第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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脑缺血再灌注大鼠GAP-43和RhoA蛋白表达及NEP1-40对其的影响
目的 观察侧脑室注射NEP1-40对脑缺血再灌注大鼠轴突再生、患肢功能恢复和RhoA信号通路活动的影响,探讨其可能的机制.方法 将60只成年雄性SD大鼠分为假手术组、脑缺血对照组、侧脑室注射PBS组和侧脑室注射NEP1-40组;采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型;用Western blot方法检测缺血灶周边脑组织生长相关蛋白(GAP-43)和RhoA蛋白表达;用Montoya设计的"楼梯测试"方法对患肢运动功能进行测试.结果 ①侧脑室注射NEP1-40组大鼠缺血灶周边脑组织GAP-43在术后7 d和14 d均高于脑缺血对照组和侧脑室注射PBS组,以术后7 d显著.②侧脑室注射NEP1-40组大鼠缺血灶周边脑组织RhoA在术后各时相点显著低于脑缺血对照组和侧脑室注射PBS组.③侧脑室注射NEP1-40组大鼠在术后各时相点"楼梯测试"结果显著高于脑缺血对照组和侧脑室注射PBS组.结论 NEP1-40能够促进脑缺血再灌注大鼠损伤后轴突再生和运动功能恢复,其机制可能与抑制RhoA信号通路活动有关.
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基于中国可视人体数据集构建髋关节应力分析三维有限元模型
目的 基于中国可视化人体数据集准确构建包括髋关节骨、软骨及盂唇完整结构的三维有限元应力分析模型.方法 利用中国可视化人体数据库高分辨率磨片图像,采用轮廓提取法,在AutoCAD工作平台及Solidworks软件辅助下,通过实体加减法建立髋臼骨、软骨、盂唇和股骨头骨、软骨的三维实体模型,并导入ABAQUS分析系统中作为装配的模型部件,设定材料属性后进行网格化,获得三维有限元模型组件.将髋臼骨、软骨、盂唇和股骨头骨、软骨部件分别组装,定义股骨近端相对髋臼屈髋5°、外旋20°,以股骨头中心施加垂直向上应力400 N,分析验证其软骨部位的应力分布.结果 采用实体加减法获得的组件在ABAQUS分析系统中装配准确,骨、软骨和盂唇连接界面未出现影响应力分析的间隙或实体重叠,网格化过程顺利.获得的软骨及盂唇接触区域的应力分布、软骨应力集中区域与传统研究方法结果相近.结论 利用中国可视化人体数据库磨片能准确构建包括髋关节完整结构的三维有限元应力分析模型,并可避免其他构建方法无盂唇结构的缺陷.
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JAK2/STAT3信号通路参与脂多糖诱导小胶质细胞活化的研究
目的 研究蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子与激活子3(Janus kinase signal transducers 2 and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信号通路参与脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(MG)活化的影响及其可能机制.方法 用细胞免疫组织化学的方法观察小胶质细胞特异性标志物OX-42的变化,用ELISA方法检测LPS刺激后肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达变化.以及用Western blot方法检测JAK2和STAT3磷酸化变化水平.结果 LPS刺激后OX-42阳性细胞数显著增强,分泌大量的细胞因子TNF-α,JAK2和STAT3磷酸化水平显著升高,并被抑制剂AG490有效抑制.结论 JAK2-STAT3信号通路参与了LPS诱导的小胶质细胞活化.JAK2-STAT3通路激活与炎症因子分泌有关.
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乳酸-羟基乙酸共聚物缓释纳米微球的制备及体外释药评价
目的 以乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycohc acid),PLGA]为材料,制备缓释局麻药利多卡因(Lidocaine,LID)-PLGA长效缓释微球.方法 采用乳化溶媒挥发法制备微球;采用紫外分光光度法测定微球载药量、包封率和体外药物释放.结果 纳米微球形态光滑圆整,球体大小均匀,微球粒径为(174.5±15.2)nm,微球载药量和包封率分别为12.48%和54.30%,微球体外释放符合Higuchi方程,半衰期t1/2=3.45 d.结论 LID-PLGA纳米微球具有明显缓释作用.
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CEREC全瓷嵌体/高嵌体固定隐裂牙后抗折裂性能的实验研究
目的 研究CEREC全瓷嵌体/高嵌体对隐裂牙的固定效果并测试抗折裂性能.方法 将测试的离体牙分成A、B 2组,A组为对照组,B组为实验组,每组各15个,分别制备成模拟隐裂牙;其中B组用CEREC全瓷嵌体/高嵌体固定,A组用光固化树脂充填,然后在万能测试机上垂直加载直至折裂进行抗折裂性能测试.结果 用CEREC全瓷嵌体/高嵌体固定的离体模拟隐裂牙抗折强度高于对照组牙齿.结论 CEREC全瓷嵌体/高嵌体可以有效固定隐裂牙.
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RNA干扰Hsp70基因表达抑制胃癌细胞增殖
目的 构建Hsp70的短发夹状RNA(shRNA),检测其在胃癌细胞株SGC-7901中对Hsp70基因表达的抑制作用以及对肿瘤细胞增殖的影响.方法 根据Hsp70编码基因,设计并合成2对反向重复序列,同时设计1对与目的 基因不相匹配的重复序列作为对照组分别定向克隆至载体pTZU6+1的U6转录启动子下,构建重组质粒phspl-siRNA,phsp2-siRNA及对照组质粒phsp3-siRNA,分别转染胃癌细胞株SGC-7901,采用RT-PCR和Western blot检测phsp-siRNA对Hsp70基因表达的抑制作用.利用AlamarBlue法检测转染后对胃癌细胞生长的影响.结果 酶切电泳分析和DNA测序证实重组质粒phsp-siRNA构建成功;证实phsp1-siRNA和phsp2-siRNA对内源性Hsp70基因的表达有明显的抑制作用,同时phsp1-siRNA和phsp2-siRNA转染组细胞的生长较对照组受到明显抑制.结论 构建的重组质粒phsp1-siRNA和phsp2-siRNA能特异而有效抑制内源性Hsp70基凶在SGC-7901细胞中的表达,并对细胞生长有明显抑制作用.
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氢质子MR波谱对脑结核瘤、胶质瘤及脑转移瘤的鉴别诊断价值
目的 探讨多体素二维氢质子MR波谱(2D proton magnetic resonance spectroscopy,2D1H-MRS)对脑结核瘤、高级别胶质瘤和脑转移瘤的鉴别诊断价值.方法 对16例脑结核瘤、15例高级别胶质瘤和21例脑转移瘤患者术前或接受治疗前行常规MRI和2D1H-MRS检查,1H-MRS采用点分辨表面线圈法(PRESS)序列(TR 1000 ms,TE 144 ms).统计分析3种疾病瘤体实质部分胆碱/肌酸(Cho/Cr)、且日碱/N-乙酰天门冬氨酸(Cho/NAA)、胆碱/对侧相应正常脑实质区肌酸(Cho/Cr-n)比值,记录3种疾病是否有脂质(Lip)或乳酸(Lac)峰出现.结果 脑结核瘤、高级别胶质瘤和脑转移瘤瘤体Cho/Cr比值分别为(1.90±0.85)、(3.84±2.23)和(3.78±2.38);Cho/NAA值分别为(1.80 4-0.95)、(3.94±2.52)和(3.18±2.40);Cho/Cr-n值分别为(0.97 4-0.11)、(2.71±0.56)和(2.42±0.54).Cho/Cr、Cho/NAA、Cho/Cr-n比值在3种疾病间两两比较有统计学差异(P＜0.05,P＜0.01).3种疾病瘤体Lip和Lac阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 多体素2D1H-MRS结合临床资料对脑结核瘤、高级别胶质瘤和脑转移瘤的鉴别诊断有一定的临床应用价值.
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人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶hAPE1融合蛋白的构建、纯化及其功能的初步研究
目的 构建人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(hAEP1)原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,对其活性进行初步分析.方法 用PCR法扩增hAEP1基因,克隆入pET28a载体中,获得重组质粒pET28a-hAPE1.将重组质粒转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定.用His亲和层析技术进行蛋白纯化,得到hAPE1融合蛋白.用Western blot及电泳迁移率变动分析实验分析hAPE1融合蛋白的抗原性及活性.结果 所构建的重组质粒pET28-hAPE1经双酶切及DNA测序鉴定表明构建正确.IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定均在预期位置出现阳性条带,His亲和层析纯化后得到hAPE1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确.Western blot及电泳迁移率变动分析实验证明hAPE1融合蛋白具有抗原性、AP修复及氧化还原活性.结论 成功构建了人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶的原核表达载体pET28a-hAPE1,并在E. coli BL21(DE3)中高效表达和纯化得到有抗原性及活性的hAPE1融合蛋白.
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伽玛刀治疗下丘脑错构瘤临床疗效分析
目的 探讨伽玛刀治疗下丘脑错构瘤的方法和效果.方法 对9例下丘脑错构瘤导致的痴笑癫痫患者进行了伽玛刀治疗,选用4、8 mm准直器,40%～55%等剂量曲线覆盖90%病灶,中心剂量28～40 Gy,边缘12～18 Gy,根据谭氏标准评价治疗结果.结果 没有伽玛刀治疗引起的并发症发生,随访24～54个月,7例有效,其中1例几乎不发作,3例癫痫很少发作,2例癫痫发作明湿减少,1例癫痫发作有减少,2例无效.结论 严格掌握适应证,伽玛刀治疗下丘脑错构瘤引起的癫痫有良好的治疗效果,是一种经济有效、副作用少的治疗技术.
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CTVC肠液标记的实验研究
目的 探讨实验条件下在CT仿真结肠镜(CT virtual colonoscopy,CTVC)的检查中引入肠液标记和CT"减影"的方法后,对息肉的检出率及大小有无影响;并确定佳的造影剂浓度和佳的观察窗.方法 选用新鲜离体猪结肠,人工制成3～10 mm的息肉模型,用生理盐水均匀混合阳性造影剂,制成CT值分别为200、400、600 HU和800 HU的肠液模型.在注入不同CT值肠液模型后,利用CT减影技术,分别于减影前、后对息肉大小进行测量,并与对照组相比较,分析不同观察窗和不同造影剂浓度对息肉大小测量的影响,以及对息肉检出能力的影响.结果 肠液标记佳造影剂CT值为800 HU;减影前佳观察窗为结肠窗(-150、1 500 HU)和骨窗(500、2 500 HU).结论 肠液标记与CT"减影"技术相结合可有效提高肠液掩盖下小息肉的检出率.
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慢性间歇性缺氧对大鼠学习记忆及海马CA3区GFAP表达的影响
目的 探讨慢性间歇性缺氧以及复氧对大鼠学习记忆功能及海马CA3区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响.方法 24只SD大鼠,分为空白组(UC组)、慢性间歇性缺氧组(CIH组)和复氧组(RH组),CIH组建立慢性间歇性缺氧模型,RH组前4周同CIH组,后4周正常饲养,所有大鼠在模型建立后进行Morris水迷宫测试后检测大鼠海马CA3区GFAP的表达.结果 ①Morris水迷宫逃避潜伏期成绩:CIH组＞RH组＞UC组(P＜0.01,P＜0.05);②穿越平台次数及跨越目标象限时间占整个游泳的时间百分率的比较:UC组＞RH组＞CIH组(P＜0.01,P＜0.05);③海马CA3区GFAP阳性产物COD值比较:CIH组＞RH组＞UC组(P＜0.01).结论 ①慢性间歇性缺氧可引起大鼠学习记忆功能的下降,复氧后大鼠学习记忆功能有所提高;②大鼠学习记忆功能的下降可能与海马CA3区GFAP的变化有关.
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基质金属蛋白酶-9基因多态性与食管鳞状细胞癌易感性的关联研究
目的 研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinsase-9,MMP-9)基因多态性与中国西南地区人群食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)的关联性.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms,PCR-RFLPs)方法检测235例食管鳞状细胞癌病例组及300例健康对照组的MMP-9 R279Q基因多态性的分布情况.结果 ESCC患病组和健康对照组MMP-9 279R、279Q等位基因频率分别为57.7%、42.3%和51.5%、48.5%,二者有显著性差异(X2=4.08,P=0.04);MMP-9 279R/R基因型频率在ESCC病例组(40.5%)中显著高于对照组(29.0%)(X2=20.08,P=0.01);当按年龄进行分层分析时,与Q/Q基因型相比,R/R基因型能明显增加50岁以下人群ESCC的发病风险(校正OR值为3.39,95%CI为1.23～9.29).结论 携带有MMP-9 279R等位基因的人群与ESCC易感性有显著关联性,MMP-9 279R/R基因型可增加患ESCC的风险.在中国西南地区人群中MMP-9 R279Q基因多态性可能是ESCC发生的危险因素之一.
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压电免疫传感器阵列检测尖吻蝮蛇毒的初步研究
目的 探讨以压电传感阵列技术榆测尖吻蝮蛇毒的可行性.方法 构建2×5的AT切向、基频10 MHz的石英晶体微阵列,将尖吻蝮蛇毒抗体巯基化,通过自组装技术固定在石英晶体金膜电极表面,检测不同浓度的尖吻蝮蛇毒标准液.结果 尖吻蝮蛇毒压电免疫传感器阵列上,适抗体固定浓度为3 μg/ml,尖吻蝮蛇毒与相应抗体反应时间为40 min,检测尖吻蝮蛇毒低浓度为0.1μg/ml,蛇毒浓度在0.1～4.0μg/ml范围时,与晶体频率变化之间呈良好的线性关系.结论 采用压电免疫传感器阵列检测尖吻蝮蛇毒响应特性良好,具有灵敏度高、操作简单、不需标记等优点,是实现快速仪器化检测蛇伤的可能途径.
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先天性幽门前瓣膜的超声诊断价值
目的 探讨超声检查在先天性幽门前瓣膜诊断中的价值.方法 分析幽门前瓣膜声像图特点,总结幽门前瓣膜声像图特征.结果 12例先天性幽门前瓣膜患儿中,超声能实时直观显示位于幽门窦部瓣膜样结构5例,其中合并幽门肌层肥厚性狭窄2例.余7例幽门部未发现异常瓣膜样结构及幽门肌层肥厚征象,但能观察到幽门梗阻征象:胃潴留、胃内容物通过幽门极缓慢或困难,动态观察4例可见胃-食管反流征象等超声表现.术后证实均为幽门前瓣膜,超声能直观显示瓣膜结构的5例,其瓣膜位于幽门窦部;不能直观显示瓣膜结构的7例,其瓣膜位于幽门管腔内,故超声能确切显示窦部的瓣膜,虽不能显示幽门管腔内的瓣膜,但能提示幽门梗阻存在.结论 超声诊断先天性幽门前瓣膜具有较高临床实用价值,可为临床术前术式选择提供可靠影像信息.
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CASK下调表达对人血管内皮细胞ECV-304增殖能力的影响
目的 建立CASK下调表达细胞株,研究钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium,calmodulin-associated serine/threonine kinase,CASK)下调表达对ECV-304细胞增殖能力的影响.方法 将包含针对CASK基因干扰siRNA片段的pGenesil-1-hCASK重组质粒转染人ECV-304细胞株,经G418加压筛选,成功筛选出CASK下调表达的细胞株.用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中CASK基因的表达水平.采用流式细胞技术、MTT法观察CASK下调表达对ECV-304细胞增殖能力的变化.结果 成功筛选出CASK下调表达ECV-304细胞株(siCASK细胞株),这些细胞在传代过程中绿色荧光蛋白能维持表达,细胞株中转染阳性率在90%以上;经蛋白免疫印迹法检测CASK表达明显降低;siCASK细胞株中G0/G1细胞比率下降,G2M期细胞比率明显上升,增殖指数明显提高,生长曲线左移.结论 成功建立了CASK下调表达的ECV-304细胞株,CASK下调表达可导致细胞增殖能力增强.
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粉防己碱对喉癌耐药细胞株Hep-2/ADM多药耐药逆转作用研究
目的 探讨天然有效成分粉防己碱(tetrandrine,TET)对喉癌耐药细胞株Hep-2/ADM的多药耐药逆转作用及其可能机制.方法 采用MTT法检测不同浓度粉防己碱对Hep-2/ADM细胞的增殖抑制效应,选取其无毒剂量;MTT法检测长春新碱(vineristine,VCR)对HEP-2和Hep-2/ADM细胞增殖的抑制作用及加用粉防己碱后的变化;采用流式细胞仪检测细胞内药物蓄积和外排程度以及细胞凋亡.结果 1.5μg/ml及更低浓度的粉防己碱对Hep-2/ADM细胞无明显细胞毒性作用.加入1.0μg/ml和1.5μg/ml粉防己碱后,Hep-2/ADM对VCR的耐药逆转倍数分别为1.72和2倍.1.5 μg/ml浓度的粉防己碱可提高VCR在Hep-2/ADM细胞内药物的蓄积,增强VCR诱导的Hep-2/ADM细胞凋亡.结论 粉防己碱可以部分逆转Hep-2/ADM细胞的多药耐药,随药物浓度增加,逆转效果有可能增强,其逆转机制可能与抑制P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)外排功能和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关.
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人Snail基因RNAi慢病毒载体对鼻咽癌5-8F细胞增殖和侵袭的影响
目的 构建人Snail基因慢病毒干扰载体及观察干扰前后对鼻咽癌5-8F细胞增殖和侵袭的影响.方法 设计Snail基因特异性RNAi靶序列,克隆至经双酶切后的plVTHM线性化载体,测序鉴定正确后,用病毒上清感染鼻咽癌细胞5-8F,流式细胞仪分选获得稳定干扰Snail基因的细胞亚系.荧光定量PCR检测mRNA表达情况;MTF法和体外侵袭实验分别测定对细胞增殖和侵袭的影响.结果 plVTHM-siSnail慢病毒干扰载体构建正确.荧光定量PCR结果表明分选后的细胞Snail mRNA水平表达显著降低.干扰后的细胞增殖减慢,穿透基膜的细胞数量减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 plVTHM-siSnail表达质粒可显著下调Snail基因在5-8F中的表达,在一定程度上抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.
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靶向STAT5的siRNA诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡
目的 采用RNA干扰技术阻断STAT5基因的表达,观察其对人肝癌SMMC-7721凋亡的影响.方法 构建3种靶向STAT5的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,采用LipofectamineTM2000转染肝癌细胞SMMC-7721;分别采用半定量RT-PCR、Western blot技术检测转染前后SMMC-7721细胞STAT5 mRNA和蛋白质表达的变化;采用透射电镜技术观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 3条靶向STATS的序列特异性的siRNA可以有效地抑制SMMC-7721细胞STATS mRNA和蛋白质表达,STAT5 mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,STAT5蛋白表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%;转染靶向STAT5的siRNA真核表达载体48 h后出现凋亡细胞的典型形态学变化,并诱导25.61%的SMMC-7721细胞发生凋亡.结论 靶向STAT5的siRNA真核表达载体可以有效、特异地阻断SMMC-7721细胞STAT5基因的表达,并能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,STAT5 siRNA在人肝癌的基因治疗中可能具有潜在的应用价值.
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人非小细胞肺癌与外周血淋巴细胞表达ERCC1的相关性研究
目的 探讨切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementation group 1,ERCC1)在人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer NSCLC)癌组织和外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)中的表达及其相关性,以期建立临床实用简便的肿瘤学指标.方法 采用间接二步法免疫荧光化学染色检测47例Ⅱ期、Ⅲ期NSCLC患者癌组织和PBL中ERCC1的表达及健康人PBL中ERCC1的表达.结果 ERCCI在癌组织、NSCLC患者PBL和健康人PBL中的表达分别为53.19%(25/47)、48.94%(23/47)和20%(4/20),其中癌组织的ERCC1表达与NSCLC患者PBL的表达呈正相关,20例健康人PBL的ERCC1表达阳性率显著低于NSCLC患者.ERCC1的表达与临床病理类型无关.结论 检测NSCLC患者PBL的ERCC1表达可间接反应癌组织的ERCC1表达状况.
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院前心电图对ST段抬高心肌梗死患者进门至球囊扩张时间的影响
目的 探讨院前心电图对进行直接经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗的ST段抬高心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者进门至球囊扩张时间的影响.方法 对2006年1月至2006年12月间就诊于北京安贞医院抢救中心进行直接PCI的STEMI患者的临床资料进行回顾性分析.根据是否有院前心电图将患者分为2组:心电图组和无心电图组.主要分析指标:进门至球囊扩张时间.次要分析指标:住院期间病死率.结果 研究期间共入选147例患者,其中有院前心电图者92例(62.6%),进门至球囊扩张时间为(92±17)min;无院前心电图者55例(37.4%),进门至球囊扩张时间为(110±33)min,2组相比有统计学差异(P＜0.01).心电图组进门至球囊扩张时间＜90 min的患者显著多于无院前心电图组,分别为42%和23%(P＜0.01).有院前心电图者中以抢救车就诊的患者比例显著高于无心电图者,2组分别为95%和3%(P＜0.01).2组患者住院期间病死率无统计学差异(P＞0.05).结论 院前心电图可以显著缩短ST段抬高心肌梗死患者进门至球囊时间,但目前院前心电图完成率较低,有待进一步改善.
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三维立体培养SD大鼠骨髓间充质干细胞的研究
目的 建立三维立体培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的方法.方法 分离SD大鼠胫骨、股骨,冲洗骨髓腔,通过密度梯度离心并结合贴壁法培养BMSCs,流式细胞仪检测其生长周期,电子显微镜观察其内部结构,免疫细胞化学法进行细胞表面抗原标志物鉴定.后将其接种到细胞外基质(extracellular matrix,ECM)胶中,加入DMEM-F12细胞培养液进行三维立体培养.结果 培养的细胞呈梭形,成纤维细胞样,单核,增殖能力强.流式细胞术显示93.10%细胞处于G0～G1期.透射电镜结果显示细胞核质比例较大,核仁大而明显,细胞表面有较多微绒毛,细胞质细胞器丰富,表现出未分化细胞的特征.免疫组织化学结果显示细胞表达波形蛋白(vimentin)、纤维连接蛋白(fibronectin),不表达角蛋白(keratin).BMSCs在ECM胶中生长良好.结论 分离、培养的细胞为骨髓BMSCs,在三维培养体系中生长良好.
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重组PinX1真核表达载体的构建及其对胃癌MKN28细胞增殖的抑制作用
目的 探讨PinX1基因对胃癌MKN28细胞生长及周期的作用,初步探讨该基因用于胃癌治疗方面的可能性.方法 构建重组PinX1真核表达载体,酶切及测序鉴定无误后,应用脂质体转染法转染入胃癌MKN28细胞,建立稳定转染PinX1基因的MKN28细胞系;应用Western blot技术从蛋白水平检测转染前后目标蛋白PinX1的改变;MTT法检测转染前后细胞生长曲线的变化;流式细胞仪检测转染目的 基因后细胞生长周期的改变.结果 成功构建重组PinX1真核表达载体;建立了稳定转染入PinX1基因的胃癌MKN28细胞系;转染PinX1基因后,胃癌细胞细胞生长明显减缓(P＜0.05),增殖变慢(P＜0.05),细胞生长阻滞于G0/G1期.结论 PinX1基因可抑制胃癌MKN28细胞的生长和增殖.
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Pten基因对小鼠胚胎成纤维细胞中Cu/Zn-SOD基因表达的调控
目的 研究Pten基因对抗氧化蛋白Cu/Zn-SOD基因表达的调控,初步探索其调控机制.方法 运用Northern blot比较Pten+/-MEFs与Pten-/-MEFs细胞中基础Cu/Zn-SOD mRNA表达差异,以及0.1 mmol/L H2O2诱导后Pten+/-MEFs与Pten-/-MEFs细胞中Cu/Zn-SOD mRNA表达差异;运用Western blot分析P13K/AKT通路抑制剂LY294002作用Pten-/-MEFs细胞不同时间(30 min,1、2、6、24 h)后,与空白Pten-/-MEFs细胞相比,磷酸化AKT及Cu/Zn-SOD蛋白表达变化;利用Northern blot分析LY294002作用Pten-/-MEFs细胞30 min,1、2、6、24 h后,与空白Pten-/-MEFs细胞相比,Cu/Zn-SOD mRNA表达变化.结果 Pten-/-MEFs细胞中,基础Cu/Zn-SOD mRNA表达水平降低,H2O2诱导的Cu/Zn-SOD mRNA表达明显受到抑制;在LY294002作用Pten-/-MEFs细胞30 min时,AKT磷酸化水平明显降低,2 h时基本没有表达;与此对应,在LY294002作用Pten-/-MEFs细胞30 min时,Cu/Zn-SOD蛋白及mRNA表达均增强,并持续增强至24 h.结论 小鼠胚胎成纤维细胞中,Pten基因可通过拮抗PI3K/AKT信号通路调控Cu/Zn-SOD蛋白及mRNA的表达.
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缺氧诱导因子-1α在紫绀型先心病患儿心肌中的表达
目的 探讨紫绀型先心病患儿心肌细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白和mRNA的表达和意义.方法 入选进行手术矫治的先心病患儿28例,其中紫绀型先心病患儿16例,非紫绀型先心病患儿12例.取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,采用Western blot和RT-PCR分别检测HIF-1α蛋白及mRNA在心肌组织中的表达情况,并用免疫组化染色检测HIF-1α在心肌细胞中的分布.结果 紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P＜0.01);与非紫绀组相比,紫绀组患儿HIF-1α蛋白表达明显增高(P＜0.001),而mRNA表达无统计学意义(P＞0.05).免疫组化结果表明,HIF-1α主要分布在心肌细胞细胞质中,在细胞核内也有分布.结论 在紫绀型先心病患儿心肌细胞中,HIF-1α表达增加,HIF-1α可能参与慢性缺氧状态下心肌代谢的适应性调节.
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红霉素体外诱导肺炎链球菌耐药的研究
目的 通过体外诱导获得肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)耐药菌株,对比分析S.pn诱导耐药前后红霉素结合域的变异.方法 采用低抑菌浓度(MIC)递增方法对S.pn标准菌株tigr4、tigr2 临床分离敏感株进行红霉素体外诱导耐药,PCR与RT-PCR对诱导前后rplD、rplV基因以及23S rRNA扩增并测序,CPHmodels-2.0蛋白质空间构象预测系统对诱导前后rplD、rplV基因编码的核糖体蛋白L4和L22进行空间构象预测分析.结果 诱导后tigr4 MIC由0.031 2 mg/L增加到256 mg/L,而临床分离敏感株MIC均由0.031 2 ms/L增加到32 ms/L.诱导前后测序结果对比显示标准菌株tigr4核糖体蛋白L4发生V32A变异,L22发生D35G变异,而临床分离敏感株核糖体蛋白L4发生Q67R、K68E变异.空间构象分析L22的D35G及L4的Q67R、K68E变异导致其相应的表面空间构象发生明显改变.结论 S.pn可通过红霉素体外诱导而导致耐药,其耐药机制与红霉素结合域发生新的变异有关.
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重组人睫状神经因子的表达、纯化以及聚乙二醇修饰
目的 研究重组人睫状神经因子(rh-CNTF)的表达、纯化及聚乙二醇化修饰、纯化方法.方法 重组人睫状神经因子(rh-CNTF)工程菌经37℃培养至对数生长期,加入IPTG诱导4 h,经Q Sepharose F.F凝胶柱纯化和复性后得到纯化的rh-CNTF.以体外培养鸡胚背根神经节(DRG)方法测定重组蛋白rh-CNTF的神经营养活性.用单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-ButyrALD-20 k)对rh-CNTF进行修饰,所得修饰产物经DEAE Sepharose F.F和Superdex 75凝胶分离纯化后获得mPEG-rh-CNTF偶联物.结果 目的 蛋白占总蛋白30%左右,为包涵体,经Q Sepharose F.F凝胶柱纯化和复性,获得纯度达90%的rh-CNTF.表达的rh-CNTF能促进培养的鸡胚背根神经节神经突起的生长.修饰后的单聚PEG-rhCNTF经DEAE Sepharose F.F和Superdex 75凝胶纯化后纯度达到95%.结论 确立了rh-CNTF蛋白表达纯化及PEG修饰的方法.
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shRNA抑制Smad3基因的表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7表达的影响
目的 构建抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloidfibroblast,KFB)Smad3基因表达的shRNA真核表达载体.研究Smad3 shRNA对KFB Smad7表达的影响.方法 用前期实验筛选出的1对有效siRNA重组构建Smad3 shRNA表达质粒.通过脂质体介导的方法,将Smad3 shRNA转染到KFB,用RT-PCR及Western blot的方法检测Smad3、Smad7在不同时间点(0～9 d)表达的变化.结果 ①RT-PCR和Western blot的结果证实Smad3 shRNA载体构建成功.②转染Smad3 shRNA后,随着时间的延长,KFB中Smad3的mRNA与蛋白表达都显著减低,到72 h作用强.光密度分析与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Smad7的mRNA与蛋白表达都明显升高(P＜0.05).结论 体外构建的shRNA-Smad3 RNAi真核表达载体能显著抑制KFB Smad3的表达.Smad3可能对Smad7起反向调节的作用.
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周细胞在创面修复早期血管生成中的分布与意义
目的 研究周细胞在创面修复肉芽组织血管生成过程中出现、分布规律与意义.方法 采用常规免疫组化、双重免疫组化染色,电镜技术及形态定量分析方法观测小鼠皮肤全层切割伤模型(1～9 d),特别是早期1、3、5、7 d创面修复肉芽组织内血管生成过程中,周细胞的出现、分布规律.离体采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导分化的周细胞前体细胞10T1/2模型,观察其在细胞外基质胶立体培养的变化.结果 周细胞可见于肉芽组织血管生成早期(1～7 d),且周细胞阳性染色的细胞数较内皮细胞多.肉芽组织内毛细血管和周细胞的数量在伤后持续增加,直到伤后5 d达峰值.周细胞在肉芽组织中还可形成条索状、腔样结构;离体培养的周细胞在细胞外基质胶内能够形成管腔样结构.结论 周细胞参与了肉芽组织早期血管生成过程并可形成腔样结构,可能在血管生成中具有主导或引导作用.
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经颞下入路治疗中后颅窝三叉神经鞘瘤3例
三叉神经鞘瘤(trigeminal neurinomas,TN)为颅内少见良性肿瘤,因其位于颅底,且可以向后颅窝发展,形成跨中后颅窝的哑铃状肿瘤,手术入路多、难度大、并发症较多,但如能手术全切,患者可获治愈[1].
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小肠嵌入移位节育环致闭袢绞窄性肠梗阻1例
肠梗阻原因很多,小肠嵌入节育环致急性闭袢性肠梗阻罕见,我院于2008年3月27日诊治1例节育环移位腹腔致急性绞窄性肠梗阻,报告如下.
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鼻咽部鳞状细胞癌侵犯眼眶及表现为眶尖综合征1例
鼻咽部鳞状细胞癌侵犯眼眶并表现为眶尖综合征是一种罕见的临床表现.我院2008年1月20日收治1例,报告如下.1 临床资料患者,男性,45岁.2个月前在当地医院拔牙后出现左侧颧面部红肿疼痛,给予抗生素治疗后疼痛症状无明显好转,左眼视力逐渐下降,10 d前左眼眶周疼痛加重、眼球突出、视物不见.
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孕36周合并晚期胆囊癌1例
患者,32岁,因孕36周,右上腹痛3+月,发现右上腹包块2+月,于2009年2月14日入西南医院妇产科.末次月经2008年6月7日,预产期2009年3月14日,孕4产2.2008年11月感右上腹痛,外院CT检查:胆囊区及其下方混杂密度肿块占位,以胆囊癌并周围组织广泛侵犯可能性大.
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开设乳腺疾病护理门诊的实践探讨
为顺应患者需求,拓展护理服务内涵,切实体现以患者需求为导向,给患者及家属提供科学、系统、专业的护理指导,尤其是为出院患者提供后续护理服务[1],依托我院高层次的护理人才资源平台,经过充分准备,我院于2008年12月22日推出首个护理门诊--乳腺疾病护理门诊.
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神经内镜治疗有症状的儿童颅内蛛网膜囊肿的疗效分析
我院于2001年3月至2007年12月应用神经内镜行有症状的儿童颅内蛛网膜囊肿(intracranial arachnoid cyst,IAC)脑池或脑室造瘘术17例,取得较好的近期疗效.
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21例腹腔镜肝切除术的围手术期护理
肝脏由于质地脆而易碎,血供丰富,腔镜下手术显露、止血困难,操作难度大等因素,被认为是腹腔镜外科的后禁区[1].我院腹腔镜肝胆胰外科技术中心自2007年3月1日至6月30日,对病变位于肝脏不同部位的21例患者施行了电视腹腔镜下肝切除术[2],现将围手术期护理体会报告如下.
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头高15°倾斜位与平卧位吸氧去氨耐缺氧效果的比较
本研究采用头高15°倾斜位和平卧位2种体位进行吸氧去氮,探讨不同体位对患者呼吸暂停安全时限[1]的影响,寻求全麻诱导插管期间提高患者氧储备和降低麻醉风险的可行办法.
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老年下颈椎骨折45例手术治疗
老年下颈椎骨折由于退变及伴发疾病,其手术治疗的难度比青壮年同类病变大[1].我科白1999年12月至2007年12月采用手术治疗颈椎骨折45例,报告如下.
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某兵站部官兵健康状况调查
2008年10月24日至11月18日,我院医疗队为某兵站部官兵进行了健康体检,获得了1份全面、详实的体检数据.总结报告如下.1 资料与方法1.1 体检对象为驻扎在川藏公路沿线的兵站部基层官兵2 441人.驻地海拔在550～680 m的2 272人;在1 230 m的26人;在2 700～3 500 m的143人.其中男性2 394人,女性47人;年龄19～45岁,平均26.5岁.
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双眼先天性虹膜缺失伴白内障一家系临床分析
无虹膜症是一种少见的先天性虹膜缺失,由Arrafa首次报道.国内普查群体发病率为1:133 931,通常为常染色体显性遗传,外显率较高,该病患者通常表现为先天性无虹膜或虹膜组织高度发育不良,主要症状除明显畏光外,常有显著视力减退、弱视和眼球震颤,约2/3患者有家族史,余1/3患者为散发病例[1].
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22例手部放射性损伤患者临床治疗观察
目的 总结22例手部放射性皮肤损伤的临床治疗经验.方法 清创后游离皮片移植、局部皮瓣转移或带蒂皮瓣转移修复创面,术后辅以康复治疗.结果 移植的皮片、皮瓣19例甲级愈合,3例给予二期手术后愈合,手部外形及功能恢复良好.结论 对手部慢性放射性损伤,宜及早进行手术,术后配合康复治疗可有效提高及改善手部功能.
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小儿肾积水尿EGF、MCP-1水平的检测及意义
目的 通过检测小儿肾积水肾盂尿表皮生长因子(EGF)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平,以探讨其与病肾损害程度的关系.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测51例小儿肾积水病肾尿EGF、MCP-1水平,并测定肾盂尿肌酐(Cr),计算尿.EGF/Cr、MCP-1/Cr比值,健肾尿检测值作对照;同时以病肾组织的病理分级(按Elder等标准分为Ⅰ～Ⅴ级)为标准,对病肾尿EGF/Cr、MCP-1/Cr进行分组,并作统计学分析.结果 ①病肾尿EGF/Cr较健肾低,Ⅱ～Ⅴ级病肾尿EGF/Cr与健肾比较差异有统计学意义(P＜0.01),但在Ⅱ、Ⅲ级及Ⅲ、Ⅳ级间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②病肾尿MCP-1/Cr较健肾高,Ⅱ～Ⅴ级病肾尿MCP-1/Cr与健肾比较差异有统计学意义(P＜0.01),且在各病理分级组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01).③病肾尿MCP-1/Cr、EGF/Cr与病肾组织损害程度均相关,其中尿EGF/Cr与病理分级负相关(r=-0.615,P＜0.05);尿MCP-1/Cr与病理分级显著正相关,相关系数r=0.824.(P＜0.01).结论 小儿肾积水病肾尿EGF+Cr检测部分反映病肾的损害程度;而病肾尿MCP-1/Cr水平检测能完全反映病肾的损害,可作为术前经尿液检测评定病肾损害程度的简单、可靠方法之一.
