第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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表达人受精素β去整合素结构域的重组沙门菌疫苗株的构建
目的构建表达人受精素β去整合素结构域的重组沙门菌疫苗株.方法应用PCR方法获得人受精素β去整合素结构域的cDNA片断,将其插入高拷贝表达载体pYA3339中,构建重组质粒pYA3339/hf279,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X4550,获得重组菌株X4550 (pYA3339/hf279).结果该重组疫苗株可稳定表达能被抗人受精素β多克隆抗体识别的重组蛋白HF93,其分子量约为16×103.结论该疫苗株的构建为进一步研究以人受精素β为靶抗原的免疫避孕疫苗打下了基础.
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CD28/CTLA-4在类风湿关节炎患者外周血和关节积液中的表达及意义
目的探讨T细胞辅助刺激分子CD28和CTLA-4在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)中的表达及其与疾病活动的相关性.方法采集患者外周抗凝血和关节积液,通过淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离其中的淋巴细胞,采用流式细胞术双标染色技术,检测CD3+CD28+和CD3+CTLA-4+ 在淋巴细胞上的表达,通过Spearman相关进行统计分析,评价其与疾病活动的相关性.结果①RA患者外周血单个核细胞(PBMC)CD3+CD28+的表达显著低于正常对照组和RA患者关节积液(SFMC)组(P<0.01);②RA患者PBMC上CD3+CTLA-4+的表达与正常组无差异,但显著低于SFMC组(P<0.05).③SFMC组CD3+CD28+的表达与正常组无显著性差异,但CD3+CTLA-4+ 的表达显著高于正常组(P<0.01)④PBMC组、SFMC组CD3+CD28+ 和CD3+CTLA-4+的表达与反映疾病活动性的指标RF、抗CCP抗体存在相关关系.结论 RA患者外周血和关节积液中CD28+和CTLA4的表达异常是参与RA发病和病情进展的重要机制之一.但其在病程进展中的具体作用尚不明确.
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大鼠骨髓间充质干细胞移植后大鼠脑梗死区超微结构变化的研究
目的观察接受MSCs局部注射移植的大鼠脑梗死区超微结构的变化,以了解MSCs移植对梗死区超微结构的影响.方法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型,将体外分离培养的大鼠MSCs注射至大鼠脑梗死区,于移植后第4周电镜下观察梗死区超微结构变化.结果接受移植的梗死区可见外形幼稚的细胞存活,并围绕在神经元周围,梗死区神经元胞浆中出现了丰富的游离核糖体,而对照组大鼠梗死区神经元胞核固缩,并有嗜神经细胞现象.结论大鼠MSCs移植对缺血性脑损伤具有一定修复作用.
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钒酸钠治疗增加实验性糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4表达的研究
目的探讨钒酸钠类胰岛素作用及骨骼肌GLUT4(葡萄糖转运蛋白4)在其作用中机制.方法 Wistar大鼠40只,体质量180～250 g,随机分为2组,一组应用链脲佐菌素(55 mg/kg)腹腔内注射,5 d后血糖大于13.5 mmol/L定为糖尿病大鼠,另一组为正常对照鼠,然后将正常对照组与糖尿病组大鼠各随机分为2组.加钒组隔日管饲0.4%钒酸钠水稀释液,对照组饮用0.9%生理盐水,观察基本指标变化,持续2周后在麻醉情况下迅速分离提取骨骼肌及血液标本,应用Western blot 和RT-PCR技术测定GLUT4的蛋白和基因表达.结果钒酸钠治疗糖尿病大鼠PG、TG、INS降低,糖尿病大鼠GLUT4蛋白和GLUT4mRNA表达与正常对照组比较降低明显,钒酸钠治疗糖尿病大鼠GLUT4蛋白和GLUT4mRNA表达增加接近正常对照组水平.结论钒酸钠治疗糖尿病大鼠在不增加胰岛素释放的情况下具有明显改善糖脂代谢的效果,使降低GLUT4水平恢复接近正常,说明钒酸钠增加糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4表达使周围组织葡萄糖摄取利用紊乱增加可能是降低血糖机制之一.
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肾脏及其周围结构的三维可视化研究
目的建立中国人肾脏及其周围结构的三维可视化模型.方法应用中国首套男、女性数字化可视人体数据集,在VRM计算机平台上建立人体肾脏及其周围结构的三维可视化模型并进行分析.结果成功建立了肾脏及其周围结构的三维可视化模型,该模型能进行任意角度的旋转和连续的任意方位的切割,并能清晰地显示出各个切割面的断面解剖结构.结论可视化肾脏能够实现肾脏及周围结构的任意方位的断面解剖,为虚拟肾脏手术奠定了基础.
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人AQP1基因的重组腺病毒构建及鉴定
目的构建人AQP1(hAQP1)基因的重组腺病毒载体.方法采用DNA重组与细菌内同源重组技术,构建含hAQP1的复制缺陷型重组腺病毒载体(pAdEasy-1/ hAQP1),并观察pAdEasy-1/ hAQP1在ECV-304中的感染情况.PCR方法鉴定重组腺病毒载体,利用绿色荧光蛋白GFP检测病毒滴度和感染效率.结果 PCR及限制性内切酶酶切鉴定证明pAdEasy-1/ hAQP1构建成功.结论应用细菌内同源重组法成功构建了含hAQP1基因的重组腺病毒载体.
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5-氮杂胞苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化过程中PPARγ表达及其作用
目的探讨5-氮杂胞苷诱导骨髓间充质干细胞(MSC)分化过程中PPARγ的表达情况及其在细胞分化过程中的作用.方法利用原代培养小鼠MSC,5-氮杂胞苷诱导分化;脂质体转染法,将pEGFP-N1-PPARγ2表达质粒转入MSC中,G418筛选,RT-PCR检测PPARγmRNA表达,免疫组化检测myosin及PPARγ表达.油红O染色检测细胞内脂滴.结果 MSC在未诱导时不表达PPARγ,经5-氮杂胞苷诱导后,多数细胞向成肌细胞分化,部分细胞表达PPARγ且向成脂肪细胞分化;pEGFP-N1- PPARγ2转染成功的细胞均分化为脂肪细胞.结论 5-氮杂胞苷不仅诱导MSC向成肌细胞分化,也诱导其向成脂肪细胞分化;其诱导MSC向成脂肪细胞分化可能与PPARγ表达有关.
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固定性斜视的手术治疗初探
固定性斜视是临床上一类罕见的疾病,是由于某一条或多条眼外肌为纤维组织所代替,致使眼球固定于某一特定位置,不能向其它方向转动.眼球多固定于内转或内下转的位置,被动转动试验有极大抗力.
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双注射器吸引疗法整复乳头内陷畸形
丰满的乳房、挺拔的乳头是女性曲线美的重要特征.乳头内陷是正常乳头位置发生凹陷,不仅使乳房丧失美感,而且因乳头深陷于乳晕之中,其凹陷内常积存污垢,造成奇痒、湿疹或炎症,严重者导致乳管内乳头状瘤或导管瘤、出现异味,甚至不能哺乳,给患者带来心理上的压抑及生活上的不便.我科近3年来应用双注射器吸引疗法整复先天性乳头内陷患者22例,共41只乳头,效果良好.
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盐酸左氧氟沙星致过敏反应1例
盐酸左氧氟沙星(levofloxacin)是较常见的氟喹诺酮类抗菌药物,引起的不良反应文献偶有报道.现将我科近收治的因口服盐酸左氧氟沙星片剂致过敏反应、呼吸困难1例报告如下.
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腹水超滤浓缩回输治疗顽固性腹水患者及护理方法
1 资料与方法1.1 对象治疗对象30例为我院住院确诊的肝硬变合并顽固性腹水患者,所有病例均经限水限钠利尿治疗两周以上效果不佳,腹胀症状明显.男22例,女8例,年龄23～78岁,平均46.5岁.肝炎后肝硬变26例,酒精性肝硬化4例,均无重度黄疸、肝昏迷及上消化道出血史.
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腮腺切除联合胸锁乳突肌肌瓣旋转修复术
腮腺切除术后常会在局部遗留下较明显的凹陷畸形,味觉出汗综合征(Frey综合征)发生率高达70%[1～3],同时,目前临床上所采用的传统"S"形切口术后也常在耳前和颌下留有明显的疤痕.为此,我们通过改良腮腺手术切口联合胸锁乳突肌肌瓣旋转修复,较好地克服了术后的凹陷畸形和颌面部疤痕,大大地降低了Frey综合症的发生率.
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法莫替丁联合无环鸟苷治疗HSV感染性上皮性角膜炎124例
单纯疱疹性感染性上皮性角膜炎是由单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV)引起,主要侵犯角膜上皮.根据病理生理学改变将其分为:角膜小泡、树枝状溃疡、地图状溃疡和边缘性溃疡[1].本研究以甘泰片作对照,进行法莫替丁治疗单纯疱疹性上皮性角膜炎的临床效果对比.
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新生儿缺氧缺血性脑病CT动态观察
新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE)是威胁新生儿生命的重要疾病,也是导致婴幼儿神经系统后遗症的主要原因.我科自1996年9月至2002年8月,对诊断为新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的住院患儿,进行了头颅CT动态随访观察,现报告如下.
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微创气管造口术在成人严重烧伤治疗中的应用
传统外科气管切开术是早期防治严重烧伤合并吸入性损伤时脏器缺氧性损害的重要手段.但该手术有相对创伤大、出血多、创口愈合时间长、并发症多等缺点[1].我科在严重烧伤合并吸入性损伤患者实施微创气管造口术,取得了满意的治疗效果.
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经支气管镜安置支架治疗气道狭窄及气管食道瘘21例分析
目的探讨支气管镜直视下安置镍钛合金支架对气管、支气管狭窄及支气管食道瘘的治疗效果及不良反应.方法对21例不同原因引起的气管、主支气管狭窄在支气管镜直视下施行了气道镍钛记忆合金支架置入,其中2例合并支气管食道瘘患者置入的为带膜支架,对其中4例严重气道狭窄患者在安置支架前进行了气道球囊扩张,对其中3例主支气管内肿瘤患者在支架上捆绑 125I粒子.结果所有患者术后呼吸困难均立即明显缓解.2例合并气管食道瘘患者在置入带膜气管支架后进食呛咳消失.4例严重气道狭窄患者在进行球囊扩张后均顺利置入气管支架.3例在支架上捆绑 125I粒子的支气管内肿瘤患者1个月后肿瘤组织明显减少.术后出现痰带血2例,肉芽组织增生2例.结论纤支镜直视下安置镍钛合金支架是治疗中心气道狭窄安全而有效的方法之一,支气管球囊扩张可使支架置入更加顺利,带膜支架置入是治疗气管食道瘘的有效手段,支架上捆绑 125I粒子可对支气管腔内肿瘤起到有效控制作用.
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自制体位护理垫在玻璃体切除术后病人的临床应用
目的设计出减少玻璃体切除手术后由于体位所致并发症的体位护理垫,为玻璃体切除手术后病人的顺利康复提供可靠的保证.方法通过临床调研,自主设计、开发出体位护理垫,将324例玻璃体切除手术后病人随机分为实验组(E)和对照组(C),实验组使用体位护理垫,对照组使用传统方法,比较两组病人的生命体征、食欲、颈肩背部疼痛、皮肤破损、平均住院日等指标.结果体位护理垫用于临床;两组病人的生命体征比较无明显差异,但疼痛、食欲下降、颜面红肿等并发症的发生率,实验组显著低于对照组.结论体位护理垫能极大地改善面向下体位给病人造成的生理不适,减少体位所致的并发症,有效地保证手术效果.
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应用SMART支架治疗颈动脉病变17例临床效果
目的探讨SMART(shape-memory-alloy-recoverable-technology stent)支架治疗颈动脉病变的有效性、安全性.方法选择颈动脉狭窄大于50%或有内膜病变的患者17例行SMART支架内置入治疗,于围手术期进行抗血小板治疗,并行全脑血管造影及部分行颈部超声检查.手术采用预扩与不预扩两种操作.结果 17例手术操作顺利,影像学评价完全成功.治疗后短暂性脑缺血发作(TIA)消失,残余狭窄均<50%.无症状脑梗死1例,无死亡.结论应用SMART支架内置入是治疗颈动脉狭窄的一种安全、有效的方法.
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腹腔镜肾上腺切除术麻醉期间对呼吸循环功能的影响
我院自2000年9月至2003年5月在全身麻醉下,经腹和腹膜后途径腹腔镜手术治疗肾上腺疾病65例.通过观察腹腔镜肾上腺切除术围麻醉期对呼吸循环功能的影响,探讨其麻醉处理的特殊性.
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温度对冻干脂质体物理化学稳定性的影响研究
目的研究温度对冻干脂质体物理化学稳定性的影响.方法应用激光粒度仪检测冻干脂质体水化后的粒径变化,评价其物理稳定性;通过检测脂质二级过氧化物与硫代巴比妥酸反应物的吸光度和滴定分析脂质水解产物棕榈酸的方法,观察其化学稳定性.25 d内,分别对以密闭闭光形式分别储存于-18、4、25、40 ℃等条件下的冻干脂质体氧化、水解和粒径等性质进行观察.结果冻干脂质体在40 ℃条件下时氧化程度明显高于-18、4、25 ℃,随着温度的升高,氧化速度有升高的趋势;4种条件下的冻干脂质体产生的游离脂肪酸虽然都有一定程度升高,但变化较小,且没有明显差异.粒径在40 ℃、第25天时变化较大,其它经统计学处理没有显著性差异.结论温度对冻干脂质体的化学稳定性影响较大,而对物理稳定性影响较小,是一种很有前途的脂质体制剂形式.
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血管内皮-平滑肌细胞双层联合培养模型的改进
目的建立并改进血管内皮和平滑肌细胞双层联合培养模型,为进一步研究血管内皮和平滑肌细胞间的信号传递奠定基础.方法先分别单独培养大鼠主动脉血管内皮和平滑肌细胞,然后分别培养在聚乙烯细胞培养微孔滤膜两面,并以不同的比例重叠.结果两种细胞重叠1/3、2/3和100%,以孔径分别为1.0或3.0 μm微孔滤膜对两种细胞进行双层联合培养后,对内皮细胞的影响不明显,但对平滑肌细胞的影响则十分显著,细胞形态以"收缩型"为主,肌纤维增多,生长速度较单独培养时慢,形成单层贴壁细胞的时间延长12～18 h,无明显"峰-谷"状态形成.结论改进后的联合培养方法经济、简便,更适合于研究血管内皮和平滑肌细胞间的信号传递.
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疟原虫和蚊相互关系研究进展
疟疾是一种以按蚊为媒介的重要虫媒病,也是当今全球重要的寄生虫病,虽然经过一个多世纪的国际合作,努力旨在控制该危害性极大的虫媒病,但每年疟疾患者依然高达500多万,死亡数达270多万[1].
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大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究
目的探讨大劣按蚊差异表达蛋白与约氏疟原虫卵囊黑化的相互关系.方法将雌大劣按蚊成蚊分为吸糖水组、正常小白鼠血组和约氏疟原虫感染血组,以挤压法收集各组的血淋巴,解剖中肠并利用超声波提取其蛋白,继而对血淋巴和中肠蛋白进行SDS-PAGE分离,Western blot检测丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶的表达差异,并利用免疫组织化学进行血细胞丝氨酸蛋白酶与前酚氧化酶的定位检测.结果 SDS-PAGE显示吸糖水大劣按蚊有34条蛋白带,而吸正常小鼠血和吸感染血蚊血淋巴有35条蛋白带,而且在分子量约160×103和66×103的蛋白差异带显著,吸正常血及感染血后表达增强.吸糖水和吸正常小白鼠血组血淋巴丝氨酸蛋白酶呈现2条带,分子量分别约160×103和150×103,3组蚊血淋巴前酚氧化酶呈现1条带,分子量约66×103,吸正常小鼠血和吸感染血组蚊1 d后血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达均显著上调,尤其疟原虫感染后表达强.感染1 d后中肠前酚氧化酶带型明显增宽.免疫酶化学显示,丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶在血细胞内均呈颗粒状分布,血细胞外血淋巴液内有少许散在颗粒分布.结论约氏疟原虫卵囊黑化期间,大劣按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶和前酚氧化酶表达增强,提示二者可能参与了卵囊黑化包裹反应.
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大劣按蚊AdS7基因的克隆及分析
目的克隆AdS7基因cDNA序列,为大劣按蚊基因定量研究提供内参照.方法采用RT-PCR扩增、TA克隆技术获得AdS7 cDNA部分序列,标记地高辛AdS7探针,从大劣按蚊cDNA文库中筛选得到AdS7全长克隆,以半定量RT-PCR方法研究血餐和约氏疟原虫感染对其表达水平的影响.结果从大劣按蚊cDNA克隆得到长464 bp的AdS7基因cDNA部分序列,从大劣按蚊cDNA文库筛选获得了长871 bp的AdS7基因全长克隆,大劣按蚊吸血和感染约氏疟原虫后24 h,AdS7表达水平没有显著变化.结论 AdS7基因可作为大劣按蚊基因定量研究的内参照.
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大劣按蚊AdPPO2、AdPPO3基因cDNA克隆与组织定位
目的克隆大劣按蚊PPO基因家族新成员的cDNA部分序列,并对所克隆基因进行蚊体组织定位研究.方法根据已报道的多种昆虫PPO的保守氨基酸序列设计简并引物,以大劣按蚊总RNA为模板进行RT-PCR扩增、目的片段克隆入T载体,然后,用PCR方法筛选新的PPO克隆并测序;以RT-PCR方法分析AdPPO2和AdPPO3在蚊血淋巴、蚊胃和唾液腺的分布情况.结果 AdPPO2和AdPPO3基因cDNA部分序列长均为597 bp,编码199个氨基酸;它们在血淋巴、蚊胃和唾液腺均有分布.结论从大劣按蚊成功克隆获得2种新的PPO基因家族成员的cDNA部分序列,为进一步克隆其全序列奠定了基础.
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约氏疟原虫感染斯氏按蚊与大劣按蚊前后中肠前酚氧化酶的变化
目的比较分析约氏疟原虫感染斯氏按蚊与大劣按蚊前后中肠前酚氧化酶(prophenoloxidase,PPO)的分布及其变化,探讨中肠PPO与按蚊抗疟原虫感染免疫防御反应的关系.方法解剖分离约氏疟原虫感染前和感染后3、5、7、11和15 d斯氏按蚊与大劣按蚊的中肠.利用烟草天蛾PPO抗体分别进行免疫组化染色和免疫印迹分析.结果斯氏按蚊与大劣按蚊在未感染约氏疟原虫前的中肠循环管道内均已存在PPO,而感染后循环管道内的PPO扩散到中肠组织间隙并聚集成片状、块状或条索状,大劣按蚊中肠PPO的聚集程度大于斯氏按蚊;在感染前和感染后不同时期免疫印迹均可检测到斯氏按蚊与大劣按蚊中肠PPO蛋白带,分子量约为67×103,感染后的PPO蛋白带型比感染前明显增强,而且大劣按蚊中肠PPO蛋白带型比斯氏按蚊尤为明显.结论约氏疟原虫感染前按蚊中肠循环管道内存在的PPO可能是经与血淋巴相通的循环管道扩散而来,感染后导致的中肠内PPO不同分布及其变化可能与疟原虫感染按蚊密切相关,并可能具有重要的生理学意义以及与激活按蚊抗疟原虫感染的免疫防御反应相关.
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约氏疟原虫感染对大劣按蚊PPO4基因转录与卵囊内Ca2+的影响
目的观察约氏疟原虫感染对大劣按蚊前酚氧化酶(prophenoloxidase, PPO)基因转录的影响与卵囊黑化期间囊内Ca2+的变化,探讨疟原虫感染不易感蚊种时卵囊黑化的相关机制.方法分别在大劣按蚊吸血感染约氏疟原虫前与感染后1、2、3和5 d抽提蚊总RNA进行RT-PCR,PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳后扫描进行凝胶图像分析,并对所得数据进行统计学处理.在吸血感染后5、7、11和15 d解剖分离按蚊中肠,以荧光染料Fluo-3/Am作为卵囊内Ca2+指示剂,利用共聚焦扫描显微镜观察不同时期约氏疟原虫卵囊内Ca2+的分布及变化.结果吸血感染约氏疟原虫前大劣按蚊PPO4基因的RT-PCR扩增产物较少,但感染后明显增加(P<0.01),尤其在感染后1 d与2 d为明显;约氏疟原虫未黑化卵囊内Ca2+为(137.15±7.02) nmol/L,完全黑化卵囊内Ca2+为(18.44±1.75) nmol/L、并在囊壁出现明显的钙沉着.结论吸血感染约氏疟原虫后大劣按蚊PPO4基因转录比感染前明显增强,黑化卵囊内Ca2+较未黑化卵囊明显减少,并有外排现象.
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吸血和约氏疟原虫感染对AdPPOs基因家族转录水平的影响
目的观察血餐和约氏疟原虫感染对AdPPO1、AdPPO2和AdPPO3基因转录水平的影响.方法同批3～5 d龄大劣按蚊分为不吸血组(N)、吸正常血组(NB)和吸感染血组(IB),在血餐后24 h分别制备各组蚊总RNA,所有样品进行RT-PCR后,各吸取10 μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,凝胶图像分析系统扫描并读取数据,并对所得数据进行统计学处理.结果与不吸血组比较,吸血组和感染组AdPPO1的转录水平显著下降(P<0.05),但吸血组和感染组间没有显著性差异(P>0.05).吸血组AdPPO2的转录则明显上调(P<0.05),但与感染组间没有显著性差异(P>0.05);AdPPO3基因的转录水平在3组间均没有显著性差别(P>0.05).结论血餐明显抑制AdPPO1基因的转录,但明显上调AdPPO2基因的转录水平;约氏疟原虫感染后24 h,AdPPO1,AdPPO2和AdPPO3基因的转录水平均不受影响.
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二维电泳-质谱分析斯氏按蚊中约氏疟原虫卵囊黑化相关的差异表达蛋白
目的用2-DE和PMF分离和鉴定约氏疟原虫卵囊黑化相关的斯氏按蚊中肠和血淋巴差异表达蛋白.方法用固相pH梯度二维电泳分离中肠和血淋巴差异表达蛋白,考马斯亮蓝染色,Image Master VDS-CL凝胶扫描和PDQuest 2D Elite软件分析,差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用PeptIdent软件查询SWISS-PROT数据库.结果获得了分辨率和重复性均较好的2-DE考马斯亮蓝图谱,吸硝喹糖水组蚊血淋巴和中肠蛋白点分别有101个和104个,感染组分别有115个和162个,匹配点分别为51个和44个.斯氏按蚊血淋巴和中肠蛋白质组中蛋白点分别主要分布于酸性端和碱性端,血淋巴和中肠差异蛋白也分别主要分布于酸性端和碱性端.随机取25个差异蛋白点进行胶内原位酶解-肽质指纹图谱分析得到了16个蛋白质肽质指纹图,查询数据库初步鉴定了8个蛋白质,分别为与抗疟免疫、黑化、结构、糖代谢、细胞通讯等相关蛋白.结论建立了一套重复性和分辨率较好的斯氏按蚊蛋白质分离和鉴定的二维凝胶电泳-肽质谱指纹分析法,约氏疟原虫卵囊黑化前后,斯氏按蚊血淋巴和中肠伴随大量差异表达蛋白,部分蛋白可能与黑化有关.
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约氏疟原虫感染诱导大劣按蚊AdSP1 和AdSP3的转录
目的观察丝氨酸蛋白酶AdSP1 和AdSP3在大劣按蚊主要组织中的表达,分析血餐和约氏疟原虫感染对大劣按蚊血细胞AdSP1 和AdSP3转录的影响.方法离心收集血细胞,解剖分离大劣按蚊蚊胃和唾液腺,提取相应的总RNA,RT-PCR扩增;然后将同批3～5 d龄大劣按蚊分为正常组(N)、吸正常血组(B)和感染约氏疟原虫组(I),分别在血餐后1、2、3、4、7 d和11 d,收集3组各50只雌大劣按蚊血细胞和提取总RNA,以Ads7为内参照,进行半定量RT-PCR分析.结果丝氨酸蛋白酶AdSP1 和AdSP3在大劣按蚊血细胞和唾液腺中表达,不在蚊胃表达;吸血和约氏疟原虫感染后,大劣按蚊血细胞中AdSP1 和AdSP3的转录上调,尤以约氏疟原虫黑化期间明显.结论 AdSP1和AdSP3可能参与大劣按蚊对约氏疟原虫的黑化反应,并可能是大劣按蚊的PPAE.
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大劣按蚊对约氏疟原虫卵囊黑化相关血细胞类型的初步鉴定
目的鉴定与抗疟黑化反应相关的大劣按蚊血细胞.方法采用姬氏染色法初步鉴定大劣按蚊血细胞类型,继而利用免疫细胞化学技术检测大劣按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶.结果颗粒细胞和浆细胞为大劣按蚊主要血细胞,前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶也主要分布于颗粒细胞和浆细胞内,其中颗粒细胞常见.结论抗疟黑化相关性血细胞可能主要为颗粒细胞和浆细胞.
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约氏疟原虫感染斯氏按蚊后血淋巴PPO的酶解激活
目的了解约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊是否发生黑化相关性酶级联反应.方法挤压法收集雌斯氏按蚊成蚊血淋巴,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度,然后对血淋巴进行一维和二维SDS-PAGE,继而利用Western印迹分析比较PPO蛋白点的差异.结果约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊之前的血淋巴蛋白二维凝胶电泳后的Western印迹的PVDF膜上出现2个分子量均约为64×103、等电点分别约为7.4和7.6的两个PPO蛋白点,感染后发现8个蛋白点,36×103分子量处3个,等电点分别约为7.2、7.4和8.0;30×103分子量处5个,等电点分别约为7.0、7.2、7.5、7.6和7.8.结论约氏疟原虫感染雌斯氏按蚊成蚊之前的血淋巴PPO以异二聚体形式结构性表达于血淋巴内,感染后PPO发生免疫激活反应和酶学分解过程,提示PPO参与疟原虫卵囊黑化包被反应.
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AdPPO4基因部分序列的cDNA克隆与序列分析
目的克隆大劣按蚊(An dirus)前酚氧化酶(prophenoloxidase,PPO)基因部分序列.方法根据已报道的多种昆虫以及冈比亚按蚊PPO基因编码的保守氨基酸序列设计简并引物,以大劣按蚊幼虫总RNA为模板进行RT-PCR扩增,目的片段经TA克隆后测定其核苷酸序列,然后进行序列查询与比对.结果从大劣按蚊幼虫中获得的PPO4基因(AdPPO4)部分序列长597 bp,编码199个氨基酸;AdPPO4与冈比亚按蚊PPO4基因的核酸和氨基酸序列同源性分别达84%和90%.结论从大劣按蚊幼虫中成功地克隆出了AdPPO4基因的部分序列,与冈比亚按蚊PPO4基因具有很高的同源性.
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双氯芬酸钾脂质体制剂的制备及大鼠体外透皮研究
目的研究双氯芬酸钾(DP)脂质体制剂的制备及体外的经皮吸收特点.方法采用改良均质法制备DP钾脂质体制剂;采用改良Franz扩散池,研究DP脂质体制剂与上市凝胶制剂大鼠皮肤的体外透皮吸收差异.结果改良均质法制备的DP脂质体,平均粒径为345 nm,粒径分布比较均匀,包封率为87.3%.体外透皮实验中,DP脂质体制剂较凝胶制剂的透皮能力高(P<0.05).结论脂质体包封的双氯芬酸钾制剂质地均一,稳定,能有效地渗透过皮肤.
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双氯芬酸钾脂质体制剂的大鼠体内透皮研究
目的研究双氯芬酸钾(DP)脂质体制剂体内经皮吸收和药物分布特点.方法用SPE-HPLC方法,研究在体条件下局部外用脂质体制剂和传统凝胶制剂后,DP在深层和浅层肌肉、血清、肝、胃等不同组织中的分布情况.结果脂质体外用制剂于浅层肌肉、深层肌肉中的浓度峰值分别为3202.82 ng/g和1465.79 ng/g,较凝胶外用制剂高(P<0.01),且药物浓度维持时间长.结论脂质体包封的双氯芬酸钾制剂能有效地渗透皮肤到达皮下组织,持续发挥局部药物作用,同时减少全身其它部位的药物分布浓度.
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羟基喜树碱脂自制质体注射液与市售注射液家兔体内药代动力学行为的比较
目的比较自制羟基喜树碱脂质体注射液(hydroxycamptothecin liposomes injection, L-HCPT)和市售羟基喜树碱注射液(market hydroxycamptothecin injection, M-HCPT)在家兔体内的药代动力学行为.方法分别静脉注射单剂量(1 mg/kg)的L-HCPT和M-HCPT,用HPLC法测定血浆中的药物浓度,用3p87程序和SPSS软件处理和分析数据,计算有关药代动力学参数.结果经3p87程序拟合,家兔静脉注射单剂量L-HCPT和M-HCPT后,其血药浓度-时间数据分别符合权重为1/C/C的二室模型;静脉注射L-HCPT和M-HCPT后Cmax分别为3.176 8、1.521 9 μg/ml, t1/2β分别为33.990 7、29.392 9 min,AUC分别为28.851 5、11.655 1 μg*min*ml-1,CL分别为0.035 0、0.086 0 L*min-1*kg-1,Vc分别为0.270 0、0.640 0 L/kg,可见L-HCPT比M-HCPT注射后具有更高的血药浓度水平,较长的消除半衰期,更大的血药浓度-时间曲线下面积,较低的总体清除率和较小的表观分布容积.结论 L-HCPT和M-HCPT在家兔体内的一些重要的药代动力学特性发生了明显改变,有利于HCPT疗效的增加.
