二氢杨梅素激活磷酸腺苷活化蛋白激酶抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 探讨二氢杨梅素对高糖诱导血管内皮细胞凋亡的影响及其与磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的关系.方法 体外培养原代人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为正常对照组(5.56 mmoL/L葡萄糖)、高糖处理组(33.36 mmol/L葡萄糖)、甘露醇高渗对照组(5.56 mmol/L葡萄糖+27.8 mmol/L甘露醇)、AMPK激动剂5-氨基咪唑4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(5-Aminoimidazole-4-carboxamide-1-β-D-ribofuranoside,AICAR)(10 nmol/L)+高糖处理组、二氢杨梅素(1μmol/L)+高糖处理组、AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L) +AICAR+高糖处理组和AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L)+二氢杨梅素+高糖处理组.处理36 h后,CCK-8法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)和p-ACC蛋白水平.结果 与正常对照组比较,高糖处理组细胞活力明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),p-AMPK、p-ACC水平显著降低(P＜0.05);二氢杨梅素或AICAR预处理均明显抑制高糖诱导的HUVECs细胞活力下降、细胞凋亡增加和p-AMPK、p-ACC水平降低(P＜0.05);Compound C预处理明显抑制AICAR和二氢杨梅素对高糖诱导HUVECs细胞凋亡的保护作用(P＜0.05).结论 二氢杨梅素通过促进AMPK活化抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡.

Rab25在非小细胞肺癌厄洛替尼获得性耐药中的作用

目的 探讨Rab25在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)厄洛替尼获得性耐药中的作用.方法 传代培养PC9及其厄洛替尼耐药PC9/ER细胞,采用CCK-8法检测PC9/ER细胞的耐药指数.应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qPCR)及Western blot检测对比同等厄洛替尼浓度(0.1、0.2、0.3 μmol/L)处理条件下,Rab25在两种细胞中的mRNA及蛋白表达差异,并以免疫荧光法定位Rab25在细胞中的分布.用小干扰RNA(siRab25)转染PC9/ER细胞,并以流式细胞仪及CCK-8法分别检测Rab25敲减后PC9/ER细胞的增殖指数(proliferation index,PI)及厄洛替尼IC50值的变化.结果 PC9/ER细胞的耐药指数是68.82 ±21.42.相同厄洛替尼浓度处理48 h后,PC9/ER细胞Rab25 mRNA及蛋白水平均高于PC9细胞(P＜0.05),增高的Rab25蛋白主要表达于细胞膜.而且PC9/ER细胞Rab25蛋白水平随厄洛替尼处理浓度(0.1、0.2、0.3 μmol/L)递增而增高.siRab25在PC9/ER细胞中成功转染后,转染组的厄洛替尼IC50值及PI均明显低于对照组(P＜0.05).结论 Rab25在NSCLC厄洛替尼获得性耐药细胞中高表达,起着促进耐药的作用.

雌激素受体α在胰岛素致动脉粥样硬化中的作用

目的 探讨在胰岛素诱导动脉粥样硬化发生的过程中,雌激素受体α(estrogen receptor α,ER-α)的作用.方法 ①8周龄Apoe/Lepr基因双敲小鼠按随机数字表法分为对照组和实验组(4 IU胰岛素组),每组4只.HE染色及免疫组化观察小鼠血管动脉斑块形成及α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin-α,α-SMA)、ER-α的表达.②用胰岛素及甲基化转移酶抑制剂干预大鼠血管平滑肌细胞,采用RT-PCR及Western blot检测DNA甲基化酶、ER-α的表达,划痕实验及流式细胞仪检测ER-α对血管平滑肌细胞增殖的影响.结果 ①实验组小鼠血管出现动脉斑块,免疫组化结果显示α-SMA、ER-α表达降低(P＜0.05).②与对照组比较,胰岛素处理后血管平滑肌细胞中DNA甲基化酶的mRNA与蛋白表达升高(P＜0.01),而ER-α表达下降(P＜0.01),甲基化酶抑制剂可以消除这种差异,高表达ER-α后,划痕实验及流式细胞仪检测结果显示血管平滑肌细胞增殖减慢(P＜0.05).结论 胰岛素通过促进DNA甲基化酶的表达,诱导ER-α基因甲基化,使ER-α表达下降,终导致动脉粥样硬化的发生.

脱氧胆酸通过KLF4上调CDX2的表达促进Barrett食管形成

目的 探讨在脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)诱导Barrett食管(Barrett's esophagus,BE)形成中,Krüppel样锌指转录因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)与同源异型框转录因子2(caudalrelated homeodomain transcription factor 2,CDX2)的作用.方法 采用免疫组化S-P法检测49例人正常食管组织和22例BE组织中KLF4、CDX2的表达;体外培养Het-1A细胞,依据DCA处理时间分为0h组(未经DCA处理)、4h组、8h组、12 h组并进行DCA处理.分别设置空白对照组、阴性siRNA对照组、阴性siRNA +DCA处理12 h组、KLF4-siRNA干扰组、KLF4-siRNA干扰+DCA处理12 h组,进行相应处理.设置空白对照组、阴性病毒对照组、阴性病毒+DCA处理12 h组、KLF4过表达病毒组,进行相应处理.待上述各实验组处理结束后,运用Real-time PCR、Western blot检测各组KLF4、CDX2、MUC2mRNA及蛋白的表达.结果 免疫组化检测发现:在22例BE组织中,KLF4阳性表达15例,阳性率68.18％,阳性染色主要集中在细胞核;CDX2阳性表达16例,阳性率72.73％,阳性染色也主要集中在细胞核.与人正常食管鳞状上皮组织比较,BE组织中KLF4、CDX2表达均增高(x2=18.642,P＜0.05;x2=23.678,P＜0.05).Real-time PCR及Western blot检测结果显示:随DCA处理时间的增加,Het-1A细胞KLF4、CDX2、MUC2的表达逐渐升高(P＜0.05);KLF4-siRNA干扰组及KLF4-siRNA干扰+DCA处理12 h组中,KLF4、CDX2、MUC2表达均下调,且不再随DCA处理的刺激而升高(P＜0.05);此外,阴性病毒+DCA处理12 h组及KLF4过表达病毒组中,KLF4、CDX2、MUC2表达均上调,且KLF4过表达病毒组3个基因蛋白表达上调更为显著(P＜0.05).结论 DCA通过KLF4上调CDX2,间接引起BE标志性分子MUC2的表达上调,从而促进正常食管上皮向BE转化.

人非小细胞肺癌NCI-H3122克唑替尼耐药细胞株的构建及耐药相关miRNAs的初步筛选

目的 建立对克唑替尼耐药的非小细胞肺癌细胞株,并对其耐药性进行鉴定,初步筛选耐药相关的miRNAs.方法 采用克唑替尼药物浓度递增的方法建立人耐药细胞株NCI-H3122CR,并通过细胞生长曲线、药物敏感性、细胞凋亡和细胞周期的检测评价NCI-H3122CR细胞株的耐药性.第二代基因测序法和RT-PCR检测耐药后microRNA表达量的变化.结果 成功建立了克唑替尼耐药细胞株H3122CR,耐药指数为9.86.流式细胞仪检测结果显示H3122CR细胞凋亡率比H3122细胞低,并呈现浓度依赖性的趋势.耐药细胞株的细胞周期分布产生了显著的变化.当前的第二代测序和RT-PCR检测结果显示:miR-30a-5 p、miR-374c-5p和miR-125b-5p表达上调,miR-31-5p、miR-10a6p和miR-200c-3p表达下调.结论 构建的H3122CR耐药细胞模型对克唑替尼有一定的耐药性,并且耐药后部分miRNAs表达量产生显著的变化.

BMPs-ERK5信号通路调控人牙周膜干细胞成骨分化的研究

目的 比较骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)2、7、9对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化的诱导作用,探讨BMPs-ERK5信号通路在成骨分化中的作用.方法 首先采用组织块酶消化法分离培养原代hPDLSCs并鉴定,利用腺病毒载体介导的GFP、BMP2、BMP7和BMP9(Ad-GFP、Ad-BMP2、Ad-BMP7、Ad-BMP9)分别感染hPDLSCs,通过早期成骨分化指标碱性磷酸酶活性定性和定量检测、茜素红染色检测晚期成骨分化指标钙盐结节沉积情况、qRT-PCR检测细胞成骨分化相关基因骨钙蛋白和骨桥蛋白mRNA表达,比较发现BMP9对细胞成骨分化的作用强;采用Ad-BMP9感染hPDLSCs 24 h后,检测BMP9作用PDLSCs后对ERK5磷酸化水平的影响和ERK5信号通路特异性抑制剂BIX02189预处理后BMP9-ERK5通路对hPDLSCs成骨分化的影响.结果 ①分离培养的hPDLSCs为成纤维细胞样,呈漩涡状生长,抗波形蛋白表达阳性,抗角蛋白表达阴性,具有间充质属性和克隆形成能力.②BMP2、BMP7和BMP9均有促进细胞成骨分化作用,其中3组的碱性磷酸酶定量结果和成骨分化相关基因相对表达量与GFP组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05),且BMP9效力强.③Western blot检测显示BMP9增强p-ERK5的表达.而抑制剂BIX02189呈剂量依赖性地抑制p-ERK5的表达.BIX02189预处理细胞后、感染Ad-BMP9的结果显示,BMP9对细胞的促成骨作用较未处理组明显降低,其中BMP9组的碱性磷酸酶定量分析结果与成骨分化相关基因相对表达量与BIX02189处理组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 BMP9具有较强的促hPDLSCs成骨分化作用,ERK5信号转导途径在BMP9诱导hPDLSCs成骨分化过程中发挥了正向调节作用.

JMJD2B对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响

目的 探讨组蛋白去甲基化酶JMJD2B(Jumonji domain-containing protein 2B)小干扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响.方法 采用免疫组化和细胞免疫荧光的方法检测JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌组织和A431细胞中的表达,转染JMJD2B siRNA至A431细胞株,分别采用CCK-8、克隆形成实验、流式细胞仪、Transwell法检测细胞增殖、克隆、周期分布、凋亡、迁移及侵袭情况.结果 JMJD2B在肿瘤组织中的表达高于正常皮肤.与未转染组和转染对照组比较,JMJD2B siRNA转染组增殖、克隆、迁移及侵袭能力显著受抑,肿瘤细胞发生G1期阻滞,细胞凋亡比例增加(P＜0.05).结论 JMJD2B在人皮肤鳞状细胞癌中呈高表达,JMJD2B siRNA能促进A431细胞的凋亡,同时也抑制了肿瘤细胞的增殖、克隆、迁移以及侵袭的能力.

丙泊酚对发育期小鼠大脑梨状皮层神经前体细胞增殖的影响

目的 探讨丙泊酚对新生小鼠大脑梨状皮层神经前体细胞增殖的影响.方法 选取健康同窝、日龄为7 d(P7)的C57小鼠15只,按照随机数字表法分为3组:对照组,丙泊酚低剂量(30 mg/kg)组,丙泊酚高剂量(60 mg/kg)组,所有小鼠从P7开始接受药物处理.高、低剂量组分别腹腔注射丙泊白酚60、30 mg/kg,对照组腹腔注射相同体积10％脂肪乳.药物处理后24 h(P8)腹腔注射BrdU 50 mg/kg,2h后取材,采用免疫组织化学法检测梨状皮层细胞增殖标记物BrdU、Sox2及神经干细胞纤维突起标记物Nestin的表达.结果 与对照组(42.67±2.41)比较,丙泊酚低剂量组(33.84±1.33)及高剂量组(25.17 ±1.73)新生小鼠大脑梨状皮层中BrdU+细胞数量明显减少;与低剂量组比较,高剂量组BrdU+细胞数量减少更明显(P＜0.05);免疫组化结果显示:丙泊酚低剂量组Sox2标记的神经祖细胞数(558.94±29.85)较对照组(618.67 ±24.01)差异无统计学意义(P＞0.05),但丙泊酚高剂量组(430.83±29.23)较对照组、丙泊酚低剂量组均减少(P ＜0.01,P＜0.05).丙泊酚低剂量组(24.73±0.69)与对照组(34.81±2.56)比较,BrdU-Sox2双标阳性细胞数量差异无统计学意义(P＞0.05);但丙泊酚高剂量组(12.48±0.80)较对照组及丙泊酚低剂量组均减少(P＜0.01,P ＜0.05).免疫荧光染色结果显示:与对照组(1.00±0.00)比较,丙泊酚低剂量组(0.65±0.07)及高剂量组(0.60±0.08) Nestin标记的神经干细胞纤维突起灰度值降低,纤维分布稀疏且排列紊乱(P＜0.01).结论 丙泊酚可抑制新生小鼠大脑梨状皮层神经前体细胞增殖,并呈一定剂量相关性.

孤儿受体ROR2诱导慢性髓细胞白血病细胞株K562凋亡的研究

目的 研究ROR2抑制慢性髓细胞白血病细胞株K562增殖并诱导其凋亡的作用,初步探讨可能的机制.方法 采用重组ROR2腺病毒(AdROR2)感染K562细胞为实验组,重组RFP腺病毒(AdRFP)感染K562细胞为对照组.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡.Western blot检测实验组和对照组促凋亡基因caspase3和抗凋亡基因survivin的表达.结果 与对照组比较,实验组ROR2感染K562细胞48 h后,细胞增殖明显受抑(P＜0.05),细胞周期主要阻滞在G2/M期(P＜0.05),细胞凋亡增多,48 h凋亡显著(P＜0.05),同时促凋亡蛋白caspase3表达升高(P＜0.05),抗凋亡蛋白survivin表达下降(P＜0.05).结论 过表达ROR2能够抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调了促凋亡蛋白caspase3和下调了抗凋亡蛋白survivin表达有关.

二氯乙酸盐通过促进Mcl-1降解诱导宫颈癌细胞凋亡

目的 探讨二氯乙酸盐(dichloroacetate,DCA)对官颈癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制.方法 采用CCK-8法检测DCA对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;流式细胞仪检测DCA对HeLa细胞凋亡的影响;Westem blot检测DCA对HeLa细胞凋亡相关蛋白PARP(poly ADP-ribose polymerase)和Mcl-1(myeloid cell leukemia-1)水平的影响.结果 与对照组比较,DCA处理可显著抑制HeLa细胞增殖(P＜0.01)、促进细胞凋亡(P＜0.01)、升高剪切型PARP(cleaved PARP)蛋白的水平、下调凋亡抑制蛋白Mcl-1的表达.DCA对HeLa细胞Mcl-1蛋白的下调作用可被蛋白酶体抑制剂MG132所抑制,但不能被蛋白翻译抑制剂放线菌酮(cycloheximide,CHX)所抑制.结论 DCA促进宫颈癌细胞凋亡的作用可能与其促进蛋白酶体降解Mcl-1有关.

一种改进的肾透明细胞癌原代细胞培养方法

目的 对肾透明细胞癌原代培养方法进行改进,以获得纯度及活力更高、遗传表型与来源更相近的肾透明细胞癌细胞系.方法 将经过胶原酶消化法或机械法取得的肿瘤样本单细胞悬液,置入超低黏附培养板,用添加有丝分裂原等细胞因子的无血清培养基悬浮培养,离心滤除非肿瘤细胞和无成瘤能力肿瘤细胞,获得纯度高、异质性的肿瘤细胞囊球,囊球可以连续传代悬浮培养,也可转至常规培养条件培养,都可得到能连续传代的肿瘤细胞株.用流式细胞仪鉴定瘤球传代细胞,并与肾癌临床样本细胞进行表型比对.结果 与单纯机械法或胶原蛋白酶消化法分离细胞及含血清培养基培养的方法相比,本法成功率更高,获得的肾透明细胞癌细胞保持与临床样本相似的异质性分化类型和表面抗原表达,并且无杂细胞污染.培养的细胞可经历稳定的连续传代并用于肿瘤相关研究.结论 该方法简便易行,成功率高,培养的肾透明细胞癌细胞株可作为肾癌研究的良好实验模型.

人肺癌H1299肿瘤干细胞样细胞的分离培养及鉴定

目的 从人肺癌H1299细胞系中分离培养肺癌干细胞样细胞,并进一步鉴定其干细胞特性.方法 在低黏附条件下无血清诱导培养H1299细胞,富集H1299肿瘤细胞球,利用免疫荧光、流式细胞仪、PCR及Western blot检测干性标志物CD133和ABCG2的表达,并观察克隆形成和体内致瘤能力的改变.结果 肺癌H1299细胞经无血清诱导培养可形成悬浮的细胞球.与普通贴壁H1299细胞相比,细胞球具有更强的增殖能力和致瘤性,且高表达干性基因CD133和ABCG2,差异有统计学意义(P＜0.0S).结论 运用无血清悬浮细胞球培养方法富集的肺癌H1299细胞系肿瘤球高表达CD133和ABCG2,具有干细胞特性.

哮喘患者治疗前后血循环中嗜酸性粒细胞微粒的变化

目的 初步探讨哮喘患者治疗前后血循环中嗜酸性粒细胞微粒的变化,分析其数目变化与治疗疗效之间可能的关系.方法 按照人组标准纳入研究对象共57例,其中哮喘患者32例,健康志愿者25例,采集外周静脉血,将所采集的样本进行离心处理后,用相应抗体标记,应用流式细胞仪检测每100 μL外周血上清液中嗜酸性粒细胞微粒的数目.哮喘组在正规抗哮喘治疗(以吸人型糖皮质激素+长效β2受体激动剂为主)3个月后再次抽取相同体积的静脉血,检测血嗜酸性粒细胞微粒数目.结果 哮喘组治疗前循环中嗜酸性粒细胞微粒数目显著高于健康对照组和治疗后(F =5.532 P=0.038;Z=-4.937,P=0.01),哮喘组治疗后与对照组间微粒数目差异无统计学意义(F=3.118,P=0.102).对哮喘组进行亚组分析,微粒数目在哮喘过敏组和非过敏组间差异无统计学意义(t=0.421,P=0.677;t =0.006,P =0.952),在哮喘治疗后良好控制组与未控制组间差异有统计学意义(t=-2.086,P=0.046),△微粒与△FEV1、△FEV1％、△Eos count、△FeNO、△ACT呈线性相关(r=-0.558,P=0.01;r=-0.453,P=0.005;r=0.625,P=0.01;r=0.313,P=0.041;r=-0.399,P=0.012).结论 哮喘患者血循环中嗜酸性粒细胞微粒数目增多,治疗后微粒数目减少,动态监测血循环中嗜酸性粒细胞微粒有助于哮喘控制评估.

两种门冬酰胺酶治疗成人急性淋巴细胞白血病的疗效及安全性

目的 比较VDLP(vincristine,daunorubicin,L-asparaginase or PEG-asparaginase,prednisone)方案中应用左旋门冬酰胺酶(L-asparaginase,L-Asp)和培门冬酶(polyethylene glycol conjugated asparaginase,PEG-Asp)诱导治疗成人急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的疗效和安全性.方法 回顾性分析我院2008年1月至2015年3月121例初治成人ALL患者临床资料,其中PEG-Asp组46例,L-Asp组75例,比较2组患者完全缓解(complete remission,CR)率、中枢神经系统白血病(central nervous system leukemia,CNSL)发生率、中位无复发生存(relapse free survival,RFS)时间、中位总生存(overall survival,OS)时间及门冬酰胺酶相关副作用.结果 PEG-Asp组与L-Asp组患者诱导治疗CR率分别为93.18％和93.33％,中位RFS时间分别为306 d和218 d,中位OS时间分别为422 d和495 d,以上指标2组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);PEG-Asp组后续发生CNSL比例(11.36％)显著低于L-Asp组(29.33％) (x2 =5.11,P =0.024).不良反应方面,PEG-Asp组患者凝血功能障碍持续时间[(9.13±5.22)d]较L-Asp组[(7.02±4.02)d]延长(t=2.12,P=0.037).PEG-Asp组粒细胞缺乏持续时间长于L-Asp组[(19.26±9.41) vs (11.89±8.35)d,t=4.19,P＜0.01],PEG-Asp组重度感染(Ⅳ～Ⅴ级)发生率为26.83％,高于L-Asp组(5.71％)(x2=9.86,P=0.002),但2组出血事件发生率、感染相关死亡率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 采用PEG-Asp治疗成人ALL的CR率及远期疗效与L-Asp相似,但后续CNSL的发生率低于L-Asp.PEG-Asp治疗后凝血功能障碍持续时间及粒细胞缺乏持续时间较L-Asp长、重度感染发生率也较L-Asp高,但不增加出血事件发生率和感染相关死亡率.PEG-Asp可作为成人ALL一线治疗的选择.

EGFR-TKIs一线治疗EGFR敏感突变非小细胞肺癌患者的预后分析

目的 探讨影响EGFR-TKIs一线治疗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)敏感突变晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的预后因素.方法 收集2010-2013年本院接受EGFR-TKIs一线治疗,并获得中国癌症基金会赠药的EGFR敏感突变晚期NSCLC患者1 14例.应用COX回归分析接受厄洛替尼/吉非替尼治疗后,影响患者脑转移进展发生和1、2、3年生存的预后因素,并进一步应用Kaplan-Meier法比较19和21外显子突变患者脑转移中位进展时间(time to neurological progression,nTTP)的差异.结果 114例患者中,17例治疗前即存在脑转移,14例在TKIs治疗期间出现脑转移,77.4％ (24/31)在随访截止前出现脑转移进展.单因素分析显示:接受EGFR-TKIs治疗后,年龄＜60岁和≥60岁患者的1、2、3年生存率分别为90.15％、78.50％、63.30％和92.05％、57.90％、28.40％ (P =0.038);曾接受和未接受手术者的1、2、3年生存率分别为92.90％、86.45％、48.90％和90.85％、61.65％、27.30％ (P =0.034);无和有骨转移患者6、12、18个月脑转移进展发生率分别为3.40％、4.55％、10.90％和3.00％、11.70％、23.60％(P=0.046).多因素分析显示:年龄≥60岁是EGFR-TKIs治疗中的独立死亡风险因素(P =0.024);19和21外显子突变患者nTTP分别为18.3个月和13.0个月(P =0.276).结论 ＜60岁的EGFR敏感突变NSCLC患者接受TKIs治疗具有更低死亡风险,而合并骨转移者易发生脑转移,其中19外显子缺失突变脑转移患者具有更能从TKIs治疗获益的趋势.

七氟烷预处理对心脏瓣膜置换术患者炎性反应及心肌组织GSK3β、STAT5A表达的影响

目的 探讨七氟烷预处理对体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)下心脏瓣膜置换术患者心肌损伤的影响及潜在机制.方法 我院择期行心脏瓣膜置换术患者24例,完全随机分为2组(n=12):七氟烷预处理组和静脉麻醉对照组.麻醉维持:七氟烷预处理组于麻醉诱导插管后开始吸入1 MAC七氟烷20 min,再洗脱10 min;静脉麻醉对照组术中不吸入七氟烷.于麻醉诱导后即刻(TO)、主动脉开放2 h(T1)、6h(T2)、24 h(T3)、48 h(T4)采集桡动脉血并分离血浆,采用ELISA测定TNF-α、IL-6浓度,双向测流免疫法测定心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin Ⅰ,cTn Ⅰ)浓度及免疫抑制法测定磷酸肌酸同工酶(creatine phosphokinase isoenzyme,CK-MB)活性;于七氟烷洗脱后CPB前取右心耳组织,用Western blot检测糖原合成酶激酶3 β(glycogen synthase kinase 3 β,GSK3 β)、STAT5A磷酸化水平表达.结果 与TO比较,2组T1～T3时的cTn Ⅰ、TNF-α、IL-6浓度及CK-MB活性均升高(P＜0.05);与对照组比较,预处理组T1 ～ T2时的TNF-α、T1 ～ T3时的IL-6的浓度均降低(P＜0.05),而cTnI浓度、CK-MB活性2组差异无统计学意义(P＞0.05);与对照组比较,预处理组患者的右心耳组织的GSK3β、STAT5A磷酸化水平明显增高(P =0.046 9、0.005 8).结论 七氟烷预处理减轻心脏瓣膜置换术患者的炎症反应并且可能通过增加心肌组织GSK3β、STAT5A磷酸化表达介导心肌保护效应.

血栓弹力图评估肺癌患者围手术期凝血状态的临床研究

目的 应用血栓弹力图(thrombelastogram,TEG)评估肺癌患者围手术期凝血状态.方法 选择2014年我科接受手术治疗肺部疾病患者170例,分为肺癌组(100例)与良性疾病组(70例).观察术前TEG的R、K、Angel、MA、CI参数,比较肺癌组和良性疾病组TEG的差异.结果 与良性疾病组比较,肺癌组TEG的R值和K值明显缩短(P＜0.01),Angel、MA和CI值明显增宽(P＜0.01),而常规凝血功能除FIB有所升高外(P＜0.01),其他指标差异均无统计学意义(P＞0.05);肺癌组Ⅲ期与Ⅰ期、Ⅱ期比较,TEG各参数差异有统计学意义(P＜0.01);有淋巴结转移(N1-3)与无淋巴结转移者(N0)比较,K、Angel、MA值差异有统计学意义(P＜0.05);肺癌组8例术后出现下肢静脉血栓,其中有症状者3例,下肢静脉血栓阳性组与阴性组术前TEG各参数差异有统计学意义(P＜0.05),肺部良性疾病组无病例出现静脉血栓.结论 肺癌患者血液处于高凝状态,其高凝状态与分期和淋巴结转移呈正相关;与常规凝血功能相比,TEG更能全面、准确地反映体内凝血状态.

常染色体显性遗传玻璃体视网膜脉络膜病变一家系的致病基因筛查及临床分析

目的 使用外显子结合目标区域捕获测序检测常染色体显性遗传玻璃体视网膜脉络膜病变(autosomal dominant vitreoretinochoroidopathy,ADVIRC)家系的致病基因,并分析其临床表型.方法 收集重庆地区常染色体显性遗传玻璃体视网膜脉络膜病变先证者及4代成员的临床资料,完善眼科检查.采集该家系4例患者及8例健康成员的外周静脉血,提取基因组DNA,运用外显子结合目标区域捕获测序芯片进行测序,并对测序结果进行分析后得到候选致病基因性突变位点.运用PCR和直接测序进行验证,确定致病基因.根据致病基因的临床表型对该家系进行临床分析.结果 基因检测发现第六外显子的杂合突变BEST1(c.704TR＞C),家系患者中出现的小角膜、先天性白内障、周边视网膜脉络膜发育不良、晚期易发生青光眼等符合该突变基因的临床表型.结论 BEST1基因的c.704TR＞C杂合突变为该ADVIRC家系的致病基因之一.

急性脑梗死患者血浆巯基丙酮酸硫基转移酶及β-淀粉样蛋白42的水平及其临床意义

目的 探讨脑梗死(cerebral infarction,CI)患者急性期血浆巯基丙酮酸硫基转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST)及β-淀粉样蛋白42(β-amyloid peptide 42,Aβ42)水平及其与脑梗死体积、神经功能缺损程度的关系.方法 抽取52例急性期CI患者及35例健康人血浆标本,采用ELISA检测其3-MST及Aβ42水平,分析2组人群血浆3-MST及Aβ42水平的差异及其与脑梗死的关系.结果 CI患者组血浆3-MST水平较健康对照组水平明显降低[(3.67 ±0.29)vs (4.98 ±0.30)ng/mL,P ＜0.05],CI患者组血浆Aβ42水平较健康对照组水平显著增高[(44.52±2.92)vs (15.77±1.71 pg/mL),P＜0.01].急性CI患者中,血浆3-MST水平随脑梗死体积增大和NIHSS评分增加而降低;血浆Aβ42水平随脑梗死体积增大及NIHSS评分增加而升高.结论 脑梗死患者急性期的血浆3-MST水平明显降低、Aβ42水平显著增高,其变化与脑梗死患者神经功能缺损程度及梗死灶体积有关.

早期强化降压对高血压脑出血患者颅内血肿及水肿的影响

目的 探讨早期强化降压对高血压脑出血患者颅内血肿扩大及血肿周围水肿的影响.方法 回顾性分析本院2013年9月至2015年6月收治的幕上高血压脑出血患者的临床资料,根据我院神经内、外科对高血压脑出血早期血压管理方式的不同,将病例资料分为强化降压组(3h内收缩压降至≤140 mmHg,并维持120～140 mmHg 1周)和对照组(目标收缩压160 ～ 180 mmHg,平均动脉压100 ～130 mmHg).分别从年龄、格拉斯哥昏迷评分(Glasgow coma scale,GCS)、收缩压、起病后干预时间、血肿体积5个方面分层次比较2组3d内血肿扩大发生率,并计算相对危险度降低率(relative riskreduction,RRR),对比2组第3、7、14天水肿变化.结果 共筛选出90例行强化降压幕上高血压脑出血患者的临床资料,再筛选出与之相匹配的对照组90例,2组的一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05).强化降压组血肿扩大9例(10.0％),对照组血肿扩大24例(26.7％),差异有统计学意义(P＜0.01),RRR值为62.5％(95％ CI为23.9％～81.5％).2组水肿量在第3、7、14天差异无统计学意义(P＞0.05).结论 脑出血早期强化降压能减少患者颅内血肿扩大概率,不增加血肿周围水肿体积.

超级细菌疫苗研究进展

患者安全胜任力护理人员自评量表的编制及信效度评价

目的 编制患者安全胜任力护理人员自评量表(patient safety competency self-rating scale of nurses,PSCSSN).方法 在全面查阅和研究国内外相关文献的基础上,经2轮专家的函调和预实验对量表的条目进行评价、修改和筛选,形成终的PSCSSN量表,以3所三级甲等医院791例护理人员为研究对象进行信效度检验.结果 量表由29个条目组成,探索性因子分析共提取4个公因子,与量表理论构建基本一致,各条目在所属因子上的载荷为0.471～0.817,累积方差解释率为64.598％.因子间的相关系数为0.242～0.519,各因子与总分的相关系数为0.619 ～0.822.培训组护理人员PSCSSN总量表得分明显高于未培训组(P＜0.01).量表总的Cronbach's α为0.930,重测信度为0.945,各个因子的Cronbach's α在0.777 ～0.863,重测信度在0.867～0.927.结论 PSCSSN量表具有较好的信度和效度,可以作为评估护理人员的患者安全胜任力的测量工具.

芳香化酶抑制剂用于绝经后激素依赖性乳腺癌患者新辅助内分泌治疗效果的Meta分析

目的 评估芳香化酶抑制剂(aromatase inhibitors,AIs)应用于绝经后激素依赖性乳腺癌患者新辅助内分泌治疗的效果及安全性.方法 计算机检索Cochrane图书馆、PubMed、CNKI及CBMdisc等数据库,按既定标准纳入芳香化酶抑制剂应用于新辅助内分泌治疗的随机对照试验,以Cochrane系统进行逐篇质量评价,提取资料,并采用RevMan 5.0软件进行Meta分析.结果 共纳入9个随机对照试验,合计1 512名患者.结果显示:①在绝经后激素依赖性乳腺癌患者的新辅助内分泌治疗中,AIs在总有效率和完全缓解率上均优于雌激素受体阻滞剂;②在绝经后激素依赖性乳腺癌患者中,使用AIs的新辅助内分泌治疗效果与新辅助化疗相当;③新辅助化疗结合新辅助内分泌治疗对于绝经后激素依赖性乳腺癌患者可能有更好的近期疗效,但因研究太少,论证强度不高;④相对于细胞毒性药物,AIs和他莫昔芬的毒副反应发生率都较低,症状也较轻.结论 AIs可以作为绝经后激素依赖性乳腺癌患者新辅助内分泌治疗的一个安全、有效的治疗方案.