不溶性包涵体;此包涵体蛋白经Ni2+亲和层析能有效纯化,以该蛋白免疫家兔制备抗血清,抗体效价为1∶8 000,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合. 结论 获得了Cys C重组蛋白及特异性多克隆抗体.
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Mash1在室管膜前下区神经干细胞向GABA能神经元分化中的作用
目的 研究Mash1在室管膜前下区(anterior subventricular zone, SVZa)神经干细胞向γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid, GABA)能神经元分化中的作用.方法 体外分离培养新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞,构建Mash1与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)正义、反义融合蛋白表达质粒,转染SVZa神经干细胞,GFP 活体荧光标记SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Mash1作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例和分化为GABA能神经元的比例.结果 pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1+质粒双酶切鉴定构建成功,核转染结果表明:GFP融合蛋白表达阳性;pEGFP-Mash1+组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组(P＜0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显低于空白对照组;pEGFP-Mash1+组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显高于空白对照组(P＜0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显低于空白对照组(P＜0.05).结论 pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1+质粒构建成功;Mash1可以促进SVZa神经干细胞向神经元方向分化,而且主要表现为促进SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化.
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肺鳞癌mtDNA D-环序列微卫星不稳的研究
目的 分析肺鳞癌患者癌组织线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)非编码D-环区序列的微卫星不稳(mitochondrial microsatellite instability, mtMSI)现象并探讨其意义.方法 应用改良一步法制备15例肺鳞癌患者癌组织mtDNA, PCR产物直接测序,对比分析D-环区序列mtMSI情况.结果 15例肺鳞癌患者癌组织mtDNA D-环区中,全部出现了mtMSI(100%),在3个不同位点上共发现30个mtMSI.结论 肺鳞癌患者mtMSI发生率高, D环区碱基序列的mtMSI可能与肿瘤的发生发展有关.
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氯沙坦在AT2-R介导的肾血管性高血压大鼠肾脏保护功能中的作用
目的 研究在肾血管性高血压的病理条件下氯沙坦对血管紧张素Ⅱ-2型受体(angiotensin Ⅱ type-2 receptors, AT2-R)介导的大鼠肾脏保护功能中的调节作用,并探讨其相关机制.方法 雄性SD大鼠采用Goldblatt 方法复制2肾1夹实验性肾血管性高血压模型,分为假手术组和手术组,分别给予低、中、高剂量的氯沙坦处理.用药6周后检测肾脏功能,观察肾脏AT2-R表达,测定血浆和肾脏组织中血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, AngⅡ)的含量变化.结果 在肾血管性高血压大鼠的非缺血肾脏AT2-R表达上调(P＜0.05),氯沙坦不仅可升高血浆和肾脏中的AngⅡ含量(P＜0.05, P＜0.05),还可促进高血压大鼠的尿钠排泄,保护肾脏功能,并且对肾脏AT2-R的表达有上调作用(P＜0.05).结论 氯沙坦通过上调肾脏的AT2-R,介导促尿钠排泄效应,对肾血管性高血压大鼠肾脏起保护作用.
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GDNF及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元的作用
目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元存活和突起生长的影响.方法 取新生大鼠颈上神经节(superior cervical ganglion, SCG)体外分离培养,培养基中含不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophic factor, GDNF),并选取不同方法溶解多聚-D-赖氨酸(poly-D-lysine, PDL)包被培养盖片,观测交感神经元的存活和突起生长状况.结果 用0.01 mol/L硼酸溶解的PDL进行包被,细胞存活和突起生长好,且神经元分散好,优于其他各组;GDNF对培养交感神经元的存活、突起生长具有显著的促进作用,且与其浓度存在量效关系,但它并不能阻止培养前5 d存活神经元数量的减少.结论 用0.01 mol/L硼酸溶解PDL包被是一种良好的生长底物处理方法,GDNF能促进离体培养的交感神经元的存活和突起生长.
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大鼠前额叶皮层锥体细胞中Orexin A对谷氨酸介导电流的调节效应
目的 研究前额叶皮层(prefrontal cortex, PFC)锥体细胞中觉醒肽orexin A对谷氨酸受体电流的调节效应.方法 采用酶加机械分离法分离10～14 d 鼠龄的Wistar大鼠PFC Ⅴ、Ⅵ层锥体细胞,利用膜片钳全细胞记录技术记录orexin A对谷氨酸诱发的跨膜电流的影响.结果 Orexin A和谷氨酸均能以剂量依赖性的方式使PFC锥体神经元产生内向电流,将大有效浓度1 mmol/L的谷氨酸诱发电流的幅值作为对照组(100%),灌流1 μmol/L orexin A孵育4～10 s后,再次给予1 mmol/L谷氨酸,诱发电流的幅值明显增大(46.59±15.19)% (n=8, P＜0.01). 结论 Orexin A对PFC锥体细胞谷氨酸受体具有显著的正向调控作用.
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兔健眼角膜缘干细胞取材安全范围的实验研究
目的 确定自体角膜缘干细胞移植健眼取材的安全范围,为临床治疗提供实验依据.方法 兔眼角膜按30°、60°、90°等依次递增至210°分组切取角膜缘干细胞组织,术后不同时间点裂隙灯下动态观察每组角膜混浊、角膜上皮染色、新生血管3项临床指标,角膜上皮印迹细胞学检查及HE染色观察角膜上皮的细胞表型和病理学改变.结果 兔眼角膜缘切取范围大于150°时,出现角膜混浊,上皮持续缺损及新生血管长入,临床指标评分比较,差异有统计学意义(P＜0.01).印迹细胞学检查显示PAS阳性的结膜细胞.组织病理学可见角膜缘上皮细胞层次减少和新生血管.结论 自体角膜缘干细胞移植健眼的取材范围≤150°(相当于5个钟点位)是安全的.切取范围＞150°时角膜缘干细胞可能出现不可逆的失代偿.印迹细胞学检查是诊断角膜缘干细胞缺乏简单有效的方法.
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关节镜下半月板部分切除制备骨关节炎动物模型
目的 探讨经关节镜建立猪双膝骨关节炎动物模型及用磁共振成像(magnetic resonance imaging, MRI)监测骨关节炎骨软骨损害的有效性和可行性.方法 4只小型猪经关节镜切除双膝外侧部分半月板,术后12周,行大体、组织学和MRI观察与切除半月板相对股骨髁的骨软骨变化.结果 大体观察结果显示,局限性软骨表面纤维化,股骨髁间切迹骨赘形成;组织学检测结果显示,软骨细胞数量和蛋白多糖含量减少、成簇排列细胞数量增加;MRI检查结果显示,软骨厚度变薄和骨软骨信号强度改变.结论 经关节镜半月板部分切除能有效建立猪双膝关节骨关节炎动物模型,MRI能灵敏地监测到骨关节炎动物模型的骨软骨变化.
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红藻氨酸快速点燃大鼠癫痫模型的建立及其海马神经发生
目的 建立红藻氨酸(kainite acid, KA)快速点燃癫痫模型,观察行为学、脑电图(electroencephalogrom, EEG)、海马病理改变及其神经发生.方法 立体定向连续注射KA于侧脑室致痫. 视频监测、深部EEG、Nissl染色、BrdU免疫组化染色.结果 大鼠行为学及深部EEG呈急性期、静止期和慢性期3个阶段性变化.根据Racine行为学分级法,Ⅴ级8只,Ⅳ级12只,Ⅲ级2只,Ⅱ级2只;深部电极描记出起始于海马并向杏仁核、额叶皮质等传导癫痫样波;病理变化提示长期癫痫发作会导致海马锥体细胞逐渐变性、坏死、丢失.BrdU标记细胞主要分布于海马齿状回,并在癫痫发作后显著增多(P＜0.01).结论 KA快速点燃大鼠模型为模拟颞叶癫痫的理想动模型,癫痫发作后神经发生显著增高.
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脂溢性角化病皮损区Smurf1和Smurf2表达增强
目的 探讨脂溢性角化病皮损区Smad泛素化调节因子1和2(Smad ubiquitination regulatory factor 1 and 2, Smurf1, 2)的表达及其意义.方法 采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和免疫组织化学技术分别检测脂溢性角化病皮损和对照正常皮肤中Smurf1和2的表达情况.结果 与对照正常皮肤相比,脂溢性角化病皮损中Smurf1和2表达水平上调.结论 脂溢性角化病皮损中Smurf1和2的过度表达可干扰转化生长因子β(transforming growth factor-β, TGF-β)信号转导通路,可能使TGF-β抑制上皮增生的作用不能有效发挥,促进了脂溢性角化病表皮的过度增生.
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肿瘤转移抑制因子CD63/ME491基因在小鼠子宫内膜表达的动态观察
目的 了解小鼠动情周期和早孕子宫中CD63/ME491 mRNA和蛋白的表达规律,探讨CD63/ME491在胚胎着床过程中的作用.方法 应用RT-PCR和免疫组化技术分别观察CD63/ME491 mRNA和蛋白的表达.结果 在整个动情周期中,CD63/ME491 mRNA在动情间期表达多,而在动情期表达少,但蛋白质却是在动情前期和间期表达丰富,子宫内膜上皮和基质细胞均呈阳性.早孕的小鼠子宫组织均有CD63/ME491 mRNA表达,且在胚胎开始植入的第4天表达多,以后维持在较高的表达水平.CD63/ME491蛋白在妊娠第1～6天子宫内膜腔上皮细胞和腺上皮细胞呈阳性表达.但在基质细胞表达的量和范围却不同:妊娠第1天,无CD63/ME491蛋白的表达;妊娠第2天,子宫内膜基质细胞出现微弱阳性表达;以后CD63/ME491蛋白在基质细胞的表达量和表达范围逐渐增强.结论 在胚胎着床过程中,CD63/ME491 在小鼠子宫中呈动态表达,提示它可能参与了子宫内膜对滋养层细胞有限侵袭的调控.
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肝细胞移植联合肝再生增强因子治疗大鼠急性肝功能衰竭的研究
目的 探讨同种异体肝细胞腹腔移植联合肝再生增强因子(augmenter of liver regenration, ALR)对D-氨基半乳糖(D-gal)诱导的急性肝功能衰竭大鼠的治疗作用.方法 采用D-gal诱导大鼠急性肝功能衰竭,诱导后24 h,59只大鼠随机数字表法分成4组.Ⅰ组15只:腹腔注射生理盐水;Ⅱ组15只:经腹腔移植2×107肝细胞, 以后腹腔注射生理盐水;Ⅲ组15只:经腹腔移植2×107肝细胞,同时腹腔注射ALR 50 μg·kg-1·d-1;Ⅳ组14只:腹腔注射ALR50 μg·kg-1·d-1.观察大鼠的存活率、肝脏功能、移植肝细胞存活情况、病理变化.结果 Ⅱ组、Ⅲ组大鼠存活率(46.7%、66.7%)显著高于Ⅰ组(0.0%)(P=0.006;P=0.0002),Ⅲ组(66.7%)与Ⅳ组(14.3%)有显著差异(P=0.008),其他组间无明显差异(P＞0.05).移植后第1、2天Ⅱ组腹水AST高于Ⅲ组(P=0.001), Ⅱ组第1、2天腹水ALT高于Ⅳ组,Ⅱ组、Ⅲ组第1、2天腹水TBil高于Ⅰ组(P＜0.05).Ⅲ组肝脏病理改变轻于其他组.Ⅲ组大鼠腹腔移植的肝细胞存活数多于Ⅱ组.结论 同种异体肝细胞经腹腔移植联合ALR可明显改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率,促进移植肝细胞存活和增殖,促进肝组织及功能恢复.
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小鼠胚胎神经干细胞海马移植对APP/PS1双转基因AD小鼠的治疗作用
目的 在APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)小鼠观察神经干细胞(nerual stem cells, NSCs)移植后细胞的存活、迁移以及对小鼠记忆功能的影响.方法 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)质粒转染培养胚胎NSCs,小鼠海马内移植,水迷宫实验检测小鼠认知功能.结果 EGFP转染NSCs海马内移植2个月后可观察到GFP阳性细胞,大部分分布在针道附近,部分向同侧皮层迁移,亦有部分通过胼胝体向对侧大脑迁移,同时小量细胞发出类似于神经元的长突起.AD小鼠的记忆功能明显改善.结论 胚胎NSCs海马内移植后能存活、迁移并分化为神经组织细胞,并能显著改善APP/PS1双转基因AD小鼠的认知功能障碍.
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心力衰竭患者心肌组织ACE2和ACE基因表达
目的 观察心力衰竭(简称心衰)患者不同心功能状态下血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme, ACE2)和ACE基因表达变化,探讨其与心衰患者心功能的关系.方法 通过手术取材,采用RT-PCR技术检测30例瓣膜病所致不同程度心衰患者和5例正常人心肌组织中ACE2和ACE mRNA表达.结果 瓣膜病所致心衰患者心肌组织ACE2和ACE mRNA表达均较正常组明显升高(P＜0.01),其中中重度心衰患者升高尤为显著(P＜0.01).轻度心衰患者心肌组织ACE2/ACE mRNA比值较正常组升高,中重度心衰时ACE2/ACE mRNA比值下降.结论 心衰患者心肌组织ACE2和ACE基因表达明显增强.轻度心衰患者ACE2/ACE mRNA比值升高可能是心脏的代偿机制,促进AngⅡ降解,增加Ang1-7合成,保护残存的心功能.中重度心衰患者ACE2/ACE mRNA比值降低,引起AngⅡ过度激活,加速心衰恶化.
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白血病细胞雄激素受体基因启动子甲基化状态的研究
目的 检测白血病细胞雄激素受体基因启动子区CpG岛甲基化状态情况,初步探讨雄激素受体基因启动子区甲基化与白血病发病机制的可能联系.方法 应用甲基化特异性PCR技术(methylation specific PCR, MSP)检测3种白血病细胞株及15例患者骨髓标本雄激素受体基因甲基化状态.结果 白血病细胞株均出现甲基化和非甲基化带,呈部分甲基化状态,而作为对照的正常人白细胞均只出现非甲基化带.15例白血病患者全部检出甲基化状态. 结论 白血病细胞的雄激素受体基因启动子区存在高甲基化现象,可能为白血病的致病机制分析提供了一个新的方向,提示AR基因启动子CPG岛的甲基化有可能成为白血病的新的参考标记物.
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PI3K、p-Akt蛋白在喉鳞癌中的表达及临床意义
目的 研究磷脂酰肌醇3-激酶( phosphoinositide 3-kinase, PI3K) 和蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)在人喉鳞状细胞癌组织中的表达特征及临床意义.方法 应用免疫组化S-P法检测40例喉鳞癌、20例声带息肉和20例喉乳头状瘤组织中PI3K和p-Akt的蛋白表达,显微镜下计数阳性细胞,对结果进行统计学分析.结果 PI3K和p-Akt在声带息肉组织中均呈低表达;在喉乳头状瘤中,PI3K高表达,而p-Akt呈低表达;在喉鳞状细胞癌组织中,PI3K和p-Akt均呈高表达.喉鳞状细胞癌中PI3K和p-Akt的表达与喉癌临床分期、颈部淋巴结转移及肿瘤的原发部位均无明显差异(P＞0.05).PI3K和p-Akt蛋白的阳性表达率随喉鳞癌分化程度的降低而降低,差异有统计学意义(P＜0.01).同一标本中PI3K和p-Akt的表达有显著的相关性(r=0.687, P＜0.01).结论 喉鳞癌存在PI3K和Akt蛋白的异常表达并与癌细胞的病理分级关系密切,PI3K/Akt途径的异常活化可能在喉鳞状细胞癌发生过程中起重要作用.
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小鼠骨髓间充质干细胞的分离与纯化培养的实验研究
目的 探索小鼠骨髓间充质干细胞的体外纯化培养方法.方法 先采用直接贴壁法培养的小鼠股、胫骨髓细胞,再用免疫磁珠法分选第3代中的CD11b-细胞.取分选纯化细胞进行形态学观察,并检测细胞在不同诱导条件下向成骨细胞及脂肪细胞的分化能力.结果 ①原代及传代培养的小鼠骨髓贴壁细胞多呈梭形,部分呈不规则型,其中含有较多的CD11b+细胞;磁珠分离后的纯化细胞呈现纺锤型、星型及不规则型等多种形态,细胞质丰富,核仁明显,细胞平行排列或漩涡状生长;②成骨诱导3周后mMSCs分化为成骨细胞,茜素红S染色有橘红色磷酸盐胞外基质沉积;③随着成脂化诱导时间的延长,细胞逐渐增大,油红O染色可见胞质内大量橙红色脂肪空泡.结论 单纯的贴壁及传代培养不能纯化小鼠骨髓间充质干细胞,贴壁与免疫磁珠分离相结合才是一种有效的mMSCs体外分离和纯化方法.
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心动过速性心肌病临床诊断及防治
动物实验和临床研究表明,长期慢性心动过速可引起类似于扩张型心肌病的表现即心脏扩大和心功能不全. 一旦心动过速得以控制,原来扩大的心脏和心功能不全可部分或完全恢复正常, 为此人们称这种由心动过速引起的心肌病为心动过速性心肌病(tachycardiomyopathy,TCM),它大的特点是具有可逆性,因此识别和治疗这种类型的心肌病具有极大的临床价值.
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经阴道胚胎减灭术3例
随着辅助生殖技术的不断发展,促排卵药物的大量运用[1],多胎妊娠率显著增加,引起产科并发症和新生儿并发症明显增加.我科生殖中心2006年首次出现三胎妊娠,均成功进行经阴道超声引导下胚胎减灭术(减胎术)共3例,现均已顺利生产.
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高血压合并心房颤动患者188例临床分析
心房颤动(房颤)是常见的心律失常,也是导致卒中和死亡的主要危险因素.目前,高血压不但是房颤的主要危险因素,也是房颤患者发生脑卒中的危险因素[1],近年来逐渐受到人们的关注.
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沙利度胺治疗骨髓增生异常综合征引起深静脉血栓形成1例
患者,女性,21岁,因"确诊骨髓增生异常综合征7个月余,左下肢肿胀8 d"入院.第1次入院前半年无明显诱因出现口唇发白、黑朦、乏力.到当地医院行血常规检查提示红细胞减少.
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盐酸坦索罗辛加阿托品治疗尿路结石引起肾绞痛的疗效
输尿管结石大都伴发严重腰腹疼痛,急需尽快缓解疼痛症状.从2002年10月至2004年10月,我院急症科针对收治的86例输尿管结石病例,分别采用了杜冷丁加阿托品和盐酸坦索罗辛加阿托品的解痉止痛治疗.本研究分析评估2种方法在治疗效果上的差异性.报告如下.
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腹腔镜和开腹全直肠系膜切除术治疗165例直肠癌患者短期疗效的比较
目的 比较腹腔镜全直肠系膜切除术(total mesorectal excision, TME)和开腹TME治疗直肠癌的手术切除范围和短期疗效.方法 在2002年8月至2005年12月期间收治了165例直肠癌患者,由患者自由选择上述手术方式,比较两组病例手术标本的长度、直肠远切端距肿瘤下缘的距离、清扫的淋巴结数目、局部复发率、远处转移发生率和2年生存率.两组病例的平均随访时间均为26.9个月(6～46个月).结果 两组病例的一般情况和Dukes分期相似.腹腔镜组和开腹手术组手术标本的长度分别是24.4 cm和25.2 cm;直肠远切端距肿瘤下缘的距离分别是2.9 cm和2.7 cm;清扫的淋巴结数目分别是11.5枚和10.6枚;局部复发率分别是9.6%和11%;远处转移发生率分别是11.5%和14.6%;2年生存率分别是85.7%和78.8%;2年无瘤生存率分别是76.2%和69.7%.两组病例以上参数均无显著差异.结论 腹腔镜TME和开腹TME治疗直肠癌的手术切除范围和短期疗效相同.
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10例中国正常汉族人不同的汉语听觉任务时fMRI中Wernicke区激活的特点
目的 筛选能够在功能性核磁共振造影(functional magnetic resonance imaging, fMRI)上稳定激活Wernicke区的汉语听觉任务刺激模式.方法 选用正常右利手中国汉族人10例,采用组块设计,应用西门子SONATA 1.5T MRI分别进行不同的汉语语言听觉刺激任务下的脑功能成像,汉语语言听觉刺激任务分2组:词汇理解组、段落理解组.同时以音乐组作为单纯听觉刺激对照.图像资料经处理后获得脑区激活图.结果 音乐组可见双侧颞横回激活,激活以右侧颞叶为主;词汇理解组与段落理解组10例均可见以左颞叶为主的激活(Wernicke区),其中段落理解组激活信号更加强烈,时间-信号强度动态曲线稳定.结论 汉语的段落理解任务可以作为临床观察fMRI中激活Wernicke区的听觉语言任务刺激模式.
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糖尿病患者根管治疗中疼痛有关因素的临床研究
目的 探讨糖尿病患者在根管治疗过程中发生根管治疗中疼痛(endodontic interappointment pain, EIP)的有关因素.方法 以临床需行根管治疗的79例糖尿病患者和82例非糖尿病患者各86颗患牙为研究对象,按患者血糖控制好坏分组,分析其与正常组EIP发生率、疼痛程度及疼痛在术后不同时间发生的相关情况.结果 血糖控制差组EIP发生率、术后不同时间出现疼痛以及疼痛程度严重的比率明显高于控制好组和正常组(P＜0.05);而控制好组与正常组之间差异没有统计学意义(P＞0.05),但3组内不同疼痛分级的发生率均随其程度加重而减小.结论 糖尿病患者根管预备术后7 d内都有可能发生疼痛,良好地控制血糖有利于减少EIP发生率和减轻疼痛程度.
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不同方案新辅助化疗对乳腺癌激素受体表达的影响
目的 探讨不同方案新辅助化疗对乳腺癌激素受体表达的影响.方法 免疫组化检测不同方案新辅助化疗组的乳腺癌患者化疗前后肿瘤组织雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor, PR)的表达情况,并比较两组化疗前后ER和PR表达水平的差异.结果 TE方案新辅助化疗组60例,ER表达水平增强15例(25.0%),减弱8例(13.3%),PR表达水平增强12例(20.0%),减弱6例(10.0%);CEF方案新辅助化疗组57例,ER表达水平增强8例(14.0%),减弱4例(7.0%),PR表达水平增强6例(10.5%),减弱3例(5.3%).TE方案新辅助化疗前后ER、PR表达水平改变显著(P＜0.05),而CEF方案新辅助化疗前后改变不显著(P＞0.05),不同疗效病例组之间ER、PR的表达水平改变差异显著(P＜0.05).结论 TE方案新辅助化疗对乳腺癌患者的ER、PR表达水平的改变影响显著,而CEF方案新辅助化疗对乳腺癌患者ER、PR表达水平的改变无明显影响,化疗后ER、PR表达水平的改变与疗效有关.
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10例特发性全身性癫痫患者丘脑磁共振波谱变化
目的 观察特发性全身性癫痫(idiopathic generalized epilepsy, IGE)患者丘脑组织的N-乙酰天门冬氨酸(N-aceytl aspartate, NAA)、胆碱(choline,Cho)、肌酸(creatine,Cr)代谢物质的变化,探讨其在癫痫发病中的作用及意义.方法 选取10例诊断明确的IGE患者,分别采集双侧丘脑的质子波谱,对NAA、Cr、Cho进行半定量分析,并用NHS3量表对病情程度进行量化评分,观察NAA/(Cr+Cho)值与癫痫严重程度的相关性.结果 IGE组双侧丘脑NAA/Cr明显减少, NAA/(Cr+Cho)值明显低于正常对照组(P＜0.05),且双侧NAA/(Cr+Cho)值与NHS3量表评分呈负相关(左侧:r=-0.644, P=0.022;右侧:r=-0.733, P=0.008) .结论 IGE患者丘脑神经元丧失及胶质细胞增生可能是其共同的病理特征;NAA/(Cr+Cho)值下降与病情程度相平行;磁共振质子波谱能早期、准确地反映IGE患者发作造成的脑损伤,NHS3量表评分与NAA/(Cr+Cho)值能一致反映痫性脑损伤的严重程度.
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子宫内膜异位症患者腹腔液中血管内皮生长因子及其可溶性受体的测定
目的 探讨子宫内膜异位症患者血管内皮生长因子可溶性受体1(soluble receptor 1 of vascular endothelial growth factor, s-VEGFR-1/soluble fms-like tyrosine kinase, SFlt-1)调节血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)活动的机制.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA),对28例子宫内膜异位症患者的腹腔液中游离的VEGF及s-VEGFR-1进行测定并计算活性指数(VEGF/s-VEGFR-1).以10例正常生育期妇女为对照.结果 ①子宫内膜异位症组VEGF水平明显高于对照组﹙P＜0.01).Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期﹙P＜0.05).②子宫内膜异位症组s-VEGFR-1水平也明显高于对照组﹙P＜0.01).Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期之间无显著差异(P＞0.05).③对照组、Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期VEGF活性指数分别为0.310、0.276和0.273.④子宫内膜异位症组增生期VEGF及s-VEGFR-1水平均明显高于分泌期﹙P＜0.01).⑤子宫内膜异位症组增生期VEGF活性指数低于分泌期.结论 VEGF在子宫内膜异位症的血管发生中有重要作用,但采用VEGF活性指数能更好地了解VEGF在病理学方面的作用.s-VEGFR-1对VEGF有下调作用.
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肥胖患者转甲状腺素蛋白水平的研究
目的 探讨转甲状腺素蛋白(transthyretin, TTR)在肥胖患者中的变化以及与血脂、胰岛素敏感性和胰岛β细胞功能的关系.方法 在流行病学调查中对所调查对象测量人体测量学指标,进行75 g口服葡萄糖耐量试验,测定血脂、游离脂肪酸、血糖、胰岛素和TTR等.将调查对象分为肥胖组和非肥胖组.结果 ①肥胖与非肥胖相比较,TTR的水平显著高于对照组[分别为(351.9±48.6) mg/L和(327.1±58.5) mg/L,P＜0.01].②在所有受试者中,TTR与TG、TC、LDL、FFA、WHR和BMI显著正相关(r值分别为0.535, 0.369, O.298, 0.174, 0.393, 0.282, P＜0.01),和HDL、HOMA-IS和DI显著负相关(r值分别为-0.24,-0.173,-0.157,P＜0.01).③多元逐步回归分析显示,影响TTR的主要因素是TG、TC、WHR和年龄.结论 在非急性应激状态下,TTR长期地升高与肥胖,尤其是中心型肥胖密切相关;可以从一定程度上反映脂质代谢紊乱和胰岛素敏感性;可能也与胰岛β细胞功能的损伤有关.
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58例长期机械通气老年患者血清降钙素原变化对呼吸机相关性肺炎的诊断意义
呼吸机相关性肺炎(ventilator-associated pneumonia, VAP)是机械通气常见的并发症,常导致患者住院时间延长、医疗费用增加等, 其直接导致的病死率达27%[1].VAP缺乏早期诊断特异性指标.支气管肺泡灌洗液细菌定量培养所获得的微生物证据,被认为是诊断VAP较可靠的依据,然而该侵入性技术并不能被广泛使用.
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两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较
目的 通过比较Ficoll和Percoll分离小型猪骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs),获得较好分离小型猪骨髓MSCs的方法.方法 Ficoll及Percoll分离小型猪骨髓MSCs后,台盼蓝染色及MTT法绘制生长曲线观察细胞活力,流式测定CD29、CD44、CD34、CD45行MSCs鉴定并了解其纯度.结果 两种方法分离后检测显示:Percoll组的细胞活力,细胞的纯度明显较Ficoll组高(P＜0.05).结论 Percoll是较好分离小型猪骨髓MSCs的方法.
