第三军医大学学报杂志
Journal of third military medical university 제삼군의대학학보
- 主管单位： 第三军医大学
- 主办单位： 第三军医大学
- 影响因子： 1.01
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1000-5404
- 国内刊号： 50-1126/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
Ad-HIF-1α-Trip肌肉注射对大鼠缺血肢体血管新生和血液灌注的影响
目的 研究重组腺病毒低氧诱导因子-1α三突变体(the recombinant adenovirus containing the triple-point mutants HIFl-α gene,Ad-HIF-1α-trip)基因对大鼠缺血后肢血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达、血管新生及血流灌注的影响.方法 48只2月龄雄性Wistar大鼠(体质量0.200 ～0.250 kg)建立急性左后肢缺血模型,应用随机数字表法随机分成4组(n=12):生理盐水组(Saline组),腺病毒空载体组(Ad-Null组)、重组腺病毒低氧诱导因子-1α组(Ad-HIF-1α)、Ad-HIF-1α-trip组.分别在建模后即刻肌注生理盐水、Ad-Null、Ad-HIF-1α、Ad-HIF-1α-trip 0.5 ml,病毒滴度4×109pFU.术后7d,行Real-time PCR检测缺血组织HIF-1α及VEGF的表达情况.术前及基因转染后即刻、7、14、28 d对大鼠后肢进行对比超声(contrast enhanced ultrasound,CEU)检查,基因转染后28 d处死动物行病理切片CD31免疫组化微血管密度(microvascular density,MVD)计数.结果 基因转染后7d,在mRNA水平HIF-1α及VEGF在Ad-HIF-1α-trip组大鼠缺血后肢肌肉组织中表达强[HIF-1α:(2.576±0.019)；VEGF:(2.498 ±0.031),P＜0.05]；CEU结果显示:Ad-HIF-1α-trip组基因转染后大鼠缺血后肢血流灌注改善明显优于其他各组{基因转染28 dA×β标化值:Saline vs Ad-Null vs Ad-HIF-1α vs Ad-HIF-1α-trip:[(0.529±0.045) vs (0.535±0.062) vs(0.642±0.056)vs(0.895 ±0.049),P＜0.05]；CD31免疫组化示:转染后28 d,Ad-HIF-1α-trip组缺血后肢肌肉组织MVD计数明显优于其他各组[ Saline vs Ad-Null vs Ad-HIF-1α vs Ad-HIF-1α-trip:(82.316±19.258) vs( 89.662±21.374) vs( 175.248±31.736) vs(213.426 ±48.073),P＜0.05]}.结论 Ad-HIF-1 α-Trip在大鼠缺血肢体肌肉组织能有效表达,促进缺血肢体的血管新生及血流灌注.
-
光动力学疗法影响变形链球菌生长和形态的体外研究
目的 研究甲苯胺蓝为光敏剂介导的光动力学疗法对变形链球菌体外生长及表面形态的影响,探讨光动力学疗法影响致龋菌生长代谢的作用机制.方法 在不同光剂量和不同光敏剂浓度下,通过体外活菌菌落计数法测定光动力学疗法对变形链球菌的生长抑制作用,扫描电镜观察光动力学疗法处理前后菌体表面形态的改变,实验分空白对照组、光敏剂对照组、光对照组和实验组,各组间活菌菌落取对数值后采用析因设计方差分析.结果 光动力学疗法能显著抑制变形链球菌的体外生长,随着光照时间和光敏剂浓度的增加,其灭菌效果逐渐增强.当光敏剂浓度为100 μg/ml,光照时间为5、15、25 min时,细菌菌落对数值分别为(7.40±0.13)、(6.86±0.14)、(6.44 ±0.28),与空白对照组(8.30±0.04)相比差异有显著性(P＜0.05),5 min与15 min两实验组之间差异有显著性(P＜0.01).光敏剂浓度和光剂量二因素之间存在交互作用(F=19.47,P＜0.01).扫描电镜观察显示实验组变形链球菌与对照组相比菌体表面粗糙不平,有水泡状凸起.结论 甲苯胺蓝为光敏剂介导的光动力学疗法能显著抑制变形链球菌体外生长并改变其表面形态.
-
鼻咽癌畸胎瘤细胞源性生长因子表达及siRNA对HNE-1细胞株增殖的抑制
目的 探讨畸胎瘤细胞源性生长因子(PC cell-derived growth factor,PCDGF)在人鼻咽癌中的表达,研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对鼻咽癌HNE-1细胞增殖的影响.方法 采用免疫组织化学的方法检测34例鼻咽癌、20例鼻咽慢性炎症组织中PCDGF蛋白的表达情况.根据PCDGF基因设计合成2条siRNA,利用LipofectamineTM2000转染鼻咽癌HNE-1细胞.通过PT-PCR、Western blot、荧光免疫细胞化学法检测转染后细胞PCDGF mRNA和蛋白表达,采用MTT检测转染后细胞的生长增殖情况,FCM法检测细胞周期分布.结果 34例鼻咽癌组织中PCDGF阳性表达率为85.3％ (29/34),20例鼻咽部慢性炎症组织中阳性率为15.0％ (3/20),2组间差异有统计学意义(P＜0.01).2条重组质粒均能特异性的抑制PCDGF mRNA和蛋白的表达,其中siRNA-1的沉默效率高.转染48 h后,HNE-1细胞中PCDGF mRNA和蛋白表达水平分别下调64.7％和69.8％,细胞增殖抑制率为(37.07±12.4)％,siRNA-1组G0/G1期细胞增多,S期细胞数量明显减少(P＜0.05),细胞周期被阻滞于G1期.结论 特异性siRNA能够有效沉默PCDGF基因表达,并显著抑制鼻咽癌HNE-1细胞增殖.
-
Ⅰ级宫颈上皮内瘤变中HPV病毒载量与P16蛋白表达的相关性及预后意义
目的 探讨宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ级组织中HPV病毒载量与P16蛋白表达的相关性及二者用于预测CIN Ⅰ转归的可行性.方法 选择2008年5月至2010年1月,重庆市妇幼保健院宫颈专科门诊,经组织学确诊为CIN Ⅰ患者103例,确诊CIN Ⅰ同时以第二代杂交捕获法(hybrid captureⅡ,HC-2)检测高危型HPV(HR-HPV)病毒载量,采用免疫组化S-P法检测其相应宫颈组织中P16蛋白表达,分析二者相关性.分别于随访6、12、18、24个月复查细胞学、阴道镜,必要时重复宫颈活检.以随访第24个月组织学检查结果为病变转归结局,分析HPV病毒载量及P16蛋白表达作为CIN Ⅰ病变转归预测指标的可行性.结果 ①CIN Ⅰ组织中HPV阳性率为69.90％ (72/103),P16蛋白阳性表达率为38.83％(40/103),P16蛋白表达与HPV病毒载量二者之间呈正相关(rs=0.568 8,P＜0.01)；②随访24个月,CIN Ⅰ病变总进展率为11.65％(12/103)；③以P16蛋白表达评分≥6分作为CIN Ⅰ进展的预测指标,其敏感性、特异性及阴性预测值分别为91.67％、96.70％、98.88％(P＜0.01)；以HR-HPV病毒载量≥100 RLU/CO为预测指标,其敏感性、特异性和阴性预测值分别为58.33％、81.32％、93.67％ (P ＜0.01).结论 P16蛋白表达强度及HR-HPV病毒载量与CIN Ⅰ病变转归密切相关,可以作为CIN Ⅰ进展风险的预测指标.
-
结肠癌中S100A2的表达及其与Wnt/β-catenin通路的相关性
目的 探讨钙结合蛋白S100A2与Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin、pGSK-3β在人结肠癌组织中的表达和意义以及相关性.方法 采用免疫组化和Western blot方法检测42例结肠癌及癌旁正常组织中S100A2、β-catenin和pGSK-3β的表达情况,分析它们与结肠癌临床病理参数的关系,进一步采用Pearson等级相关分析其相关性.结果 ①免疫组化显示S100A2和β-catenin主要定位于癌细胞核和(或)细胞质,而pGSK-3β主要定位于癌细胞质；②Western blot结果显示S100A2、β-catenin和pGSK-3β在结肠癌组织中均高表达,明显高于癌旁正常组织(P＜0.01),三者在结肠癌Dukes C+D期中的表达明显高于A+B期(P＜0.01),在有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组(P＜0.01)；③S100A2分别与β-catenin、pGSK-3β的表达呈明显正相关(r=0.637,P＜0.01;r =0.626,P＜0.01).结论 S100A2可能通过调节Wnt/β-catenin通路关键分子而参与结肠癌的发生、发展.
-
凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1在C反应蛋白诱导人脐静脉内皮细胞组织因子表达中的作用
目的 研究凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1( lectin-type oxidized LDL receptorl,LOX-1)在C-反应蛋白(c-reactive protein,CRP)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)组织因子(tissue factor,TF)表达中的作用.方法 用人重组质粒pTracer CMV2-CRP转染HUVECs细胞,分正常对照组、空质粒GFP组和CRP-GFP组(n=3),RT-PCR、Western blot检测TF、LOX-1 mRNA和蛋白表达.Western blot检测各组P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表达.CRP-GFP组分别加LOX-1阻断剂、ERK1/2阻断剂(U0126)、JNK阻断剂(SP600125),Western blot检测TF蛋白.结果 用表达人CRP的质粒转染HUVECs显著增加LOX-1 mRNA和蛋白表达[(0.70 ±0.03) vs (0.24 ±0.01),(0.661 6±0.020 0) vs(0.255 8±0.0400),P＜0.05]、TF的mRNA和蛋白表达[(0.442±0.040)vs(0.146 0 ±0.030 0),(0.727 4±0.020 0)vs(0.217 4 ±0.020 0),P＜0.05].CRP启动了ERK1/2 MAPK,未启动JNKMAPK.CRP上调TF表达被ERK1/2阻断剂而非JNK阻断剂阻断.抗LOX-1的中和抗体显著减少CRP诱导的TF mRNA和蛋白表达[(0.2640±0.0300) vs (0.4420±0.0400),(0.3244±0.0400) vs (0.7274±0.0200),P＜0.05].结论 CRP诱导HUVECs细胞LOX-1表达上调,并通过LOX-1受体这一新途径上调TF表达,且CRP通过ERK1/2 MAPK信号途径非JNK MAPK途径上调了HUVEC细胞TF的表达.
-
激光捕获显微切割技术诊断石蜡切片中早期胚胎成分与亲权关系的研究
目的 通过激光捕获显微切割技术捕获石蜡切片中胚胎绒毛细胞,进行低体积扩增,实现胚胎个体分型,证实亲子关系.方法 通过激光捕获显微技术捕获石蜡切片上胚胎绒毛细胞,设置20、30、40个细胞数目组,分别捕获不同数目绒毛细胞,利用低体积扩增仪进行1.5μl体系PCR扩增,采用3130遗传分析仪得出胚胎个体分型图谱,并比较各细胞数目组胚胎个体识别的检出率、等位基因丢失率和非特异性扩增情况.后进行实际案例应用.结果 捕获20个胚胎绒毛细胞即可获得胚胎个体分型,40个细胞数目组的胚胎分型检出率高,等位基因丢失率和非特异性扩增率低.20个细胞数目反之.结论 激光捕获显微切割技术结合低体积扩增技术可应用于石蜡切片,实现胚胎与母体成分的精确分离并确证亲权关系.
-
类风湿关节炎早期诊断指标的筛选及鉴定
目的 寻找类风湿关节炎的早期诊断指标.方法 采用双向电泳、MALDI-TOF/TOF质谱分析等方法从类风湿关节炎滑膜组织中筛选并鉴定特异性自身抗原,进一步建立该抗体的ELISA检测方法,测定30例早期类风湿关节炎患者及30例健康对照者血清中的抗体水平,并分析抗体水平与疾病活动度的相关性.结果 早期类风湿关节炎血清中筛选并鉴定出特异性的锰超氧化物歧化酶抗体.ELISA法检测早期RA血清中锰超氧化物歧化酶抗体D(450)值均值(1.72 ±0.35)明显高于正常人血清(0.95±0.34)(P ＜0.000 1).在早期RA患者血清中锰超氧化物歧化酶抗体阳性率为63.3％,且该抗体水平与RF、CCP、CRP呈明显正相关.结论 锰超氧化物歧化酶抗体可能作为类风湿关节炎早期诊断与疾病活动性预测的指标之一.
-
阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡过程中活性氧水平的变化
目的 探讨阿糖胞苷诱导人MDS细胞株MUTZ-8细胞凋亡的可能机制.方法 将细胞分为以下5组:阴性对照组、0.1 μmol/L Ara-c组、1μmol/L Ara-c组、10 μmol/L Ara-c组、10 μmol/L Ara-c +62.5 μmol/L ALA组.用MTT法测定阿糖胞苷对各组细胞抑制率的影响,用Annexin V-FITC/PI双染法及Hoechst33258荧光染色观察阿糖胞苷对各组细胞凋亡的影响,并用流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位的变化.运用二氢二氯荧光素( DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,通过荧光显微镜及流式细胞仪检测各组细胞内活性氧水平的变化.结果 MTT结果提示,阿糖胞苷处理组细胞增殖抑制率高于阴性对照组,二者相比差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪结果提示,不同浓度的阿糖胞苷作用MUTZ-8细胞后,凋亡率明显升高,线粒体膜电位明显下降,与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪及荧光显微镜检测均显示,阿糖胞苷作用后细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)明显上升.而加入抗氧化剂α-硫辛酸后细胞内ROS表达水平下降.结论 阿糖胞苷明显抑制了人MDS细胞株MUTZ-8的生长并诱导其凋亡,可能与阿糖胞苷影响了细胞内ROS水平有关.
-
TNF-α激活NF-κB信号通路抑制培养成纤维细胞SDF-1α分泌
目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)激活核因子-κB (NF-κB)信号通路对成纤维细胞生物学行为的影响.方法 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)进行体外培养,将细胞分为TNF-α组、TNF-α+吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组及对照组,处理后的细胞采用CCK-8方法检测细胞增殖情况、Western blot和细胞免疫荧光检测IκBα蛋白表达与定位、ELISA检测基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的分泌.结果 TNF-α在一定浓度范围内对成纤维细胞起到明显的促增殖作用,CCK-8检测显示TNF-α组在不同浓度和不同时相点MEF的光密度值与TNF-α+ PDTC组及对照组相比差异显著(P＜0.05)；免疫荧光染色显示IκBα主要分布于细胞质,TNF-α组与对照组和TNF-α+ PDTC组相比,IκBα荧光强度明显减弱.Western blot结果发现TNF-α刺激后30 min,TNF-α组和TNF-α+ PDTC组IκBα蛋白表达[(3 070.0 ±39.0)vs(1 421.7±75.3),(3 212.2±57.5) vs(1 468.2 ±45.8),P＜0.05]均降至低值,随时间推移逐渐恢复,TNF-α+ PDTC 组IκBα蛋白表达显著高于TNF-α组[(3 112.3 ±89.7)vs(2 610.4 ±26.9),P＜0.05]；ELISA检测发现TNF-α作用后成纤维细胞SDF-1α的分泌呈减少趋势[(15.9±1.6)vs (12.7±0.6),P＜0.05],TNF-α+PDTC组则能显著逆转TNF-α作用[ (23.5 ±3.2)vs(15.0 ±1.2),(21.6±0.4)vs(12.7±0.6),P＜0.05],促进SDF-1α分泌.结论 TNF-α能通过激活NF-KB通路,影响小鼠胚胎成纤维细胞的增殖并抑制SDF-1α分泌.
-
Mimics及颈椎模型用于下颈椎椎弓根个体化置钉的应用研究
目的 利用快速成型技术及Mimics软件设计一种新的下颈椎椎弓根钉个体化置入技术,并探讨其临床应用意义.方法 对16例成人下颈椎标本行CT扫描收集数据,导入Mimics软件对标本进行三维重建.利用Mimics相关功能在三维重建图像上寻找下颈椎椎弓根佳轴线并测量椎弓根相关参数,制定椎弓根螺钉个体化置入方案.然后将三维重建图像以STL格式导入三维打印机,制作出下颈椎的实体模型,根据个体化置钉角度置入导向针.依照制定的个体化指定参数,并配合实体模型的直观指导,在标本上进行置钉.置钉后标本行CT扫描,判断置入准确性.利用上述方法对2例患者进行个体化置钉,术后通过CT扫描验证螺钉位置准确性.结果 成功建立了与标本相似度极高的下颈椎三维重建图像和实物模型,通过测量结果设计了每个椎弓根的置钉参数.共在标本上置入148枚椎弓根螺钉,140枚位于椎弓根骨皮质之内,8枚稍穿破椎弓根骨皮质.对患者置入10枚椎弓根螺钉,CT示螺钉位置满意.结论 用Mimics软件对下颈椎进行三维重建,制定个体化置钉参数,同时配合实物模型的直观指导,提供了一种下颈椎椎弓根钉个体化置钉的方法,利用该法能提高置钉安全性.
-
褪黑素作为睡眠诱导剂在儿童睡眠脑电图检查中的应用
目的 对比褪黑素与水合氯醛作为不合作儿童脑电图检查时睡眠诱导剂的效果,探讨安全、对脑电波背景活动影响更小的睡眠诱导方法.方法 纳入我院2010年1月至2011年9月需EEG检查的不合作患儿,与家长签知情同意书,根据就诊日期的单双日分组,单数入水合氯醛组,双数人褪黑素组.所有病例于临检查前30 min服用褪黑素或水合氯醛合剂,并记录病情诊断、睡眠潜伏期、睡眠持续时间、困倦时间、对脑电波的影响及不良反应.结果 ①褪黑素成功诱导入睡较水合氯醛低(76.1％ vs 89.7％,P＜0.05).②入睡成功的患儿,褪黑素和水合氯醛的入睡潜伏期无明显差异(M-W检验,P＞0.05),但褪黑素组的睡眠持续时间和困倦时间较水合氯醛组短(M-W检验,P＜0.05).③水合氯醛影响脑电背景活动β快波活动较褪黑素增多(18.4％vs6.0％,P＜0.05).④水合氯醛组16例呕吐,1例行走协调不良；褪黑素组4例兴奋,两组均无其他不良反应发生.结论 褪黑素诱导睡眠的成功率虽较水合氯醛低,但睡眠持续时间和困倦时间较短,脑电快波活动干扰较少,无明显不良反应,可作为睡眠诱导剂的一个选择.
-
胸腔积液细胞块免疫组化染色的病理诊断价值
目的 探讨细胞块切片免疫组化染色对胸腔积液病理诊断与鉴别诊断的应用价值.方法 收集78例患者胸腔积液,分别行常规细胞涂片和细胞块切片,HE染色观察细胞的形态特点,免疫组化S-P法检测CK7、MOC-31、CD15、BerEP4、CEA、TTF-1、CK5/6、Calretinin、WT-1和Desmin的表达,筛选肺腺癌和间皮病变鉴别诊断相关的免疫标记组合.分析临床与随访资料与不同细胞学诊断方法结果之间的差异.结果 细胞块制片阳性检出率高于常规细胞涂片,二者HE染色对胸腔积液细胞阳性检出率无显著性差异(P＞0.05).细胞块免疫组化明显优于单纯细胞涂片,二者比较具有显著差异性(x2=4.17,P＜0.01),其对恶性胸腔积液的分型诊断符合率达97.2％,组合性抗体检测显示,肺腺癌中CK7、MOC-31、CD15、BerEP4、CEA、TTF-1呈高表达,间皮病变显示CK5/6、Calretinin、WT-1、Desmin高表达.结论 胸腔积液细胞块对诊断恶性胸腔积液具有一定的价值,结合免疫组化选择适当的抗体组合对肺腺癌和恶性间皮瘤的鉴别诊断具有一定的意义,值得临床推广应用.
-
重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9对小鼠胚胎肝脏干细胞诱导分化的影响
目的 探讨重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白-9( Adv-BMP-9)诱导小鼠胚胎肝干细胞向成熟肝细胞定向分化的影响.方法 将已构建的表达BMP-9、肝细胞生长因子(HGF)和绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒,分别感染小鼠胚胎肝干细胞,诱导其分化,然后采用半定量PCR、Real-time PCR、细胞免疫荧光、荧光素酶报告基因检测等方法检测甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)和细胞角蛋白18(CK18)等肝细胞标志物的表达.结果 半定量及Real-time PCR检测,诱导7d后的BMP-9组、HGF组AFP的mRNA表达△△Ct值分别为(0.027±0.003)、(0.023±0.002),较GFP对照组(0.103 ±0.018)显著下降,ALB的mRNA表达△△Ct值分别(0.041±0.005)、(0.031 ±0.001),较GFP对照组(0.013±0.002)明显升高,CK18的mRNA表达△△Ct值分别(0.094 ±0.003)、(0.083 ±0.007),较GFP对照组(0.040 ±0.008)明显升高(P＜0.05)；细胞免疫荧光染色,诱导7d后的细胞胞浆内表达肝细胞特有的ALB、CK18等蛋白,而对照组几乎无表达；荧光素酶报告基因检测,诱导1、4、7d的BMP-9组、HGF组的ALB表达荧光素酶A值分别[(5 509.35±213.08),(33 198.14±666.39),(50 815.03±1 730.75)]、[(5 539.25±132.62),(31 400.71±2 622.39),(49 088.28±1 868.03)],较GFP对照组(4 732.49 ±68.22),(9 407.71 ±487.84),(20 894.83±1 100.54)明显升高(P＜0.05).结论 BMP-9有诱导小鼠胚胎肝脏干细胞向成熟肝细胞样细胞分化的作用,并且BMP-9对小鼠胚胎肝干细胞的诱导分化作用甚至和传统的肝干细胞诱导分化因子HGF相当.
-
Nek2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响
目的 研究RNA干扰Nek2表达对卵巢癌SKOV3细胞侵袭能力的影响以及相关的分子机制.方法 设计合成3条针对Nek2基因的siRNA,转染至SKOV3细胞中,采用Real-time RT-PCR和Western blot技术筛选出抑制效率高的Nek2-siRNA序列,用Transwell方法检测转染该序列的SKOV3细胞侵袭能力的改变,并用Western blot方法检测Nek2-siRNA转染后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表达的变化.结果 ①RNA干扰序列2对SKOV3细胞中Nek2的抑制效果明显；②与未转染组和阴性对照组相比,转染了Nek2-siRNA的SKOV3细胞侵袭能力明显下降(P＜0.01)；③Western blot检测表明,与未转染组和阴性对照组相比,Nek2-siRNA转染48 h后SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9的表达明显下调,而TIMP-1的表达明显上调(P＜0.01).结论 Nek2 -siRNA能有效得沉默SKOV3细胞中Nek2的表达,通过下调MMP-2、MMP-9的表达,上调TIMP-1的表达,从而抑制SKOV3细胞的侵袭转移.
-
2-NBDG检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力的研究
目的 评估荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)即2-NBDG(2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diaxol-4-yl) amino]-2-deoxyglucose,2-NBDG)作为光学探针检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的能力.方法 间接免疫荧光法测定H9c2心肌细胞葡萄糖转运体(GLUT-1、GLUT-4)的表达.用不同浓度2-NBDG和不同孵育时间处理H9c2心肌细胞,探讨其量效-时效关系,荧光酶标仪测定2-NBDG孵育H9c2细胞的适浓度和时间.以2-NBDG适浓度孵育H9c2心肌细胞,同时用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞内荧光强度差异,观察心肌细胞摄取2-NBDG情况.使用竞争性抑制剂D型葡萄糖(D - Glu)与2-NBDG共同孵育H9c2心肌细胞,观察D-Glu对2-NBDG的竞争性抑制情况.结果 间接免疫荧光法显示H9c2心肌细胞高表达GLUT-1、GLUT-4.2-NBDG孵育H9c2心肌细胞的适浓度和时间分别为100 μmol/L和30 min.共聚焦成像和流式细胞仪均显示H9c2心肌细胞能有效摄取2-NBDG,加入D-Glu后使心肌细胞内荧光信号强度分别降低27.0％和46.7％ (P ＜0.01).运用2-NBDG检测细胞葡萄糖摄取的方法,证实胰岛素能促进H9c2心肌细胞葡萄糖的摄取.结论 2-NBDG能迅速被高表达GLUT-1、GLUT-4的H9c2心肌细胞摄取并滞留于细胞内,且可以被D-Glu竞争性抑制,表明2-NBDG可作为一个方便且敏感的探针,用于检测细胞葡萄糖摄取的能力.
-
转染hRAMP1的间充质干细胞对心肌梗死后局部血管再生的作用
目的 探讨腺病毒介导hRAMP1基因转染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对心肌梗死后新生血管生成及其可能机制.方法 密度梯度离心并贴壁培养获得兔骨髓MSCs,并分别转染pAd2-hRAMP1或pAd2 -EGFP后给予CGRP刺激,ELISA法测定细胞培养上清液中VEGF和HGF水平.建立心肌梗死再灌注兔模型,采用随机数字表法分为MSChRAMP1组(pAd2-hRAMP1转染MSCs移植)、MSCnull组(pAd2-EGFP转染MSCs移植)组和对照组(等量生理盐水注射)(n＝10).2周时Western blot检测心肌梗死组织促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达；4周时TTC染色测定心肌梗死面积比；抗CD31免疫组化染色检测心肌梗死区及梗死周边区新生毛细血管密度.结果 CGRP诱导72 h后MSChRAMP1培养上清液中VEGF和HGF水平显著高于MSCnull组[VEGF:(1 859.4±267.4) vs(1 344.4±137.2)；(1 052.2±239.3)vs (683.8±150.5) pg/ml,P＜0.05].细胞移植后4周TTC染色检测显示MSChRAMP1组心肌梗死面积显著降低对照组和MSCnull组[(10.1±2.9)％vs(30.6±2.7)％和(22.5±3.2)％,P＜0.05]；抗CD31免疫组化染色显示,MSChRAMP1组的梗死区和梗死交界区新生毛细血管计数明显高于对照组和MSCnull组(P＜0.05)；Western blot检测显示细胞移植后2周MSChRAMP1组心肌梗死区促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达显著高于对照组和MSCnull组(P＜0.05).结论 MSChRAMP1能通过提高梗死区心肌组织中促血管生长因子VEGF和HGF的表达,促进心肌梗死区和梗死交界区新生毛细血管生成,降低心肌梗死面积.
-
CD200/CD200R在大鼠脓毒症急性肺损伤中的表达
目的 研究脓毒症致大鼠急性肺损伤肺组织中CD200/CD200R的表达.方法 采用盲肠结扎穿孔术复制大鼠脓毒症急性肺损伤(ALI)模型,将36只大鼠随机分为急性肺损伤组和假手术组,每组设8、16、24h3个观察时间点,急性肺损伤组为A、B、C组,假手术组与之相对应的时间点分别为D、E、F组,各组大鼠在相应的时间点行动脉血气分析、检测IL-4、肺湿/干质量比测定、肺组织病理学观察,采用RT-PCR法检测肺组织CD200/CD200R mRNA表达、免疫印迹法检测肺组织CD200/CD200R的蛋白表达.结果 ①CD200/CD200R蛋白及mRNA表达情况:急性肺损伤A、B组较相应对照D、E组表达显著降低(P＜0.05),而急性肺损伤C组与相应对照F组比较无显著差异(P＞0.05)；B组较A组表达显著上升(P＜0.05),C组较B组表达显著上升(P＜0.05),急性肺损伤组随着病情进展CD200/CD200R的蛋白及mRNA逐渐恢复至假手术对照组水平,各组间差异有统计学意义(P＜0.05)；②动脉血气分析:A组较相应对照D组无显著差异(P＞0.05),B、C组较相应对照E、F组显著降低(P＜0.05)；急性肺损伤组随着病情进展动脉血氧分压逐渐降低；③IL-4检测:A组较相应对照D组无显著差异(P＞0.05),B、C组较相应对照E、F组显著升高(P＜0.05),急性肺损伤组随着病情进展IL-4浓度逐渐增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；④肺湿/干质量比:A组较相应对照D组无显著差异(P＞0.05),B、C组较相应对照E、F组显著升高(P＜0.05),急性肺损伤组随着病情进展肺湿/干质量比逐渐增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；肺组织病理变化:急性肺损伤组随病情进展,病理变化逐渐加重,假手术组病理学变化不明显.结论 急性肺损伤组大鼠肺组织CD200/CD200R蛋白及mRNA早期表达降低,至24 h恢复至假手组水平,IL-4呈逐渐升高趋势,参与肺损伤炎症反应,提示CD200/CD200R参与脓毒症ALI.
-
卒中患者排泄需要知觉受损尿失禁的临床特征研究
目的 了解卒中患者排泄需要知觉受损( impaired awareness,IA)尿失禁(urinary incontinence,UI)的临床特点.方法 前瞻性连续观察225例住院急性卒中患者,评估排尿事件和排尿知觉、行脑CT/MRI检查；9例IA-UI患者检测尿动力学；随访患者6个月的存活和尿控制情况.结果 发生UI 89例,其中急迫性UI 32例,IA-UI 57例.IA-UI的排尿愿望(P＜0.01)、漏尿前膀胱充盈感(P＜0.01)、对漏尿的知觉(P＜0.05)较急迫性UI差,高龄(P＜0.05)、全或部分前循环综合征(P＜0.01)和有顶叶新病灶(P＜0.05)者比较多,Barthel指数(P＜0.01)和认知(P＜0.05)评分差；尿动力学显示尿道压力低或逼尿肌活动过度；6个月存活和尿控制均较急迫性UI差(P＜0.01).结论 高龄、排尿知觉障碍、前循环脑损害重、尿动力学不同和结局不良是卒中后IA-UI的临床特征.
-
4种感染性腹泻病原菌免疫磁珠-多重PCR快速检测体系的建立
目的 基于免疫磁珠分离及多重PCR技术建立出血性大肠埃希菌、福氏志贺菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌的快速检测体系.方法 根据出血性大肠埃希菌uidA、福氏志贺菌ipaH、空肠弯曲菌hipo及副溶血弧菌tlh的基因序列设计特异性引物,优化免疫磁珠分离过程及多重PCR扩增中的各个环节,建立上述4种病原菌同步快速扩增体系,并鉴定该体系特异性、敏感性.结果 发现Mg2+浓度对该体系影响大,在Mg2+浓度为4 mmol/L时扩增效率高；该体系对4种病原菌的敏感性分别为:出血性大肠埃希菌2.7×10 cfu/ml、福氏志贺菌6.4×10 cfu/ml、空肠弯曲菌7.6×10 cfu/ml、副溶血弧菌3.6×10 cfu/ml.结论 建立了出血性大肠埃希菌、福氏志贺菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌的免疫磁珠-多重PCR快速检测体系,该体系特异性及敏感性高,检测过程简单,结果稳定,可应用于临床诊断及食品卫生监管中致病菌的快速检测.
-
珠子参总皂苷通过促进Nrf2转位拮抗新生大鼠心肌细胞氧化应激损伤
目的 观察珠子参总皂苷H2O2所致氧化应激损伤保护效应并探讨其机制.方法 Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H2 O2建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100、200 μg/ml)孵育24h后,观察细胞搏动频率,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量,同时检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量,实时定量PCR技术检测珠子参总皂苷对SOD/GPX/CAT反应系统SOD1、SOD2、SOD3、CAT和GPX1基因表达的影响,Western blot检测珠子参总皂苷对细胞质和细胞核Nrf2蛋白表达的影响.结果 H2O2明显影响细胞活力和诱导凋亡(IC50为500 μmol/L),珠子参总皂苷(100、200 μg/ml)处理能显著增加心肌细胞搏动频率和存活率(P＜0.01),抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内ROS含量(P＜0.01)；减轻H2O2所致乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK释放量,同时能够升高SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量(P ＜0.05,P＜0.01)；上调SOD/GPX/CAT反应系统基因表达水平和促进Nrf2核移位,增加心肌细胞核内Nrf2的表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论 珠子参总皂苷抑制心肌细胞氧化应激损伤,与Nrf2抗氧化途径的激活和清除ROS有关.
-
颅内动脉瘤形态学特征及破裂风险CTA评估
目的 研究颅内动脉瘤的形态学特征与破裂风险的关系,初步预测动脉瘤的破裂风险.方法 回顾性分析154例194个颅内动脉瘤资料,其中破裂组61例(82个动脉瘤)和未破裂组93例(112个动脉瘤),测量瘤体长度、瘤颈宽度,计算瘤体长度与瘤颈宽度的比值(AR值),观察有无子囊、子囊个数及位置,分析以上指标与破裂的相关性.结果 破裂组瘤体长度(4.95 ±4.80) mm,平均瘤颈宽度(3.55 ±3.10)mm,平均AR值(1.21 ±0.68),47.6％有子囊；未破裂组瘤体长度(2.75 ±2.65) mm,平均瘤颈宽度(2.85±1.90)mm,平均AR值(0.96 ±0.55),14.3％有子囊.两组间有无子囊的比较差异有统计学意义(P＜0.05).颅内动脉瘤破裂的临界瘤体长度、瘤颈宽度和AR值分别为3.65、3.35 mm和1.135；瘤颈宽度＜3.35 mm时的破裂风险是＞3.35 mm时的2.05倍,瘤体长度＞3.65 mm时的破裂风险是＜3.65 mm时的3.76倍,AR值＞1.135时的破裂风险是＜1.135时的3.18倍,有子囊的破裂风险是无子囊的5.64倍.结论 颅内动脉瘤的瘤体长度、瘤颈宽度、AR值和子囊形成是动脉瘤破裂的危险因素,瘤体越长、瘤颈越小、AR值越大或有子囊形成,动脉瘤破裂风险越大.
-
磁共振波谱成像联合直肠指检及血清PSA在前列腺癌诊断中的价值
目的 初步探讨磁共振波谱成像(MRS)联合直肠指检(DRE)与血清前列腺特异抗原(PSA)在前列腺癌诊断中的应用.方法 选取血清PSA异常84例男性患者行前列腺MRS和DRE并与病理结果对照.再分析MRS联合DRE及不同水平PSA(低危组4 ng/ml＜ PSA＜ 10 ng/ml,中危组10 ng/ml≤PSA≤20 ng/ml和高危组PSA＞ 20 ng/ml)诊断前列腺癌的灵敏度(Se)、特异度(Sp)和准确度(AR).结果 病理证实前列腺癌41例、非前列腺癌43例(良性增生41例,炎症1例,结核1例).单纯MRS诊断前列腺癌的Se、Sp和AR分别为85.4％、83.7％和84.5％,与病理诊断有统计学一致性(K=0.69,P＜0.05)；MRS联合PSA低危组、中危组和高危组诊断的Se、Sp和AR分别为75.0％、90.0％和84.4％,66.7％、73.3％和71.4％,95.7％、87.5％和93.5％；MRS联合DRE诊断Se、Sp和AR分别为88.9％、87.5％和88.6％；MRS同时联合PSA高危组及DRE诊断Se、Sp和AR分别增加至95.7％、100％和95.8％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 MRS诊断前列腺癌具有无创和简便优点,其联合直肠指检及PSA有助于提高诊断的准确性.
-
肝素诱导血小板减少综合征形成1例
1临床资料患者,男性,51岁,因右下肢疼痛、肿胀伴有胸闷、憋气5d,以“右下肢深静脉血栓形成,肺栓塞”于2011年3月24日入院.查体体温:36.8℃,心率:100/min,脉搏:22/min,血压:150/100 mmHg.双肺呼吸音清,右肺呼吸音弱.右下肢中度肿胀,皮肤张力高,有压痛,左下肢未见异常.双腿周径比(左/右):膝上15 cm:52/53,膝下12 cm:34/37.
-
肠系膜特发性纤维化并腹内疝1例
1临床资料患者,男性,49岁,2012年5月3日因“脐周持续性隐痛7h”入院.查体:肝脾未触及,脐周轻压痛,无腹膜刺激征,肠鸣音正常.血常规:白细胞14.1×109/L,中性粒细胞百分比89.2％;腹部B超:腹盆腔积液.全腹增强CT提示:部分小肠肠管水肿增厚,小肠扩张积液,小肠较结肠强化低,肠系膜肿胀改变、血管增粗,考虑小肠不全性梗阻并肠系膜血管病变可能.
-
Cantrell综合征的CT诊断及其临床价值
Cantrell综合征(Cantrell's syndrome)是一种极罕见的先天性畸形[1],包含脐上腹壁中线缺损、胸骨下部缺损或裂开、横膈前部缺损、心包部分缺损、心内或心脏大血管先天畸形等.在新生儿中其发病率为1/65 000,男女之比为1.35∶1[2].笔者回顾性分析3例经手术证实的Cantrell综合征患儿的CT表现,旨在提高对该种疾病的影像诊断水平,进而对临床选择治疗方案、指导临床手术及观察术后疗效提供重要价值.
-
吉非替尼维持治疗晚期肺腺癌长期生存1例
吉非替尼是表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI),也是研究为成熟的第1个非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)靶向药物.目前,研究表明,EGFR-TKIs一线治疗EGFR突变的晚期NSLCLC患者中位无进展生存期(PFS)已达到9～10个月,总生存时间(OS)达2年以上;即使用于维持或二线及以上治疗,明显获益的也是EGFR突变患者[1].我们经治1例吉非替尼维持治疗已生存8年的肺腺癌患者,现报告如下.
-
莱姆病伴直立性低血压误诊为糖尿病心血管自主神经病1例
直立性低血压是公认的糖尿病心血管自主神经病变(cardiovascular autonomic diabetic neuropathy,CADN)一个重要表现,但是我们应当注意糖尿病患者出现的直立性低血压不一定是糖尿病引起的,还有其他一些比较少见的病因.我科于2011年7月收治1例神经型莱姆病合并糖尿病患者表现为直立性低血压,易导致误诊,现报告如下.
-
内镜下侧脑室不同手术入路的比较
目的 通过神经内镜对经血管灌注处理的尸头标本侧脑室解剖的研究,比较不同手术入路下对侧脑室区各结构的显露特点,为临床手术入路的选择提供参考.方法 9例成年国人尸头,模拟侧脑室的不同手术入路,包括额角、枕角、三角区和颞角入路,工作镜下所见脑室内不同结构的毗邻关系及特征,比较不同入路的特点.结果 经额角入路手术空间较大,前至额角,后至枕角,下至三脑室及导水管；从枕角入路可借助脉络丛定位；三角区入路,颞角入路毗邻重要神经功能区,空间相对狭窄,局部脉络丛,血管丰富.结论 不同的入路在处理脑室内疾病中有着不同的特点.根据病变的解剖关系,选择合适的手术入路才是成功的关键.
-
脑保护装置在颈动脉支架成形术中的应用
目的 探讨使用脑保护装置下颈动脉支架成形术(carotid artery stenting,CAS)的有效性及安全性,比较目前常用的3种脑保护装置的优劣.方法 回顾性分析56例颈动脉狭窄患者使用脑保护装置行支架成形术治疗的临床资料.结果 手术成功率98.2％ (55/56),全组术后27.3％ (15/55)发现栓子,其中Spider为30.0％(9/30),Angioguard为21.7％ (5/23),MO.MA为33.3％ (1/3)；两组远端滤网保护装置的成功率比较差异无统计学意义(P＞0.05),术后发现栓子阳性率差异也无统计学意义(P＞0.05).治疗后残余狭窄率均低于20％.1例发生栓塞事件；1例不适合使用脑保护装置而放弃手术.结论 使用脑保护装置的颈动脉支架成形术是安全、有效的方法；临床常用的3种脑保护装置各有其优缺点,使用恰当的脑保护装置可以使颈动脉支架成形术更安全.
