大鼠蛛网膜下腔出血后皮质中VDAC1的表达与神经元凋亡的关系

目的 观察大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后大脑皮质中VDAC1表达和皮质神经元凋亡,以及两者之间的关系,探讨电压依赖性阴离子通道蛋白1(voltage-dependent anion channel1,VDAC1)参与SAH后早期脑损伤的发生机制.方法 将SD大鼠108只按随机数字表法分为假手术组(n=18只)和SAH组(n=90,下设SAH后6、12、36、48、72 h5个时相点,每个时相点18只).采用视交叉前池注血法建立SAH模型,应用RT-PCR、免疫组化和Western blot分别检测大鼠SAH后不同时相点VDAC1在mRNA水平、蛋白质水平的表达变化.凋亡原位末端标记法( Tunel)观察SAH后不同时相点大脑皮质神经元凋亡.结果 大脑皮质中VDAC1表达,无论在mRNA水平,还是在蛋白质水平,在SAH后12 h均明显增加[mRNA(2.40 ±0.19),蛋白(1.14±0.08)],于36 h时表达达高峰[mRNA( 3.40±0.65),蛋白(1.72±0.22)],于48 h开始下降[mRNA( 1.94±0.30),蛋白(0.97±0.07)],至72 h时基本恢复正常(P＞0.05).TUNEL法检测显示大鼠SAH后12 h,大脑皮质中神经元凋亡细胞数开始增加,36 h达到高峰,之后逐渐降低(P＜0.05),72 h时降至正常(P＞0.05).结论 SAH后不同时间点VDAC1表达水平的动态变化与神经元凋亡发生、发展的时相性是一致的,提示VDAC1可能通过细胞凋亡途径参与SAH后早期脑损伤的病理过程.

1.1倍全长HBV基因组克隆转染细胞系的建立

目的 构建pneo-CH9/3091真核表达质粒,并建立其稳定表达的HepG2细胞系.方法 质粒pCH9/3091包含HBVl.1倍体和CMV启动子,将PCR扩增出的带有新霉素(neo)抗性的基因片段插入pCH9/3091构建成重组质粒pneo-CH9/3091.重组质粒经酶切,测序验证正确后,通过脂质体介导转入人肝癌细胞HepG2.G418筛选后,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测所得单克隆细胞培养上清液的HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),PCR检测细胞上清液的病毒颗粒,Western blot检测细胞内HBV核心蛋白(HBcAg)的表达,以及Southern blot检测细胞内核心颗粒HBV DNA的复制情况.结果 有3株细胞系培养上清HBsAg和HBeAg检测呈现阳性,且HBV C区片段可通过PCR扩增出来,Western bot结果 提示只有细胞株HepG2 -H7可以表达HBV核心蛋白.Southern blot结果 说明此细胞株基因组中有HBV基因组的稳定整合,并且能在细胞内检测出HBV DNA复制中间体.结论 成功构建1株HBV稳定整合细胞株HepG2-H7,能持续产生HBV病毒颗粒.

高效液相色谱法测定止喘合剂中黄芩苷的含量

目的 建立止喘合剂中黄芩苷含量的测定方法.方法 色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-5.0%磷酸(60:40),流速为1.0 ml/min,检测波长为280 nm,柱温为25℃.结果 黄芩苷的线性范围为0.952 ～ 6.664 μg/ml,回归方程为y=48.13647x -9.74570(r =0.999 98),平均回收率为96.21%,相对标准偏差(RSD)为0.373 7% (n =6).结论 所建立方法 简单、专属性强、重现性好,可用于止喘合剂中黄芩苷的测定.

高表达OAZI-1增加小鼠黑素瘤B16-F1细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的 检测高表达OAZI-1的小鼠黑素瘤B16-F1细胞对抗癌药物多胺类似物CPENSpm敏感性的影响并探讨其作用机制.方法 高表达OAZI-1的B16-F1细胞经CPENSpm处理后,MTT法检测细胞增殖；QT-RT-PCR检测细胞内OAZI-1、ODC和OAZ的mRNA表达水平；反相高效液相色谱法检测细胞内多胺含量；化学发光法分析细胞内SMO酶活性.结果 高表达OAZI-1显著增加B16-F1细胞对CPENSpm的敏感性,QT-RT-PCR结果 显示,OAZI-1高表达增加ODCmRNA但降低OAZ mRNA水平,CPENSpm处理对ODC和OAZ的mRNA水平无进一步影响.与对照细胞相比,CPENSpm处理能更显著性地降低OAZI-1高表达细胞中的多胺含量,同时更强地诱导SMO酶的活性.结论 CPENSpm处理能在更大程度上耗竭OAZI-1高表达的B16-F1细胞中的多胺,由此对该肿瘤细胞显示出更大的细胞毒性.

p15基因干扰对肝癌耐药的影响

目的 探讨小于扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制p15基因对肝癌耐药的影响.方法 采用浓度递增法用顺铂(cisplatin,CDDP)诱导肝癌细胞HepG2建立动态耐药模型HepG2/CDDP/2.0.脂质体法将针对p15 mRNA的siRNA( Y1、Y2、Y3)和阴性对照siRNA-F转染至HepG2/CDDP/2.0细胞,筛选佳转染浓度和有效的干扰序列.MTT法检测HepG2/CDDP/2.0对CDDP的半数抑制浓度(IC50)、流式细胞仪分析HepG2/CDDP/2.0细胞周期分布、RTPCR和Western blot分别检测p15 mRNA和p15蛋白、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达.结果 成功建立肝癌耐药模型HepG2/CDDP/1.6,系中度耐药.RT-PCR显示siRNA Y3干扰效果佳.转染后G1期细胞比例分别为53.8%(24 h),51.6% (48 h),48.8% (72 h)(P＜0.05)；RT-PCR和Western blot显示p15表达降低,p-gp表达增加.结论 在肝癌耐药的动态过程中,随着耐药时间的延长,G1期的比例增加.抑制p15的表达可降低G1期的比例,增加肿瘤耐药性.

2709例低出生体质量患儿情况分析

目的 了解重庆低出生体质量患儿情况并作5年动态比较.方法 回顾性分析2005年1月至2009年9月重庆医科大学附属儿童医院新生儿诊疗中心收治的2 709例低出生体质量患儿的临床资料,应用SPSS 16.0软件进行统计学分析.结果 ①5年来,低出生体质量患儿在同期住院新生儿中的比例始终＞11%.②住院新生儿中,不同出生体质量组的患儿其平均病死率比较,差异有统计学意义(x2= 50.070,P＜0.05);出生体质量在1 500～2 000 g的患儿其病死率为正常出生体质量住院患儿的1.69倍,体质量＜1 500 g的患儿病死率为正常出生体质量患儿的8.79倍.③男性患儿平均出生体质量较女性患儿重(t =2.247,P＜0.05).④重庆低出生体质量患儿以早产为主,平均占87.4%.⑤初产儿平均出生体质量较经产儿(产次≥2)高(F= 15.146,P＜0.05).⑥低出生体质量患儿的母亲中,45.6%曾患各类感染性疾病.⑦近50.0%的孕母在生育旺盛期以外的年龄段进行生产,40.7%的母亲处于无业状态.结论 尽可能防止早产,在可控范围内减少多胎妊娠并适度控制产次等方面是重庆市低出生体质量疾控工作的重要环节,加强对低出生体质量儿,尤其是极低出生体质量儿的监测护理,提高其存活率,是降低重庆市新生儿死亡率的关键.

1,25-( OH)2D3及LPS对2型糖尿病肾病尿毒症患者单核细胞维生素D受体表达的影响

目的 探讨1,25-(OH)2D3及TLR4配体(脂多糖,LPS)对2型糖尿病(T2DM)和糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)尿毒症患者血清干预的单核细胞维生素D受体(VDR)表达的影响,进一步探索1,25-( OH)2D3在T2DM和DN炎症性免疫反应中的作用.方法 分离研究对象(健康对照组、T2DM组和DN尿毒症组)外周血血清,孵育THP-1单核细胞,然后于含或不含10-7 mol/L的1,25-(OH)2D3培养液中培养48 h后,再用终浓度为1μg/ml的LPS干预24h,收集单核细胞和培养上清.采用RT-PCR检测VDR mRNA表达,Western blot、免疫荧光检测THP-1单核细胞内VDR蛋白表达.ELISA法检测细胞培养上清IL-6和IL-10浓度.结果 与正常对照组比较,在LPS的刺激下T2DM组和DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR mRNA水平下调[对照组(0.99±0.25)；T2DM组(0.65±0.24);DN尿毒症组(0.62±0.27),P＜0.05]；DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR蛋白表达比正常对照组和T2DM组显著下调[对照组(0.48 ±0.05)；T2DM组(0.50±0.06)；DN尿毒症组(0.20±0.01),P＜0.01],且LPS增强以上患者血清孵育的THP-1单核细胞炎症细胞因子IL-6的分泌[对照组(15.13±1.61)；T2DM组(24.06 ±2.92)；DN尿毒症组(70.77 ±5.48),P＜0.05]；而1,25-(OH)2D3可部分阻断上述作用.结论 LPS能下调T2DM和DN尿毒症患者单核细胞VDR mRNA和蛋白的表达,引起促炎和抗炎细胞因子失调.1,25-(OH)2D3可部分逆转LPS的作用,对T2DM和DN尿毒症可能具有一定的保护作用.

起搏器囊袋破溃12例临床分析

目的 探讨起搏器囊袋破溃的常见原因及合理的处理方法.方法 通过回顾性分析我院心血管内科2007年1月至2011年3月的12例起搏器囊袋破溃的基本资料,比较不同处理措施的临床疗效.结果 ①12例患者平均年龄75.3岁,男性7例,女性5例,其中11例合并高血压、心衰及糖尿病.3例为早发型、9例为迟发型囊袋破溃.②随访(31.6±6.8)个月.8例在对侧安置新的起搏系统,2例取出原起搏器,2例原电极与原起搏器被深埋在患侧胸大肌深面.所有患者新的起搏系统工作良好.③所有患者原电极未拔除.6例残余电极前浅埋皮下者,半数残余电极刺破皮肤.4例残余电极和2例原电极深埋者,均达到完全痊愈.结论 起搏器囊袋破溃原因复杂,加强局部清创、深埋残余电极等可获得较好的疗效.

509例儿童肾活检病理及临床分析

目的 探讨儿童肾小球疾病病理特点及其与临床表现的关系.方法 回顾性分析2007年1月至2010年5月在重庆医科大学附属儿童医院进行肾活检的509例患儿病理及临床资料,比较原发性肾小球疾病和继发性肾小球疾病的病理和临床特征.结果 ①509例肾活检患儿中,原发性肾小球疾病315例,继发性肾小球疾病184例,遗传性肾小球疾病和肾血管疾病分别为6例、2例,肾小管间质性肾炎2例.②与原发性肾小球疾病组比较,继发性肾小球疾病组平均受检年龄大于原发性肾小球疾病组[(10.54±2.72)岁vs(8.62±3.28)岁],受检时平均病程较原发性肾小球疾病组短(30.00 d vs 60.00 d).③原发性肾小球疾病组常见的临床表现和病理类型分别为肾病综合征、系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN),继发性肾小球疾病组中分别为过敏性紫癜性肾炎和MsPGN.④近年来本院受检儿童肾小球疾病构成比发生变化.原发性肾小球疾病仍为常见的肾小球疾病,常见的病理类型是MsPGN和IgA肾病.孤立性血尿及狼疮性肾炎比例增加.结论 肾脏病理检查技术的开展促进了肾小球疾病诊疗水平的提高,同时该技术可能也直接影响肾小球疾病住院构成比的变化.

阿格列汀治疗三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎小鼠的实验研究

目的 观察DPP-4抑制剂Alogliptin对三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎模型小鼠结肠的MPO值,血清IL-8、TNF-α和GLP-2水平的影响,并探讨Alogliptin对炎症性肠病(IBD)的治疗机制.方法 雄性BALB/c小鼠48只,分为6组,每组8只,分别为正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶治疗组(520 mg/kg),Alogliptin高、中、低剂量组(1、0.3、0.1mg/kg).模型组采用三硝基苯磺酸(TNBS)对BALB/c小鼠进行灌肠,制作溃疡性结肠炎小鼠模型,经灌胃给予药物治疗后,观察DPP-4酶抑制剂Alogliptin对肠炎小鼠腹泻,组织形态损伤,结肠组织MPO酶活力,血清IL-8、TNF-α和GLP-2含量的影响.结果 与模型组相比,Alogliptin高、中剂量组能够改善肠炎小鼠临床症状,减轻结肠黏膜损伤,显著降低TNBS诱导的溃疡性结肠炎小鼠的DAI评分(P＜0.01),并且治疗组小鼠结肠组织MPO酶活性、血清IL-8和TNF-α的浓度较模型组显著降低(P＜0.05)；而Alogliptin治疗组小鼠血清GLP-2的含量较模型组和正常组都有显著升高(P＜0.05).结论 DPP-4酶抑制剂Alogliptin能够有效抑制小鼠肠道炎性细胞的浸润,减轻肠黏膜的病理性损伤,对TNBS诱导的肠炎小鼠具有显著的治疗作用.

大鼠子宫内膜慢性缺血引起子宫内膜端粒酶和c-kit表达减少

目的 观察大鼠子宫内膜慢性缺血后子宫内膜厚度、子宫内膜腺体数目的 变化、同时检测端粒酶(TERT)、POU5f1、c-kit和caspase3的表达.方法 实验组通过结扎8周龄SD大鼠双侧子宫动脉构建慢性子宫内膜缺血性损伤模型(实验组),对照组为假手术组.通过阴道细胞涂片判定性周期.3个月过后,于发情期处死SD大鼠,取子宫内膜组织HE染色比较实验组和对照组子宫内膜厚度、腺体数量；免疫组织化学技术检测端粒酶和caspase3的表达；荧光定量PCR检测c-kit、POU5f1和caspase3的表达；Western blot检测端粒酶、c-kit和caspase3的表达情况.结果 和对照组比较,模型组内膜厚度( 502±148)、腔上皮厚度(17.20±4.98)、腺上皮厚度(9.17±1.96)、内膜腺体数目(18.9±4.8)以及内膜腺体体积分数(0.15±0.02)和对照组内膜厚度(800±130)、腔上皮厚度(29.46±9.27)、腺上皮厚度(15.68±2.50)、内膜腺体数目(30±5.5)以及内膜腺体体积分数(0.40±0.16)比较均显著降低(P＜0.05)；模型组c-kit mRNA和蛋白表达水平[(0.23±0.01)、(0.31±0.13)]较对照组[(1.00±0.06)、(0.75±0.09)]显著降低(P＜0.05)；模型组caspase3 mRNA和蛋白表达水平[(1.43±0.22)、(0.67±0.23)]明显高于对照组[(1.00±0.16)、(0.40±0.08),P＜0.05],端粒酶蛋白表达水平(0.64±0.19)明显低于对照组[(0.87±0.12),P＜0.05].结论 子宫内膜慢性缺血以及子宫内膜慢性缺血引起的端粒酶和c-kit表达下调,caspase3表达增加可能是薄型子宫内膜发病的一个因素.

RAS阻断剂对实验性高甲状腺素毒性兔心房电生理和离子通道表达的影响

目的 研究肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)在甲状腺素诱导的心房电重构和离子通道重构中的作用,探讨RAS阻断剂对甲状腺素诱导的心房重构的影响.方法 40只新西兰大白兔分为4组(n=10):正常对照、甲状腺素、贝那普利及厄贝沙坦干预组.腹腔注射左旋甲状腺素(Levothyroxine,L-Thy)建立兔甲状腺素毒性模型,贝那普利组和厄贝沙坦组同时给予贝那普利或厄贝沙坦.4周后,通过心内电生理仪测定心房有效不应期,连续高频刺激诱发心房颤动(atrial fibrillation,AF),评价心房频率适应性和AF诱发率,荧光定量PCR检测L型Ca2+通道(Cav1.2和Cav1.3亚基)和lto电流相关亚基(kv1.4、kv4.2和kv4.3)mRNA表达,Western blot检测L型Ca2+通道α亚基和kv4.2蛋白表达.结果 贝那普利和厄贝沙坦明显降低AF诱发率并明显改善高甲状腺素诱导的频率适应性变化.贝那普利组(76.63±4.44)ms和厄贝沙坦组(79.00±4.95)ms心房有效不应期较甲状腺素组(75.13±5.41)ms无明显延长(P＞0.05).L型Ca2+通道蛋白表达在贝那普利组(1.15±0.24)和厄贝沙坦组(1.08±0.17)明显高于甲状腺素组(0.56±0.11)(P ＜0.01),但对高甲状腺素引起的Ito电流相关亚基变化无明显抑制作(P＞0.05).结论 RAS可能参与了高甲状腺素性诱导的心房电生理和离子通道改变,贝那普利和厄贝沙坦可以改善L-Thy诱导的心房电重构和离子通道重构,并降低高甲状腺素致AF性.

PPARγ和PCNA在口腔鳞癌组织的表达及临床意义

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)与增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在口腔鳞癌中(oral squamous-cell carcinoma,OSCC)的表达及其生物学意义.方法 采用免疫组织化学和流式细胞术检测50例口腔鳞状细胞癌、癌旁黏膜(距瘤缘2 cm)和切缘正常黏膜(距瘤缘≥5 cm,镜下未见癌浸润)标本中PPARγ和PCNA的表达.结果 PPARγ在癌组织中的阳性表达率为68.0% (34/50),高于癌旁组织(26.0%,13/50)和正常黏膜组织(2.0%,1/50) (P ＜0.05)；PCNA在癌组织中的阳性表达率为72.0% (36/50),高于癌旁组织(26.0%,13/50)和正常黏膜组织(4.0%,2/50)(P＜0.05).流式细胞术检测PPARγ在鳞癌组织中的表达为(396.56±33.39),明显高于癌旁组织(333.36±15.93)及正常口腔黏膜组织(289.28±13.80)(P＜0.05).PCNA在鳞癌组织中的表达为(543.11±41.55),明显高于癌旁组织(456.97±23.86)和正常口腔黏膜组织(409.40±40.07) (P ＜0.05).PPARγ和PCNA的表达与细胞分化程度、淋巴结转移均有相关性(PPARγ,r分别为0.497、0.392,P＜0.05；PCNA,r分别为0.324、0.561,P＜0.05),且二者在口腔鳞癌中的表达呈正相关.结论 口腔鳞癌组织中PPARγ和PCNA的表达均升高,可能与口腔鳞癌的发生、发展相关.

尿中修饰核苷水平在膀胱移行细胞癌诊断及预测预后中的意义

目的 探讨尿中7种修饰核苷M1A、ac4C、A、06-MeG、MTA、1 -MeI、1-MeG检测在膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma,BTCC)诊断及预测预后中的意义.方法 选取经病理证实为膀胱移行细胞癌患者45例为膀胱癌组,其中初发32例,复发13例；组织学分级:Ⅰ级22例,Ⅱ级16例,Ⅲ级7例；浸润性癌16例,非浸润癌29例.选取16例正常人为对照组.应用高效液相色谱/电喷雾-四极杆-飞行时间质谱技术(HPLC/ESI-Q-TOF-MS)检测膀胱癌组和对照组尿液中M1A、ac4C、A、06-MeG、MTA、1-MeI、1-MeG 7种修饰核苷水平(核苷含量/肌酐).结果 BTCC组尿液M1A、ac4C、06-MeG和1-MeI水平[分别为(4.61±1.82)、(0.63±0.29)、(0.46±0.35)和(12.28±9.74)],均显著高于对照组[(2.85±0.68)、(0.35±0.15)、(0.21±0.11)和(5.39±2.41),P＜0.01]；诊断准确度由大到小为1-MeI＞ M1A＞ ac4C＞ 06-MeG,且1-MeI与M1A联合检测可达到对膀胱癌高的灵敏度和特异性,分别为92.45%和87.50%.BTCC组织学分级之间以及浸润性与非浸润性之间尿液修饰核苷水平差异均无统计学意义(P＞0.05).复发患者尿液M1A和ac4C水平分别为(6.74±1.23)、(0.83±0.41),均显著性高于初发患者[(3.93±1.43)、(0.57±0.20),P＜0.05],M1A与其复发时间呈负相关(r= -0.895,P＜0.01).结论 尿液M1A联合1-MeI检测在膀胱移行细胞癌诊断中意义重大,M1A和ac4C有助于预测膀胱移行细胞癌患者预后.

沉默Peroxiredoxin Ⅰ基因增强乳腺癌细胞放射敏感性及其作用机制的实验研究

目的 采用RNA干扰技术沉默过氧化物酶Ⅰ(peroxiredoxin Ⅰ,PrxⅠ)基因,观察乳腺癌MCF-7细胞对X线敏感性变化,探讨其作用机制.方法 将Prx ⅠshRNA真核表达载体pGPU6-Prx Ⅰ和阴性对照质粒pGPU6-HK转染入乳腺癌MCF-7细胞中,经G418稳定筛选后RT-PCR和Western blot检测PrxⅠ表达变化.6 MV X线照射6 Gy后48 h,流式细胞术检测细胞的活性氧水平、细胞周期和细胞凋亡；MTT法测定细胞增殖能力；克隆形成实验观察克隆形成率,计算Do、N、Dq、SF2及放射增敏比(sensitive enhancement ratio,SER)等放射生物学参数,Western blot法检测Rad51及γ-H2 AX蛋白变化.结果 获得2个稳定转染细胞株:pGPU6-HK和pGPU6-Prx Ⅰ.RT-PCR和Western bolt检测显示pGPU6-Prx Ⅰ组中Prx Ⅰ mRNA和蛋白表达均明显抑制.6 Gy的X线照射48 h后,pGPU6-Prx Ⅰ及联合照射(ionizing radiation,IR)组细胞中的活性氧水平、G1期细胞和细胞凋亡明显增加,而细胞增殖能力和S期细胞明显降低,Western blot分析表明Rad51蛋白表达降低,而γ-H2 AX蛋白表达升高(P＜0.05),以pGPU6-Prx Ⅰ+IR组变化显著,其Rad51蛋白表达下降了79.3%,而γ-H2AX蛋白表达升高了3.7倍.pGPU6-PrxⅠ组细胞的Do、N、Dq和SF2值分别为1.354、3.106、1.547和0.504,均低于pGPU6-HK组,SF2时的SER为1.353.结论 下调PrxⅠ基因表达可提高乳腺癌MCF-7细胞的放射敏感性,其作用机制与细胞内活性氧清除能力减弱、DNA双链断裂增加及DNA损伤后修复能力降低有关.PrxⅠ可能是1个理想的肿瘤放射增敏分子靶点.

shRNA抑制p115表达对胃癌体外血管形成的影响

目的 初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi- vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制.方法 采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株.利用Western blot、RT-PCR和细胞免疫荧光方法 检测转染后的p115抑制效应及其对MIF、p-Akt、VEGF-A的调控情况；采用细胞活性检测实验、Transwell体外侵袭实验和血管形成实验方法 分别检测转染p115 shRNA的胃癌BGC-823细胞对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖,迁移和血管形成的影响.结果 p115 shRNA-1318转染后胃癌BGC-823细胞p115、MIF、p-Akt和VEGF-A的蛋白及mRNA表达明显抑制(P＜0.01)；细胞免疫荧光:与对照组相比,p115 shRNA组p115、MIF及VEGF-A的色泽暗红且抑制率分别为63%、65%、68%；细胞活性检测:与对照组相比,p115 shRNA组HUVECs增殖能力明显降低(P＜0.05)；Transwell侵袭实验:p115 shRNA组HUVECs较空白对照组,阴性对照组(shNC)细胞侵袭能力明显降低,24h穿过Transwell的细胞数分别为:(39±5)、(174±4)、(179±4),与对照组相比差别具有统计学意义(P＜0.05)；血管形成实验:p115 shRNA组HUVECs不能在Matrigel 胶上形成网状结构,空白对照组、shNC组成管指数分别为:(1 289±37)、(1 329 ±33),p115 shRNA组成管指数为:(422±41),与对照组相比差别具有统计学意义(P＜0.05).结论 p115基因沉默下调胃癌的VEGF-A表达及抑制血管生成；其分子机制可能与MIF通过PI3K/Akt信号通路途径调节胃癌血管形成有关.

MSCT评价颌面部颈部筋膜间隙感染及蔓延途径

目的 观察多层螺旋CT( multi-slice computed tomography,MSCT)评价颌面部颈部筋膜间隙感染及其蔓延途径.方法 回顾性分析43例临床颌面及颈部感染患者资料,观察病变MSCT表现及蔓延途径.结果 蜂窝织炎MSCT征象为筋膜间隙脂肪密度增高、积液及积气,肌肉肿胀增厚；脓肿为中央低密度周围壁强化.病变位于咀嚼肌间隙14例、颈深筋膜包裹肌群7例、口底间隙6例、内脏间隙6例、颈动脉间隙5例、咽后间隙4例、舌骨上下广泛间隙3例和扁桃体周围间隙1例；其中5例下行性纵隔炎,1例坏死性筋膜炎.感染可蔓延人与其相通连的筋膜间隙,可累及邻近毗邻结构及下行人纵隔和胸腔.结论 MSCT能准确诊断颌面部颈部筋膜间隙感染,显示蔓延途径.

PD-L1+ HeLa细胞对人外周血活化T细胞的免疫调节作用

目的 探讨人宫颈癌细胞表达PD-L1对人外周血T细胞的免疫调节作用.方法 采用PD-L1质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株,将PD-L1+ HeLa细胞与PHA刺激活化的人外周血T淋巴细胞混合培养,MTT法检测T细胞的增殖水平,流式细胞术分析T细胞凋亡率和CD8+/CD4+T细胞比例；ELISA检测PD-L1+ HeLa细胞与PHA刺激活化的人外周血T淋巴细胞混合培养上清液IFN-γ的含量.结果 MTT检测显示与PD-L1+ HeLa混合培养组的T细胞增殖光密度值为(0.31±0.02),明显低于与PD-L1 - HeLa混合培养组的T细胞和对照组T细胞,分别为[(0.62±0.02)和(0.59±0.03),P＜0.01]；T细胞凋亡率明显高于与PD-L1 - HeLa混合培养组和对照组T细胞,分别为(32.7%、17.9%和18.3%)；CD8 +/CD4+T细胞比值稍低于PD-L1 - HeLa混合培养组和对照组T细胞(分别为0.86、0.91和0.89)；与PD-L1+ HeLa混合的T细胞培养上清液IFN-γ的含量低于与PD-L1 - HeLa混合培养组和对照组T细胞,分别为[(801.1±20.5) pg/ml、(1 006.2±30.2 )pg/ml和(1 070.2±113.3) pg/ml,P＜0.01].结论 PD-L1明显抑制人外周血活化T细胞增殖促进其凋亡并下调其免疫功能.

雌激素受体GPR30、ERα和PR在甲状腺癌组织中的表达及相关性

目的 探讨雌激素受体GPR30、ERα和PR在甲状腺癌组织中的表达及其相关性.方法 选取重庆医科大学附属第一医院病理科2006 - 2009年101例甲状腺癌组织标本,包括乳头状腺癌83例、滤泡状腺癌9例、髓样癌6例、未分化腺癌3例,患者年龄45.9(9 ～93)岁；采用免疫组化S-P法检测甲状腺癌组织中GPR30、ERα和PR的表达,分析其与肿瘤临床病理特征之间,以及相互间的差异.结果 甲状腺癌组织中GPR30、ERα和PR主要表达于细胞质,少量表达于细胞核,阳性表达率分别为78.2%、85.1%、79.2%；除在≥45岁年龄组患者肿瘤中ERα表达率高于＜45年龄组外(r=-0.2383,P＜0.05),GPR30和ERα的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、病理类型、TNM分期等临床病理因子及患者MACIS预后评分无统计学差异(P ＞0.05)；GPR30与ERα(r =0.2518)、PR(r=0.3207)的表达呈正相关.结论 雌激素受体GPR30和ERα共同参与甲状腺癌的发生、发展,可能是潜在的治疗靶点.

原发性高血压患者治疗依从性行为特征及影响因素分析

目的 探讨重庆市社区原发性高血压患者治疗依从性行为特征及血压控制情况,并分析人口社会学因素对依从性的影响.方法 采用目的 抽样方法,使用自行编制的原发性高血压患者治疗依从性量表,对重庆市3家社区卫生服务中心及3所三级甲等医院门诊和入院24h内的317例高血压患者进行调查.采用多元逐步回归分析患者人口社会学因素对依从性的影响.结果 患者血压控制率为34.4%,血压控制达标者的依从性得分比未达标者高(P＜0.01).逐步回归分析显示,性别、家庭人均月收入、医疗费用支付方式是影响高血压患者依从性的主要因素(P＜0.01,P＜0.05).结论 重庆市社区高血压患者血压控制率较低,对治疗的依从性较差.应将男性、家庭收入低、无医疗保险、在职、居住农村的高血压患者作为干预的重点对象.

甲型H1N1流感病毒性肺炎呼吸衰竭危险因素分析

目的 分析我院收治的46例甲型H1N1流感病毒性肺炎(甲流肺炎)患者的临床特点,探讨其发展为呼吸衰竭的危险因素.方法 收集我院2009年10月至2010年1月收治的46例甲型H1N1流感病毒性肺炎患者的一般情况、症状、体征、实验室结果,治疗方案等资料,并分为呼吸衰竭组和非呼吸衰竭组.结果 14例甲流肺炎患者发生呼吸衰竭,其中1例自动出院.所有非呼吸衰竭患者痊愈.呼吸衰竭组与非呼吸衰竭组患者在呼吸困难(10例vs6例)、咯血(10例vs5例)、淋巴细胞减少(158±18)/μl vs (192±26)/μl、氧合指数(182±23) mmHg vs (426±45) mmHg、器官功能不全评分中位数(4vs1)、入院时胸片浸润影(2.3±1.3) vs (1.2±0.8)存在显著差异(P＜0.01).与非呼衰竭组相比,呼吸衰竭组患者住院中位时间长(26dvs5 d,P=0.000 1).多因素Logistic回归分析显示甲流肺炎患者发生呼吸衰竭与发病至首剂奥司他韦超过48 h,淋巴细胞计数≤600/μl,入院时SOFA评分≥4分,X线检查肺部浸润影≥75%相关.结论 发病至首剂使用奥司他韦超过48 h,淋巴细胞计数≤600/μl,入院时SOFA评分≥4分,X线检查肺部浸润影≥75%是甲流肺炎发生呼吸衰竭的危险因素.

少突胶质细胞相关microRNA差异性调控大脑和小脑神经前体细胞的增殖

目的 探讨少突胶质细胞相关microRNA (miRNA)对中枢神经系统神经前体细胞增殖的作用.方法 利用Dicerl loxp/loxp基因型小鼠和Oligl-Cre品系小鼠杂交获得miRNA加工酶Dicer基因条件性敲除小鼠,再用免疫荧光染色和BrdU标记等技术检测这种Dicer条件性敲除小鼠大脑和小脑中神经前体细胞的增殖,以及脊髓中新生神经元的变化情况.结果 Dicer条件性敲除小鼠大脑中神经前体细胞增殖加快,而小脑中增殖细胞数目较正常小鼠减少(12%,P＜0.05).此外脊髓中神经元的数目并未受到影响.结论 少突胶质细胞相关miRNA对中枢神经系统的胶质细胞的发生和增殖具有时空特异性或差异性调节作用.

结肠回盲部巨大息肉尼龙圈套结扎术后穿孔1例

1临床资料 患者,男性,69岁,因“5个月前出现解暗红色血便1次,量约30 g”就诊,外院行肠镜诊断:(1)慢性结肠炎;(2)结肠息肉.因患者之后未再便血,故未处理.2个月前患者感下腹坠胀、大便次数增多于2011年3月13日就诊于我院.既往有乙肝病史20年,高血压病史7年,入科后完善相关检查后行肠镜下肠息肉切除术,术中见:回盲部见3 cm大小息肉样肿块,表面黏膜充血肿胀,考虑息肉太大,直接切除容易出血,予以尼龙圈套器套扎蒂部以期择日再行电凝切除(图1).于息肉顶端及基底取活检以明确性质.因患者术中发现息肉较大,嘱其绝对卧床休息,并给予止血药物,术后5h左右患者突感右中下腹轻微胀痛不适,随即解鲜血便一次,量约250 ml.

股骨上段内生软骨瘤恶变1例

内生软骨瘤为一种良性肿瘤,继发恶性改变较为罕见[1].我院收治1例内生软骨瘤恶变的病例,现报告如下.1临床资料 患者,女性,77岁,因“发现左大腿上段包块伴疼痛半年”入院.患者8年前(2003年5月)不慎跌倒致左大腿疼痛、肿胀,功能障碍,立即于当地医院行X线片检查示:股骨上段包块,并发骨折.转入我院行左股骨上段病变刮出、植骨及骨折切开复位带锁髓内针内固定术,术中取病变组织送病理检查示:内生软骨瘤.术后3个月行髓内针远端锁钉拔出术,骨折线较模糊.术后3年复查X线片示:左股骨病理骨折基本愈合.遂行髓内针取出术.入院半年前(2010年9月),患者发现左大腿上段包块,入我院取局部组织病理检查示:内生软骨瘤恶变.余辅助检查未发现明确转移征象,故建议患者行手术切除为主的治疗方案,有行保肢手术的可能.

奥曲肽治疗肝硬化乳糜性腹水1例

1临床资料 患者,男性,64岁,因“确诊肝硬化12年,黑便1d,意识障碍1h”于2010年5月11日入院.12年前患者诊断为酒精性肝硬化,2年前和1年前因食管胃底静脉曲张破裂出血,2次行内镜下食管静脉曲张套扎术,1年前患者出现乳糜性腹水,予以保肝、利尿、输注白蛋白等对症支持治疗,乳糜性腹水无明显好转,腹水生长速度快,需定期大量腹腔穿刺放液治疗,此次入院前1天患者自行腹腔穿刺放液5 000 ml,意识障碍1h入院.

172例神经外科术后颅内感染的危险因素分析

颅内感染是神经外科严重并发症.重型颅脑损伤行去骨瓣减压术中头皮、颅骨、硬脑膜均已开放,许多因素可导致患者并发颅内感染.此种颅内感染常与脑积水、脑水肿、脑膨出等同时存在,相互影响而加重,同时抗生素难以通过血脑屏障,临床治疗困难,其一旦出现,将直接影响患者的预后.文献[1]报道颅脑手术后颅内感染率为2%～4%.我科2003年1月至2010年12月收治的5 324例颅脑手术后发生颅内感染的172例,现将相关危险因素分析及相关护理报告如下.

乳酸杆菌增强树突状细胞诱导的CTL细胞抗宫颈癌移植瘤作用

目的 探讨乳酸杆菌在树突状细胞( dendritic cell,DC)诱导的CTL细胞抑制宫颈癌移植瘤中的作用及其机制.方法 30只雌性裸鼠移植瘤模型采用单纯随机抽样分为3组,①Lb-DC疫苗组:瘤旁注射乳酸杆菌宫颈癌细胞冻融抗原致敏的CTL细胞(1×106/200μl)；②DC疫苗组:瘤旁注射官颈癌细胞冻融抗原致敏的CTL细胞(1×106/200μ1)；③对照组:注射PBS液200μl.FCM检测肿瘤细胞凋亡率以及Fas膜蛋白的含量；免疫组化法观察移植瘤Survivin蛋白的表达.结果 Lb-DC疫苗组移植瘤治疗后体积明显小于治疗前(P＜0.01),抑瘤率为85.6%；DC疫苗组可明显抑制瘤体的生长,抑瘤率为57.4%.Lb-DC疫苗组肿瘤细胞凋亡率及Fas膜蛋白含量均高于DC疫苗组与对照组(P＜0.0l).Survivin蛋白在肿瘤细胞中的表达:Lb-DC疫苗组大部分为阴性；对照组大部分为强阳性,DC疫苗组为弱阳性.结论 乳酸杆菌辅佐DC疫苗可以明显抑制裸鼠宫颈癌HeLa移植瘤的生长,通过上调Fas膜蛋白,下调Survivin蛋白增强DC疫苗促进肿瘤细胞凋亡.

第三军医大学大坪医院头颅伽玛刀中心

重庆市高血压流行特征分析

目的 了解重庆市高血压流行特征及影响因素.方法 利用多阶段分层随机抽样的方法,从居民健康档案中获得重庆市18岁及以上常住居民的一般情况和身体测量指标,运用多因素Logistic回归分析高血压的影响因素.结果 共完成现场调查和身体测量18521人,高血压患病率20.3%,男性为20.4%,女性为20.3%,男女无统计学差异(P=0.951)；高血压患病率随年龄的增高、饮酒频率的增高呈上升趋势(P＜0.001),随文化程度的升高、锻炼频率的增加呈下降趋势(P＜0.001)；有高血压家族史者患病率高于无家族史者(P＜0.001)；超重肥胖者高血压患病率高于体质量正常者(P＜0.001).结论 重庆市18岁及以上居民高血压患病率高,危险因素普遍存在,防控形势严峻,应加大高血压预防控制力度.

双镜联合下胆总管切开取石一期缝合术的临床分析

目的 探讨腹腔镜与纤维胆道镜双镜联合下胆总管切开取石一期缝合术的可行性、优点及方法.方法 腹腔镜与纤维胆道镜双镜联合下胆总管切开取石一期缝合术(laparoscopic common bile duct exploration and primary suture,LBEPS,n =40)与开腹胆总管切开取石T管引流术病例(open choledocholithotomy T-tube drainage,OCTD组,n=40)在手术时间、出血量、术后胃肠功能恢复时间、胆漏发生率、住院时间、住院费用等指标进行对比分析.结果 LBEPS组与OCTD组手术时间分别为(69.25±21.30)、(108.24±19.86)min;住院时间分别为(7.69±2.34)、(15.73±6.20)d;术后胃肠功能恢复时间分别为(22.65±9.35)、(48.33±7.45)h;两组存在统计学差异(P＜0.05).术中出血分别为(91.68±21.3)、(103.14±18.50) ml;住院费用分别为(9765.81±823.32)、(9038.56±896.43)元；胆漏发生率分别为2.5%和0.0%；以上各指标无统计学意义(P＞0.05).结论 双镜联合下胆总管切开取石一期缝合术较经典开腹胆总管切开取石T管引流术创伤小,手术时间短、恢复快、安全可靠,值得在临床中推广使用.

某军医大学2007-2009年校直干部体检结果分析

目的 了解某军医大学校直干部健康状况及其流行病学特征.方法 通过学校校务部卫生处,收集2007-2009年某军医大学全部参加校直干部健康体检的相关资料,采用SPSS 13.0进行资料管理和分析.结果 校直干部2007、2008、2009年参检率分别为63.46% (712/1122)、67.93% (754/1110)、65.53%(791/1207),检出健康异常情况排列在前4位的分别是肝胆异常(45.38%)、高血脂(19.18%)、高尿酸血症(18.28%)和高血压(9.90%),男性人群和行政干部健康状况较差.结论 应加强健康体检工作重要性宣传和组织管理,重视男性、行政干部及中年人群的健康保健工作.

原发性孤立肠系膜上动脉夹层MSCT血管造影特点及其与腹痛的关系

目的 分析原发性孤立肠系膜上动脉夹层(spontaneous isolated superior mesenteric artery dissection,SISMAD)的形态学特点及其与腹痛程度的关系.方法 回顾性分析10例SISMAD患者临床诊疗记录和MSCT血管造影影像资料.分析SISMAD形态特征,即夹层的开口位置和终止点、夹层的长度以及病变区域血管腔的狭窄程度,并根据Yun的标准进行分型.采用视觉模拟疼痛评分系统对患者腹痛状况进行评分.Spearman法分析患者腹痛严重程度与肠系膜上动脉夹层影像类型及夹层长度之间的相关性.结果 本组SISMAD患者夹层开口位置在距肠系膜上动脉起始部1.7～2.8 cm.MSCT血管成像显示SISMAD I型4例(40%),Ⅱ型5例(50%),Ⅲ型1例(10%).夹层长度为22 ～117(64±34) mm.疼痛的严重程度与病变范围呈正相关(r =0.50,P=0.03),但与分型无相关性(r=0.16,P=0.08).结论 MSCT血管成像技术能够明确诊断SISMAD并准确分型,其MSCT特征与临床表现有一定的相关性.

醋酸／碘染色法在宫颈癌筛查中运用评价

目的 评价基层医生采用醋酸／碘染色后肉眼观察法(VIA/VILI)在农村地区筛查子宫颈癌及癌前病变的效果.方法 采用醋酸染色法( acetic acid,VIA)和碘染色法(lugol's iodine,VILI)对重庆市涪陵区30 -59岁的的已婚妇女进行人群为基础的子宫颈癌筛查,VIA或VILI阳性者行阴道镜检查,在异常病变处取活检并进行病理组织诊断；通过连续2年筛查的结果,评价该筛查方案的效果.结果 2006 -2010年对10 279人连续筛查2次,VIA/VILI阳性率14.50%,阳性者中1 487人行阴道镜检查,阴道镜转诊率14.47%,32.28%在病变处取活检；首次病理确诊61例子宫颈上皮内瘤变( intraepithelial neoplasia,CIN)I、15例CINⅡ、25例CINⅢ、2例早浸／浸润性子宫颈癌,第2轮筛查病理确诊26例CIN I、11例CINⅡ、3例CINⅢ、0例早浸／浸润性子宫颈癌；经2轮筛查后CIN I、CINⅡ、CINⅢ、早浸／浸润性宫颈癌的检出率分别为0.85%、0.25%、0.27%、0.02%.结论 经济欠发达的农村地区,由经过培训的基层医生采用肉眼观察,以阴道镜检查作为技术保障,对30-59岁妇女进行子宫颈癌及癌前病变的筛查是可行的.

不同糖代谢人群补体C3超敏C反应蛋白与胰岛素抵抗指数的相关性分析

目的 观察不同糖代谢人群补体C3、超敏C反应蛋白(high-sensitive C-reactive protein,hs-CRP)水平变化及其与胰岛素抵抗指数(HOMA index,HOMA2-IR)之间的相关性.方法 选择重庆医科大学附属第一医院内分泌科2008年1月至2010年12月就诊的168例患者,其中2型糖尿病(T2DM)患者54例[男性36例,女性18例,年龄(57.7±12.0)岁]、糖耐量异常(IGT)者54例[男性34例,女性20例,年龄(58.5±9.3)岁]、糖耐量正常(NGT组)60例[男性40例,女性20例,年龄(57.2±6.5)岁],分别测定体质量、身高、血压、腰围、空腹血浆葡萄糖(FPG)、糖负荷后2h血糖(2 hPG)、血清胰岛素(Fins)、血脂、C3及hs-CRP等,比较各组HOMA2-IR.结果 T2DM组、IGT组血清C3和hs-CRP均显著高于年龄、BMI匹配的NGT组(P＜0.01).在T2DM、IGT、NGT组,C3均与HOMA2-IR正相关(r=0.27,0.49,0.33,P＜0.05),而hs-CRP仅在NGT组、IGT组与HOMA2 -IR呈显著正相关(r=0.22、0.28,P＜0.05).在校正年龄、性别后C3仍是HOMA2-IR的主要影响因素(P＜0.05).结论 不同糖代谢状态人群中,随着糖代谢紊乱的加重血清C3和hs-CRP水平均逐渐升高,C3与HOMA2-IR的相关性均较hs-CRP更为密切.

脑出血破入脑室的高龄重症患者死亡危险因素分析

目的 总结脑出血破人脑室的高龄重症患者的临床资料,探讨相应住院死亡风险.方法 回顾性收集我院脑出血破入脑室的高龄重症患者病历资料,通过x2检验筛住院死亡的危险因素,经多因素Logistic回归分析确定住院死亡的独立危险因素.结果 经x2检验筛选,血肿体积、出血累及脑室范围、中线移位、放弃有创治疗、再次出血等与高龄重症脑出血患者的住院死亡有关(x2值分别为36.064、12.424,59.566、193.661、10.072).经过多因素Logistic回归分析,放弃有创治疗和再次出血确立为住院死亡的独立危险因素(P＜0.05).结论 对于脑出血破入脑室的高龄重症患者,应通过采用微创手术技术结合防范再次出血的有效措施降低住院死亡率.